第三批人凝血因子Ⅷ浓制剂国家标准品的协作标定

为更替第二批人凝血因子VⅢ浓制剂国家标准品,以WHO97/616批重组人凝血因子Ⅷ浓制剂国际标准品为对照,采用一期法协作标定第三批人凝血因子Ⅷ浓制剂二个候选国家标准品X和Y.并将标准品分别置4℃、22℃、37℃保存4.5个月,用加速破坏试验进行稳定性考查.结果表明,X(20010606批)候选标准品效价为3.8IU/支;Y(20010607批)候选标准品效价为7 3 IU/支.X批候选标准品比Y候选标准品稳定性好.其它项目均达到国家标准品要求.故已完成建立第三批人凝血因子Ⅷ浓制剂国家标准品.     

首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品的制备和标定

目的制备和标定百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品。方法按《中华人民共和国药典》2015版(三部)(简称《中国药典》)相关要求,制备候选百日咳杆菌鼠源抗血清参考品(简称候选参考品),以WHO百日咳杆菌鼠源抗血清标准品(编号97/642)为标准,组织3家单位进行协作标定,并采用热加速试验对候选参考品进行稳定性观察。结果共制备合格候选参考品300支,其外观、水分、分装精度均符合《中国药典》的相关要求;协作标定结果显示,室内和室间几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)均低于20%;经统计学分析,最终确定候选参考品中含PT-Ig G、FHA-Ig G、PRN-Ig G分别为95 IU/m L、917 IU/m L、102 IU/m L,95%可信区间分别为91.7~103.7 IU/m L、900.2~944.5 IU/m L、99.4~106.1 IU/m L;每支安瓿分别含PT-Ig G 19 IU、FHA-Ig G 183 IU、PRN-Ig G21 IU;候选参考品于-20℃放置15个月及37℃放置7 d、14 d、21 d和28 d后,各种百日咳组分抗体的酶标单位值均变化不大,差异均无统计学意义(P0.05)。结论首批百日咳杆菌鼠源抗血清国家参考品均符合《中国药典》的各项要求,且一致性、稳定性良好,可用于百日咳组分疫苗小鼠效力血清学方法的质量控制评价。     

第二代百日咳疫苗毒性国家标准品的建立

目的建立第二代百日咳疫苗毒性国家标准品(简称二代毒性标准品)。方法选用百日咳疫苗生产菌株(编号CS株CMCC58003)进行发酵罐培养,将收获的百日咳菌液灭活后分装冻干后,作为第二代百日咳国家毒性标准品的候选品(简称候选毒性标准品)。以第一代百日咳疫苗毒性国家标准品为标准(简称一代毒性标准品),由4个单位协作标定候选毒性标准品,采用热加速法考察候选毒性标准品的稳定性。结果共获得检定合格的候选毒性标准品1 800支;经4个实验室协作标定,每支二代毒性标准品LPU为21,HSU为41;且稳定性良好。结论候选毒性标准品各项指标均符合要求,可作为第二代百日咳疫苗毒性国家标准品使用。     

人凝血酶原复合物在制备过程中凝血因子活性的检测和分析

目的对人凝血酶原复合物在制备工艺中凝血因子效价进行检测和分析。方法对PCC制备过程中的血浆、S/D病毒灭活、冻干工艺、干热病毒灭活前和后分别取样,检测分析凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ效价,分别分析S/D病毒灭活、冻干工艺、干热病毒灭活前和后凝血因子效价的变化情况。分析PCC干热病毒灭活后的样品中四种凝血因子的效价比例。结果三批血浆中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ和Ⅹ的活性在0.8~1.2 IU/m L之间。S/D病毒灭活前后PCC冻干工艺前后PCC中四种凝血因子活性无明显变化,而干热病毒灭活后PCC中四种凝血因子活性均有明显下降。三批PCC中四种凝血因子的比例基本一致,但是凝血因子Ⅶ效价较低,凝血因子Ⅱ效价偏高。结论通过PCC制备工艺中凝血因子效价的检测和分析可实现良好的质量控制。     

苏云金芽孢杆菌不同亚种菌株制剂毒力效价的研究

采用苏云金芽孢杆菌制剂美国标准品:Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki HD-1-S-1980(H_(3a3b))对不同亚种制剂:Bacillus thuringiensis subsp. Dendrolimus U菌株(H_(4a4b))和Bacillus thuringiensis subsp. Galleriae C88菌株(H_5a5b))进行了毒力效价的研究。以U菌株制备的标样与美国标准品对不同试虫进行了比较。生物测定的结果表明,U菌株标样的效价分别为18666.6IU/mg(试虫为马尾松毛虫Dendrolimus punctatus 2龄幼虫)、22956.5IU/mg(试虫为小菜蛾Plutella xylostella 2龄幼虫),均高于美国标样16000IU/mg的水平。其敏感度为小菜蛾大于马尾松毛虫。以U菌株和C88菌株生产的中试产品用美国标准品进行毒力测定,试虫为马尾松毛虫,其结果表明,U菌株产品毒力效价为36444.4IU/mg;C88菌株产品为28521.7IU/mg,两者均明显高于美国标准品。试验结果还表明,采用美国标准品及马尾松毛虫和小菜蛾为…     

