介绍一种新的电泳技术——蛋白质的硝酸纤维纸转移电泳

硝酸纤维纸转移电泳首先应用于DNA片段的研究中,其原理是把琼脂糖凝胶电泳后分离的DNA各片段,再一次,转移到硝酸纤维纸上,然后在纸片上进行DNA-RNA杂交等实验。由于Southern最先报道,转移过程又类似于把墨迹吸到吸墨纸上,故称Southern Blot。此后Alwine等又把它应用到RNA的研究上,称为Northern Blot。Towbin等又扩展到蛋白质研究中,取名为Western Blot。最近Reinhart等将等电聚焦电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维纸,称为Eastern Blot。这种方法为蛋白质检测提供了方便,也扩大了凝胶电泳技术的应用范围。本文综合国外的报道,并结合     

一种从琼脂糖凝胶中同步回收DNA和琼脂糖的方法

介绍一种从琼脂糖凝胶同步回收DNA和琼脂糖的方法。利用0.25 mol/L异硫氰酸胍溶液(p H 8.0)溶解含有目的 DNA片段的的凝胶条,胶条溶解后,静置冰上10 min再加入预冷的异丙醇,琼脂糖呈颗粒状析出,通过离心即可初步分离DNA和琼脂糖。上清液用异丙醇沉淀回收DNA片段,利用50%PEG溶液沉淀琼脂糖。分别对0.2 kb、1 kb和10 kb长度的DNA片段进行回收,回收率分别为19.44%、36.40%、13.49%,回收的DNA纯度高,电泳条带清晰。琼脂糖均回收率为62.52%,回收琼脂糖脱水后的状态为白色颗粒。该方法切实可行,回收成本低廉,回收的DNA和琼脂糖可用于后续实验。     

电泳后琼脂糖凝胶中DNA的洗脱

序言 基因组的结构和功能的研究,很大程度上依赖于特定的DNA片段的分离和分析。凝胶电泳是一种以DNA片段大小为依据的,简单而且分辨力很强的一种分离特殊DNA片段的方法浓度为2.5％—0.1％的琼脂糖凝胶电泳可分辨出从150到880000硷基对的DNA片段,而在20％—3％的丙烯酰胺凝胶上,对20—2000硷基对的DNA片段分辨效果更好。     

电泳后琼脂糖凝胶中DNA的洗脱

序言 基因组的结构和功能的研究,很大程度上依赖于特定的DNA片段的分离和分析。凝胶电泳是一种以DNA片段大小为依据的,简单而且分辨力很强的一种分离特殊DNA片段的方法浓度为2.5％-0.1％的琼脂糖凝胶电泳可分辨出从150到880000硷基对的DNA片段,而在20％-3％的丙烯酰胺凝胶上,对20-2000硷基对的DNA片段分辨效果更好。     

胸腺素α原体外诱导小鼠胸腺细胞凋亡的初步探讨

胸腺细胞经ProTα和/或氢化考的松处理以后,采用PI染色法检测亚二倍体细胞百分率、荧光光度计检测细胞内游离Ca~(2 )浓度及琼脂糖凝胶电泳定性检验DNA片段化。结果发现单独或与氢化考的松联合应用,ProTα均可明显促进DNA片断化、提高亚二倍体细胞百分率并且也明显提高细胞内游离Ca~(2 )浓度。本实验说明ProTα能促进胸腺细胞的凋亡。     

慢生型大豆根瘤菌的结瘤基因转入快生型大豆根瘤菌中

通过三亲本杂交把慢生型大豆根瘤菌USDAllO的基因文库转移至Tn5诱变的不结瘤的快生型大豆根瘤菌321,338中,用链霉素和四环素平板选择大量接合子,接种大豆,通过结瘤基因功能互补,获得7个根瘤,从中分离出的每个菌株都仍具有链霉素和四环素抗性。分离其质粒,发现每个菌株都多了一条较载体质粒pLAFRl分子量大的质粒。将这些质粒转移至大肠杆菌HBl01中,分离其质粒,用32P标记的ncd探针进行DNA—DNA分子杂交,除载体质粒pLAFRl为阴性反应外,其他重组质粒均为阳性反应,即所获得pLAFRl克隆的DNA片段上确有nod结构基因。回收重组质粒pLAFRl：：nod,用限制性内切酶EcoR I进行酶切,从其琼脂糖凝胶电泳图上估计pLAFRl上克隆的DNA片段分子量为32kb。     

