鲎试剂在抗淋巴细胞免疫球蛋白热原检测中的应用

报道了鲎试剂在抗淋巴细胞免疫球蛋白内毒素检查中的应用。在用鲎试剂检测细菌内毒素时 ,按中国药典的要求对鲎试剂灵敏度进行标定 ,并作干扰实验 (增强或抑制实验 ) ,然后用鲎试法与家兔法同时测定 15批抗淋巴细胞免疫球蛋白。结果发现三批鲎试剂的灵敏度标示值均正确 ,五批抗淋巴细胞免疫球蛋白半成品在最大有效稀释度 (MVD)时对试验无干扰 ,这两种方法测定结果的符合率达到 91.7%。从而表明鲎试法很有可能代替家兔法     

刺五加注射液的细菌内毒素检查探讨

细菌内毒素检查法与热原检查法相比 ,成本低、快速简便、灵敏度高。为探讨采用细菌内毒素检查法检测刺五加注射液热原的可行性 ,我们进行了鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验 ,结果表明刺五加注射液稀释 2 .85倍 ,用灵敏度为 0 .2 5 EU·ml-1的鲎试剂作细菌内毒素检查 ,仍有干扰。1　实验材料　　鲎试剂 (批号 0 30 4 1 9,标示灵敏度 0 .5 EU·ml-1;批号 0 30 5 0 3,标示灵敏度 0 .2 5 EU· ml-1,福州新北生化工业有限公司 ) ;细菌内毒素工作标准品 (批号 2 0 0 30 3,规格 1 5 0 EU·支 -1,中国药品生物制品检定所 ) ;鲎试剂溶解水 (批号 …     

四种氨基酸原料细菌内毒素检查法的研究

依据中国药典2000年版“细菌内毒素检查法”,通过鲎试剂的干扰试验,研究注射用氨基酸原料中细菌内毒素检查法的可行性。结果在2~16倍稀释级下,L-缬氨酸(c=2.5%)和L-异亮氨酸(c=2.5%)对鲎试剂无干扰,检测细菌内毒素的鲎试剂灵敏度≤5.0×102EU.L-1,而在16倍稀释级范围内,L-脯氨酸(c=4.5%)和L-亮氨酸(c=2.0%)对鲎试剂检查法有抑制作用。结论为注射用L-异亮氨酸和L-缬氨酸用灵敏度为5.0×102EU.L-1的鲎试剂检查其细菌内毒素方法可行,可以代替家兔法检查热原。     

乙型脑炎灭活疫苗细菌内毒素检查方法的研究

将细菌内毒素检查法(凝胶法)扩大应用于乙脑灭活疫苗的质量控制及其内毒素的检测.按<中国药典>及<中国生物制品规程方法>方法,复核鲎试剂灵敏度、确定疫苗的L值、计算MVD、进行干扰试验及内毒素的检测.疫苗L值确定为300 EU/mL,MVD为1 200倍.用灵敏度0.25 EU/mL的鲎试剂,疫苗的最大非干扰浓度为将其稀释30倍,将此疫苗稀释120倍进行干扰试验,对内毒素的检测无干扰作用.以此法对15批疫苗进行内毒素检查均呈阴性反应.结果显示,此法用于乙脑灭活疫苗质量控制及其内毒素检查是可行的.     

苦碟子注射液细菌内毒素检查法的探讨

目的：建立苦碟子注射液静脉点滴用药时细菌内毒素的检查方法。方法：采用2个厂家的鲎试剂对苦碟子注射液进行干扰试验。结果：鲎试剂浓度为0．25EU／mL时,苦碟子注射液稀释至1／30对细菌内毒素测定无干扰。结论：鲎试剂法检测苦碟子注射液静脉点滴用药时的细菌内毒素是可行的。     

明胶中细菌内毒素的检测

作者通过鲎试验法检测多种来源、多个批号的药用明胶中细菌内毒素含量并进行合格批号的干扰试验,证明明胶对鲎试剂有干扰作用,其作用表现为浓度越高干扰越大。抗增液无助于消除明胶对鲎试剂的干扰,而有效的稀释可克服这种干扰。并对明胶及含明胶成份的生物制品在细菌内毒素检测中的限值确定及其试验影响进行了讨论。     