人凝血因子Ⅷ效价凝固检测法的验证及应用

目的 对凝固法检测人凝血因子Ⅷ(FⅧ)效价进行验证,并考察正常质控血浆(CPN)和人凝血因子Ⅷ国家标准品(CRM)贮存的稳定性.方法 实验采用贝克曼ACL7000全自动凝血仪及配套试剂检测人FⅧ效价,依据2003年版《药品生产验证指南》,选择准确度、线性、范围、重复性、中间精密度、耐用性6个参数进行验证;CRM和CPN复溶后分装冻存于-80℃保存,不同时间检测其复融1次后的效价.结果 实验结果表明,该法检测CRM 5个不同效价的回收率为85％ ～93％,重复性的CV均＜10％,不同试验人员检测相同样品和不同时间检测相同样品的CV均＜10％,人凝血因子ⅧCRM在0.30 ～ 1.21 IU/mL范围时r2=0.996(＞0.980);肝素钠浓度≤0.25 U/mL时无干扰.CRM复溶后分装并冻存1次的效价损失至少20％,随着冻存时间延长损失更多;冻融1次的CPN 2个月内效价基本没有损失.结论 用全自动凝血仪凝固法检测人凝血因子Ⅷ方法有效;CRM复溶后冻存效价有所下降,需重新标定后再用,冻融1次的CPN效价至少2个月内保持稳定.     

牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品的研制

为制备标定凝集试验用的牛布鲁氏菌病阳性血清国家标准品,采集4份田间自然感染牛布鲁氏菌病的阳性血清作为候选物,经过筛选后,选择了3#血清用于标准品制备。对该标准品进行了物理性状、无菌检验、真空度测定、剩余水分检验、均匀性检测和稳定性试验,检测结果均符合要求。以国际标准品为参比,测定了该标准品的RBT、SAT和CFT效价,结果分别为1∶160“+”、1∶2 400“++”、1∶800“++”,与协作标定结果完全一致。该标准品以国际标准品溯源的国际单位含量为4 000 IU/mL。     

凝血酶冻干制剂冻干工艺选择研究

在对凝血酶精制、制剂配制、稳定剂选择和冻干工艺试验、冻干制剂稳定性等进行了一系列的试验之后,建立了凝血酶冻干制剂的活性单位检测方法,得到了凝血酶冻干制剂(速效局部止血药200 IU/m l和500 IU/m l)的试制结果。在选定的制造工艺条件下,连续生产三批,经甘肃省药品检验所检定结果,无菌试验合格,单位含量合格并相当于标示量的100%~140%,比活高于10 IU/mg,残余水份含量低于3%,制剂质量均达到2005版药典标准的要求。凝血酶冻干制剂的稳定性良好,37℃保存三个月后标示量下降在10%以内。     

关于建立组织血纤维蛋白溶酶原激活剂(t-pA)美国参考品的合作研究

<正>t-pA是一种内源性的血纤维蛋白溶酶原激活剂。1987年,Alteplase,即一种重组t-pA已由Genentech制成并经美国许可用于急性心肌梗塞病,t-pA的标准地已由英国国家生物标准品和质控研究所实施。第一个t-pA国际标准品建立于1984年,从黑素瘤细胞培养物的上清液中获得,这一标准品被指定用来测定血浆和生物制品中的t-pA活性以及成批生产的t-pA制剂的活性。对于第二个国际标准品,已有两种候选的制剂被检测。一种是从黑素瘤细胞培养物上清液中提纯的,另一种是由Genenfech等提供的重组t-pA制剂。这两种制剂都顺利地与第一个t-pA国际标准品进行了比较,并且     

注射用胸腺肽热稳定性试验的观察

依照2005年版《中国药典》和2003年版《国家药品标准》,考察注射用胸腺肽制剂的热稳定性。将注射用胸腺肽制剂成品3批样品,于温度60℃±2℃、水浴自然光条件下,放置10h,多时段取样,观察其外观、多肽含量、酸碱度、可见异物和生物学活性。结果表明三批供试品的的各项指标均符合国家药品标准规定。注射用胸腺肽具有良好的热稳定性。     