PCR特异产物回收纯化方法的比较

方法：采用三种方法对苹果褪绿叶斑病毒RT-PCR的特异DNA产物进行回收纯化。目的：针对不同情况,选择适宜的回收纯化方法。结果：用普通琼脂糖替代低融点琼脂糖,回收纯化后产物的浓度及纯度与低融点琼脂糖法基本一致,完全可以用普通琼脂糖替代低融点琼脂糖进行DNA片段的回收纯化,从而降低成本,简化操作。玻璃奶法的回收纯度明显高于低融点琼脂糖法和普通琼脂糖法,且更快速安全,是采用普通琼脂糖法还是采用玻璃奶法回收纯化DAN片段应以实际需要而定。     

通过胚电泳转移基因

美国农业部花卉与苗圃作物实验室的 R.J.Griesbach 开发了一种直接把基因转移给植物的新方法。此方法是将植物胚顶端的分生组织暴露在有电场的外源 DNA 里,把含有0.3%琼脂糖的吸管和含有 DNA的乙酸缓冲液置于带顶端分生组织的胚一端,而另一端与仅含缓冲液和琼脂糖的吸管连接,通过电流而产生 DNA 摄取。Griesbach 利用这种胚电泳系统把含有 GUS 标记基因的质粒转移到了虾脊兰胚的顶端分生组织里,     

琼脂糖凝胶中DNA片段的挤压回收法

为了简化琼脂糖凝胶中DNA片段的回收,该文报道一种新的挤压回收法。将含有DNA片段的凝胶块放在折叠的封口膜之间,然后用一小塑料平板将凝胶块中的DNA溶液用力挤出,用移液枪把所有挤压出的DNA溶液放入effendorf管中,然后用常规的苯酚抽提法进行纯化。DNA回收率达到40-60%(w/w)。该方法简单而有效,且回收的DNA能够直接应用于酶切、连接及PCR等各种分子生物学操作。     

基因工程

<正>考虑了从琼脂糖和聚丙烯酞胺凝胶中用转移电泳回收DNA片段。大肠杆菌质粒pBR322和腺病毒2 DNA分别进行聚丙烯酞胺凝胶电脉和琼脂糖凝胶电泳。SephadexG一50床(B)包在上端装有电     

琼脂糖凝胶直接杂交法

DNA印迹(Southern blot)杂交法是研究DNA分子结构,变异及其组成的一种分子生物学技术。自1975年闻世以来,在分子生物学,遗传学及分子病毒学等研究领域得到广泛应用,对这些学科的发展起了重要作用。由于该技术均需要首先将电泳后已变性的DNA从琼脂糖凝胶转移至支持膜上,因此,实验结果的好坏很大程度取决于吸印的效果,同时也受支持物     

大肠杆菌抗药性质粒pFD11结合转移的一些特性

当pFD11质粒由转化或转导途径转移给大肠杆菌C_(600)后,都失去结合转移能力。而抽提C_(600)(pFD11)的DNA,经琼脂糖凝胶电泳,仅保留分子量最大的一条质粒DNA带,估计就是抗性决定因子。     

用透析膜从琼脂糖胶中回收DNA片段

分离与回收DNA片段是基因操作的重要环节之一。本文介绍了一个用透析膜从琼脂糖胶中回收 DNA 片段的改进方法。利用本法回收DNA片段洗脱容易、节约时间、回收率在80％ 左右。回收的 DNA片段可用于酶切反应、连接反应和用缺口位移反应制备32p标记DNA探针。     