昆虫细胞表达鲎C因子内毒素活性检测的研究

[目的]开发一种低成本的内毒素检测试剂和方法。[方法]Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达重组鲎凝血C因子,利用动态荧光法进行内毒素检测活性分析。将细胞培养基经过超滤处理,分析其对内毒素检测灵敏度的影响;分析低温储存的检测试剂在不同储存时间,内毒素的检测活性。[结果]经过超滤处理的培养基,内毒素检测灵敏度明显提高,可达到0.05 EU/mL,检测时间90 min内完成;检测试剂在-20℃保存6个月内,检测灵敏度仍可以达到0.1EU/mL。[结论]在昆虫细胞中合成的重组鲎凝血C因子,无需经过蛋白纯化,直接将培养上清用于内毒素检测,灵敏度为0.1~0.05 EU/mL,高于普通鲎试剂的检测水平。     

DNA疫苗的细菌内毒素检测

目的 :考察DNA疫苗细菌内毒素的检查方法的可行性及DNA疫苗的干扰作用。方法 :干扰试验和对比试验。结果 :供试品阴性对照系列样品溶液无干扰作用 ,与家兔法结果一致。结论 :将疫苗稀释 2倍可用灵敏度为 0 5EU ml的鲎试剂作细菌内毒素检查。     

艾迪注射液细菌内毒素检查方法探讨

目的:建立艾迪注射液细菌内毒素检查方法。方法:根据《中华人民共和国药典》2005年版Ⅱ部收载的细菌内毒素检查法进行。结果:将艾迪注射液稀释至1/6后可消除干扰因素,用标示灵敏度为0.25 EU/mL的鲎试剂检测细菌内毒素是有效的。结论:细菌内毒素检查法准确、可靠,适用于检测艾迪注射液中的内毒素。     

重组(CHO细胞)乙型肝炎疫苗细菌内毒素含量检测法的建立

采用鲎试剂法检测重组 (CHO细胞 )乙型肝炎疫苗中的细菌内毒素含量 ,研究了甲醛、硫柳汞、氢氧化铝等疫苗成分对鲎试剂试验的影响。结果表明 ,疫苗中各成分对检测未见影响 ,所以检测本疫苗中内毒素含量时 ,采用鲎试剂法是可行的。同时 ,用此试验方法对本室所生产的重组 (CHO细胞 )乙型肝炎疫苗进行了检测 ,疫苗中内毒素含量全部合格     

Bac-to-Bac/BmNPV杆状病毒在家蚕幼虫中表达重组鲎C因子

鲎C因子是鲎血细胞中一种对内毒素具有高亲和力的丝氨酸蛋白酶,被内毒素激活后可水解人工合成的三肽底物,因而能替代传统的鲎试剂用于内毒素检测。通过RT-PCR从东方鲎血细胞中扩增出鲎C因子基因(factor C)序列,利用Bac-to-Bac/BmNPV杆状病毒表达系统在家蚕幼虫中表达该蛋白,并对其进行活性测定。结果显示:被感染的家蚕血清稀释后能检测到Factor C活性,稀释500倍的血清可以用于内毒素检测,且其灵敏度能达到0.2 EU/mL,有望开发新型的、低成本的内毒素检测试剂。     

动态浊度法定量检测静脉注射用人免疫球蛋白中细菌内毒素含量

用鲎试剂动态浊度法定量检测静脉注射用人免疫球蛋白中细菌内毒素含量并与家兔法检测热原的结果进行对比。根据《中华人民共和国》2005年版三部附录中的细菌内毒素动态浊度法制定内毒素限值,用ATi320-06型动态试管仪和该仪器配置的中文软件"生物探针-2002"分析检测结果。静脉注射用人免疫球蛋白经稀释消除了干扰因素,动态浊度法能定量检测出内毒素含量。实验满足2005年版中国药典要求:标准曲线相关系数的绝对值︱r︱≥0.980,回收率:50%≤R≤200%,变异系数符合鲎试剂厂家的建议值CV%10%。检测结果准确、灵敏、稳定、重现性好,与家兔法检测结果相一致。鲎试剂动态浊度法能定量检测静脉注射用人免疫球蛋白中细菌内毒素含量。     

黑皮蛇、山白菜抗细菌内毒素的实验研究

目的探讨黑皮蛇、山白菜的抗细菌内毒素作用。方法采用鲎试剂凝胶法对黑皮蛇、山白菜抗细菌内毒素作用进行实验研究。结果在灵敏度为0.5EU/ml鲎试剂试验中,黑皮蛇、山白菜药液浓度1g/ml,均有抗细菌内毒素作用;不同药液浓度试验,抗细菌内毒素最低药液浓度:黑皮蛇为0.1g/ml,山白菜为0.05g/ml。结论黑皮蛇、山白菜均有较强的抗细菌内毒素作用。     