人巨细胞病毒IgG 抗体标准品研究进展

人巨细胞病毒(CMV)是威胁人类健康的最重要病原之一。高CMV抗体效价的免疫球蛋白G(IgG)制剂,为临床医生在预防和治疗用药上提供了一个有价值的选择。而CMV免疫球蛋白标准品对于制品的CMV抗体效价测定以及高效价血浆的筛选都至关重要。该标准品对于器官移植/输血安全测试,以及临床诊断都是不可或缺。本综述提供了一种人巨细胞病毒IgG标准品制剂方法以及目前研究进展的概述。此外,本文还关注应用于不同领域的不同CMV IgG抗体效价单位。故本文为人巨细胞病毒免疫球蛋白的开发,人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂的标准化,以及为其质量控制提供参考。     

不同饲毒法测定Bt8010毒力效价研究

以棉铃虫初孵幼虫为供试虫,用合成饲料和天然饲料两种饲毒法,CS3ab-1991（毒力效价Ha 15000IU/mg)为标准品对Bt 8010粉剂进行毒力测定,饲毒后的供试虫在30℃恒温下培育72小时,合成饲料饲毒法测定的CS3ab-1991 LC50=108.6±10.8μg/ml,Bt8010 LC50=197.1±15.6μg/ml,毒力效价8273.1±715.8Ha IU/mg,天然饲料饲毒法测定的CS3ab-1991 LC50=406.3±47.5μg/ml,Bt8010 LC50=705.0±86.8μg/ml,毒力效价8633.2±871.8Ha IU/mg。     

肠道病毒EV71疫苗效力国家参考品的协作标定

目的建立肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)疫苗效力参考品,用于EV71疫苗效力的小鼠ED50检测质量控制。方法选取经Ⅲ期临床试验验证具有良好保护效果的一批EV71疫苗作为候选参考品,采用EV71小鼠ED50检测方法,对候选参考品进行效力的协作标定及适用性研究。结果候选参考品在各实验室的ED50均值分别为9.5~51.0 U,CV为3.8%~18.7%;5个实验室总均值为23.5 U,CV为60.9%。各实验室检测结果均符合正态分布;3个EV71灭活疫苗与参考品均表现出了良好的剂量效应关系,中和抗体阳转率均随疫苗稀释度的增加而降低,下降曲线形态相近。当以候选参考品为标准,3个灭活疫苗的体内效价比均值分别为2.7倍、0.8倍和0.9倍;CV分别为5.5%、27.5%和11.2%。结论建立的EV71疫苗效力国家参考品(320 U/0.5 m L),可用于EV71疫苗效力的小鼠ED_(50)检测质量控制。     

乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）检测程序的方法学性能评价

摘 要：目的 对本实验室乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测程序方法学性能进行评价,以了解其方法学性能是否符合临床及本实验室检测要求。方法 分别取高浓度(HP)和低浓度(LP)两个水平的患者标本对精密度进行评价,取国家标准品（L1-L6）对正确度、线性范围及检测下限进行评价。结果 高浓度(HP)和低浓度(LP)两个水平的患者标本CV均低于5.0%,精密度符合要求;L1-L6检测结果均在国家标准品的允许范围内,正确度符合要求;a=0.9867,r2=0.9985,线性范围符合要求;国家标准品中的L4稀释后,300 IU/mL、500 IU/mL均可检出,符合试剂盒的检测灵敏度要求。结论 本室所评价的试剂盒方法学性能指标均符合要求,适合在本室开展。     

乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)检测程序的方法学性能评价

目的对本实验室乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)定量检测程序方法学性能进行评价,以了解其方法学性能是否符合临床及本实验室检测要求。方法分别取高浓度(HP)和低浓度(LP)两个水平的患者标本对精密度进行评价,取国家标准品(L1-L6)对正确度、线性范围及检测下限进行评价。结果高浓度(HP)和低浓度(LP)两个水平的患者标本CV均低于5.0%,精密度符合要求;L1-L6检测结果均在国家标准品的允许范围内,正确度符合要求;a=0.9867,r2=0.9985,线性范围符合要求;国家标准品中的L4稀释后,300IU/mL、500IU/mL均可检出,符合试剂盒的检测灵敏度要求。结论本室所评价的试剂盒方法学性能指标均符合要求,适合在本室开展。     