一种简单快速回收DNA片段的方法——DE-81滤纸

琼脂糖凝胶电泳对于快速分离不同分子量的DNA片段是极为有效的,但把DNA片段从凝胶中回收回来有时要碰到一些困难,如回收的DNA易受凝胶中硫酸多糖的污染(该成分是许多酶的抑制剂,如内切酶、连接酶、激酶、聚合酶等);大片段DNA回收     

从小鼠胎儿基因文库中筛选分离免疫球蛋白重链C_ε基因

本文阐述了以缺口翻译制备的pIge DNA为探针(4.4×10~6cpm/μg DNA),用吸印法从小鼠胎儿基因文库中筛选分离出免疫球蛋白重链C_ε基因克隆。同时,从扩大培养的噬菌体中提取出DNA,并用EcoRI酶消化,0.7％琼脂糖凝胶平板电泳分离,分离的DNA片段转移至硝酸纤维素滤膜上,以pIgs DNA探针杂交,进而确证有两条阳性带,为免疫球蛋白重链C_s基因。电泳法测定其大小分别约为3.5 kb和3.0 kb。也显示出在小鼠胎儿中的未分化型免疫球蛋白重链C_g基因内有一个限制性内切酶Eco RI位点。     

利用机油提高琼脂糖凝胶中DNA片段的回收率

目的:发展一种简单快速经济的回收琼脂糖凝胶中DNA的方法.方法:将切的琼脂糖凝胶胶块放入嵌套Eppendorf管中捣碎,加入50μL机油,室温下12 000r/min离心5min,取大Eppendorf管中收集的液体跑胶检验,凝皎上包括代表100bp～2000bp不同大小DNA分子回收率的分子量标准DL2000.结果:DNA回收率可由加机油前的约35%提高为加机油后的45%-90%,回收效率的波动主要取决于DNA片段的大小、切下的含有DNA的胶块的大小及操作者的熟练程度.结论:该方法快速、简便、经济,具有良好的重复性与特异性,比许多国产的试剂盒更可靠.     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段在枯草芽孢杆菌中的克隆

EcoRI酶解的AsGV-XJ DNA和质粒pUB 110 DNA,经T4 DNA连接酶连接后,转化枯草芽孢杆菌BR 151感受态细胞,涂布在加有新霉素(5,ug／ml)的完全培养基上。用琼脂糖凝胶电泳快速法检测抗新霉素转化子中的重组质粒。在388个转化子中得到12个较PuB110 DNA分子量大的重组质粒。所有重组质粒均可与”PdcTP标记的Fco RI酶解AsGV—XJDNA片段的探针进行分子杂交。通过琼脂糖凝胶电泳对重组质粒中插入AsGV一XJ DNA 片段进行了测定。     

核酸染料对DNA条带形态产生的影响分析

使用核酸染料对DNA片段进行前染色时,DNA条带会出现弯曲、变形、拖尾等现象。这些现象是由核酸染料造成的,并且与核酸染料的浓度及DNA的上样量成正相关,另外,还与分子量大小、琼脂糖凝胶的质量与浓度、电压相关。选择合适的核酸染料及染色方式可以减少DNA条带形态改变的概率,得到较好的电泳结果。     

光敏生物素和DIG标记Orf病毒DNA探针的研究

目的：是用于Orf病毒病的诊断和相应重组菌的检测,将HCE DNAHindⅢ/A,B片断及重组质粒pGRL-4A中消化的A片断用光敏生物素和地高辛进行标记,对不同病毒分离株DNA进行检测,并对不同重组质粒进行了Dot-blotting和Southem-blotting检测。结果：用光敏生物素标记的探针最低可检出12pg的DNA,地高辛标记的探针最低可检出0.1pg的DNA,且有极强的特异性。     

琼脂糖凝胶电泳技术

九、碱性琼脂糖凝胶 科学家们认为,琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段的一种极好的方法。这种技术操作简单,快速,并且还能解决在密度梯度离心中所存在的DNA片段不能充分分离的难题。此外,还能直接确定凝胶中DNA的位置:其方法是先用低浓度的能发荧光的具有插入本领的染料(溴乙锭),对胶中DNA条带进行染色;然后,把电泳胶置于紫外光下进行直接检测,其灵敏度可达1毫微克(ng)。