微载体规模化培养细胞的研究

通过实验探索使用微载体进行动物细胞规模化培养,以期达到建立规模化生产病毒疫苗的目的。实验研究了Vero细胞的生长曲线,以及对细胞生长过程中影响细胞生长的葡萄糖、氨含量两个主要因素的变化规律以及微载体浓度与细胞密度的关系。通过实验发现微载体规模化培养细胞易于操作,比传统转瓶培养的细胞密度高,封闭式的培养方式不但减少了污染几率,而且可以充分保证疫苗的质量。最终找出适宜疫苗培养的微载体使用浓度为2.5g/L,适宜的细胞接种浓度为:1~5×105cell/m l。     

HO·和γ射线对细胞致死效应的比较

利用双链断裂模型比较研究了羟自由基和γ射线对B16、L0 2、SMMC - 772 1和V79四种细胞的致死效应。结果表明 :1.HO·处理和γ射线照射对四种细胞有都明显的致死效应 ,而且剂量越大致死作用越强。 2 .HO·处理和γ射线照射存活曲线都存在肩区 ,说明两种处理过程都有亚致死损伤的修复。 3.HO·诱导DNA双链断裂一般都需要两次击中而γ射线辐照既有一次击中的成分 ,也有两次击中的成分。 4.四种细胞对HO·的敏感性与对γ射线的辐射敏感性顺序相反 ,说明γ射线对细胞的作用不能简单地解释为自由基的行为。     

硫酸鱼精蛋白去除Vero细胞乙脑疫苗残余DNA方法的条件优化

Vero细胞规模化生产疫苗时利用硫酸鱼精蛋白可去除乙型脑炎纯化疫苗中Vero细胞的DNA,实验中对不同条件进行了比较。首先在Vero细胞冻融浓缩液中分别按终浓度2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml加入鱼精蛋白去除DNA,确定0.2~2mg/ml均有良好去除效果;其次将Vero细胞培养的乙脑病毒浓缩液分3组:第1组按2mg/ml、1mg/ml和0.5mg/ml分别沉淀一次、两次;第2组加入终浓度1mg/ml PS后调pH值为pH6.0、6.4、6.8、7.2、7.6;第3组将NaCl浓度调整至0.029mol/L、0.145mol/L、0.725mol/L,加入终浓度1mg/mlPS。确定低浓度多次沉淀、pH值6.8~7.2、盐浓度0.145mol/L条件下沉淀效果最好。     

凝血酶冻干制剂冻干工艺选择研究

在对凝血酶精制、制剂配制、稳定剂选择和冻干工艺试验、冻干制剂稳定性等进行了一系列的试验之后,建立了凝血酶冻干制剂的活性单位检测方法,得到了凝血酶冻干制剂(速效局部止血药200 IU/m l和500 IU/m l)的试制结果。在选定的制造工艺条件下,连续生产三批,经甘肃省药品检验所检定结果,无菌试验合格,单位含量合格并相当于标示量的100%~140%,比活高于10 IU/mg,残余水份含量低于3%,制剂质量均达到2005版药典标准的要求。凝血酶冻干制剂的稳定性良好,37℃保存三个月后标示量下降在10%以内。