麻疹减毒活疫苗国家参考品的制备及标定

为了制备麻疹减毒活疫苗国家参考品,选用国内麻疹疫苗生产株沪191制备麻疹疫苗参考品。生产过程中严格控制精密性、水分含量,对候选参考品进行鉴别试验、水分含量、病毒滴度及无菌检查等检验。检验合格后组织进行候选参考品病毒滴度协作标定,共有5个实验室参加了协作标定。协作标定完成后,对实验室内变异、实验室间变异及国际参考品在不同实验室间的变异进行了分析。此外还对疫苗进行了热稳定性和实时稳定性分析。结果显示经5个实验室协作标定后,麻疹减毒活疫苗国家参考品的滴度为4.96±0.26 lgCC ID50/m l,实验室内部变异在1.09%～4.64%之间,实验室间变异为2.62%。国际参考品在不同实验室间的变异为4.19%。稳定性考核数据表明制备的参考品具有较好的稳定性,符合作为麻疹减毒活疫苗国家参考品的要求,滴度为4.96±0.26 lgCC ID50/m l。     

HIV-1 P24抗原国家参考品的研制

收集正常人、HIV感染者和疑似感染者血浆以及HIV-1病毒培养裂解液,对其进行HIV抗体、HIV P24抗原、HCV抗体和HBsAg检测,对HIV P 24抗原阳性者进行HIVRNA检测,并对部分样品进行基因分型.以NIBSCP 24抗原标准品的系列稀释样品作为线性灵敏度参考品.经过实验筛选出20份阴性参考品,10份阳性参考品,10份线性灵敏度参考品,2份精密性参考品,共同组成HIV-1 P24抗原国家参考品,经多家不同的试剂进行标定,制定了相应的标准.稳定性研究结果表明,反复冻融三次对该参考品的稳定性没有影响.由此,初步建立了HIV-1 P24抗原国家参考品,该参考品将对HIV-1 P24抗原、HIV抗体/P 24抗原联合检测试剂的质量控制提供重要依据.     

HIV-1 P24抗原国家参考品的研制

收集正常人、HIV感染者和疑似感染者血浆以及HIV-1病毒培养裂解液,对其进行HIV抗体、HIVP24抗原、HCV抗体和HBsAg检测,对HIVP24抗原阳性者进行HIVRNA检测,并对部分样品进行基因分型。以NIBSCP24抗原标准品的系列稀释样品作为线性灵敏度参考品。经过实验筛选出20份阴性参考品,10份阳性参考品,10份线性灵敏度参考品,2份精密性参考品,共同组成HIV-1P24抗原国家参考品,经多家不同的试剂进行标定,制定了相应的标准。稳定性研究结果表明,反复冻融三次对该参考品的稳定性没有影响。由此,初步建立了HIV-1P24抗原国家参考品,该参考品将对HIV-1P24抗原、HIV抗体/P24抗原联合检测试剂的质量控制提供重要依据。     

破伤风类毒素抗体酶联双抗原夹心法定量检测试剂的研制及评价

研制破伤风类毒素抗体酶联双抗原夹心法定量检测试剂,用于破伤风免疫血浆抗体效价检测。以精制破伤风类毒素经Sephacryl S-300柱层析纯化后作为包被抗原,用辣根过氧化物酶以改良过碘酸钠法标记精制破伤风类毒素作为酶标记抗原,以破伤风人免疫球蛋白国家标准品采用小鼠中和试验法标定试剂盒定量标准品,制备双抗原夹心法定量检测试剂;进行试剂盒检测范围、特异性、重复性、精密度及稳定性考核,并与小鼠中和试验法、琼脂双扩散法及国外破伤风类毒素抗体酶联试剂盒进行比较。结果显示,试剂盒的检测范围为10~150mIU/ml,灵敏度为10mIU/ml,线性好(r>0.996),板内孔间变异度小(CV<8%),特异性强(100%),重复性好(CV<13%),于37℃放置6天测定结果无明显差异,与小鼠中和试验法、英国Biding Site酶联试剂有良好的一致性。试验证明所研制的试剂盒适用于破伤风免疫血浆中的破伤风抗体效价定量检测。     

外用重组人干扰素α2a凝胶剂研究

研究重组人干扰素α2a凝胶剂以应用于临床。重组人干扰素α2a以卡波普940NF为基质,加入保湿剂、保护剂、防腐剂制成外用凝胶,用于治疗单纯疱疹、带状疱诊、尖锐湿疣等病毒性皮肤病。稳定性试验结果表明,4℃保存有效期可达2a;药效学试验表明,rhIFNα2a(20万IU/g)对HSVⅠ病毒抑制效价>103.0,HSVⅡ病毒抑制效价>104.0;毒理学试验表明,该品对皮肤无毒,无刺激性,无红斑、水肿现象。临床试验结果表明,重组人干扰素α2a凝胶剂可应用于临床治疗单纯疱疹及预防尖锐湿疣的复发。