用动态浊度法定量测定高聚生注射液中细菌内毒素

目的：探讨采用鲎试剂法对高聚生注射液进行细菌内毒素检查的可行性。方法通过试验确定高聚生注射液细菌内毒素检查的最大有效稀释倍数。结果：经干扰试验表明,内毒素的回收率在50％－200％之间。结论：高聚生注射液经最大有效稀释后进行细菌内毒素检查是可行的。     

静脉注射用人免疫球蛋白细菌内毒素检测

探索静脉注射用人免疫球蛋白(IVIG)细菌内毒素含量的鲎试验检测方法。根据《中国药典》(2000版)细菌内毒素含量的检测方法进行,将待检品用NaOH调pH至中性,稀释至2.4倍可用标示灵敏度为0.25EU/m l的特异性鲎试剂进行细菌内毒素检测,结果与家兔法进行比较,并且在样品中加入定量内毒素0.6 EU/m l用两种方法进行对比试验。结果表明用细菌内毒素检测法(鲎试验法)检测静脉注射用人免疫球蛋白是可行的。     

静注人免疫球蛋白细菌内毒素检查方法的建立

目的 :建立用于静脉注射用人免疫球蛋白 (IVIG)的细菌内毒素检查方法。方法 :通过干扰评价实验证明IVIG对细菌内毒素检查法有强烈的抑制作用 ,单纯用简单稀释和调整pH值法无法消除干扰 ,如果用稀释剂 (Ⅰ )对IVIG作 1∶4以上的稀释 ,即可消除样品对该检查法的干扰 ,利用灵敏度为 0 1 2 5EU ml的鲎试剂 ,将样品用稀释剂 (Ⅰ )稀释 4倍 ,按中国药典 ( 2 0 0 0版 )进行细菌内毒素的检查 ,结果与家兔热原质试验进行比较。结论 :IVIG用稀释剂 (Ⅰ )进行适当稀释后 ,可以用细菌内毒素检查法替代家兔热原试验 ,应用于生产过程及半成品的质量控制。     

注射用炎琥宁的细菌内毒素检查

目的:建立注射用炎琥宁细菌内毒素检查方法。方法:按《中国药典》2010年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查方法,用不同厂家的鲎试剂对不同批号的样品分别进行干扰试验。结果:注射用炎琥宁稀释至质量浓度为0.17mg.mL-1的供试品溶液时对试验无干扰作用。结论:细菌内毒素检查方法可用于注射用炎琥宁的热原检查。     

鲎试验法与家兔法检测复合氨基酸注射液热原的比较研究

本文用鲎试验法和兔法分别对复合氨基酸注射液82批样品进行了实验,结果两法一致,均为阴性,符合率为100%。用鲎试验法对其中16批样品进行了抑制试验,其结果均为阳性,说明样品在此条件下对鲎试剂与内毒素的凝胶反应没有抑制作用。并做了鲎法与兔法加内毒素的对照试验,其结果鲎法为阳性,兔法则基本为阴性。     

重组人细胞因子制品细菌内毒素的检测

为了考察细菌内毒素检测法（BET法）检测重组人细胞因子制品的细菌内毒素及其质量控制的可行性。按照2000年版《中国生物制品规程》的规定,确定L值,计算MVD,进行干扰试验,检测制品的细菌内毒素,并与家兔热原法（RPT法）进行比较。结果表明,用标示灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂,重组人干扰素α2a(IFNα2a）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）、白介素－2（IL－2）制品,最高非干扰浓度分别为稀释至31.7倍（9.5万IU／ml）,10.9倍（27.5万μg/ml）,40倍（0.25万IU/ml）。将IFNα2a和GM－CSF按规程规定稀释80位,对细菌内毒素的检测均无干扰作用,而IL－2稀释8倍对检测有抑制作用,但经40倍稀释后可消除抑制。以BET法检测上述制品的细菌内毒素和以RPT法测定家兔热原香,符合率为100％。结果提示,用BET法代替PRT法检测上述细胞因子制品的细菌内毒素及其质量控制是可行的。     

中国鲎变形细胞活体观察、活体染色及其对细菌感染反应的研究

目前,国外应用鲎变形细胞提取物(或称溶解物,简称鲎试剂)于医药、卫生和食品等行业检测内毒素和致热原(Jorgensen 1973;Weary,1980),具有灵敏度高,快速和操作简便等优点。近年来,国内某些单位已开始研制应用。