复旦大学遗传所举办DNA合成学习班

DNA合成学习班已于1985年11月5—12日在复旦大学开办。该班由复旦大学遗传所主持,来自全国9个大专院校及科研机构的学员共15人。期间听取了中科院细胞生物学所郭礼和付教授“合成基因在细菌中的表达”及中科院上海生化所汤锦炎同志“化学合成DNA及其应用”的学木报告,并安排了实验。讲解了DNA连接酶合成基因、基因克隆、杂交及化学法测DNA序列等用法,操作脱保护基、制电泳胶、分离纯化DNA片段和制成     

大肠杆菌抗药性质粒pFD3的链霉素抗性表达

Cohen等‘31研究大肠杆菌抗药性质粒R6 （此质粒携带卡那霉素、新霉素、氯霉素、四环 素、链霉素抗性），发现在用卡那霉素抗性、新 霉素抗性或氯霉素抗性作为选择性标记进行转 化时，极少数转化子失掉链霉素抗性。本文报 道大肠杆菌抗药性质粒pFD 3（此质粒携带四 环素、链霉素、氯霉素、氨苇青霉素、磺胺抗性） 在经结合转移或转化途径传递给大肠杆菌C'₆₀₀ 时，所得的转移子、转化子中四环素、氯霉素、氨 苇青霉素及磺胺抗性都能正确表达，而链霉素 抗性则不能完全表达。     

庆大霉素组合比例合适的新菌种育成

庆大霉素是复合成份组成的一种抗菌素。国外大多数生产庆大霉素的国家所使用的菌种都是通过购买美国专利而获得,这种菌种生产庆大霉素含C_140%,C_235％,C_1a 25％。我国生产的庆大霉素,由于其中各组分比例不够合适,因此毒性比美国     

大肠杆菌抗药性质粒pFD11结合转移的一些特性

当pFD11质粒由转化或转导途径转移给大肠杆菌C_(600)后,都失去结合转移能力。而抽提C_(600)(pFD11)的DNA,经琼脂糖凝胶电泳,仅保留分子量最大的一条质粒DNA带,估计就是抗性决定因子。     

hTERT基因片段的克隆、表达和抗hTERT抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究

端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出。人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎受到严格的调控且和端粒酶活性一致。为了检测肿瘤细胞中端粒酶及hTERT的表达,我们制备了抗hTERT蛋白的特异性多克隆抗体。首先用RT-PCR方法克隆了hTERTcDNA的一个片段,将其连接到GST融合表达载体pGEX-5X-3后在大肠杆菌中融合表达。将纯化的融合蛋白抗原免疫动物,制备抗hTERT蛋白的多克隆抗体。不同的细胞抽提物用该抗体进行了Westernblot分析,结果表明该抗体可特异识别端粒酶阳性细胞株中的hTERT及端粒酶,为端粒酶及hTERT的检测初步提供了一个简单有效的检测手段。     

大肠杆菌的一个转座子Tn2981的特性

在复旦大学校园分离到1株带有抗药性质粒pFD13(Sm~RSu~RCm~RTc~RHg~R)的大肠杆菌B7,并在pFD13上发现1个转座子,它带有链霉素(Sm~R)、汞盐(Hg~R)、磺胺嘧啶(Su~R)抗性基因,定名为Tn2981。Tn2981可以从质粒pFD13转座到质粒R144drd3上,也能从质粒转座到大肠杆菌的染色体上。这种转座作用不依赖于宿主细胞reeA的基因产物。经电子显微镜测量质粒pBR322::Tn2981及质粒pBR322的长度,换算后得到Tn2981分子量是12.48×10~6道尔顿,并经限制性内切酶酶切说明它含有6个EeoRI切点。     

大肠杆菌抗药性质粒pFD11温度敏感突变型的分离

温度敏感突变型一般可用于研究DNA复制的控制机制,而质粒温度敏感突变型更可用于测定质粒的拷贝数。我们已报道过从人的粪水中分离到带有抗药性质粒pFD11的大肠杆菌,为了研究pFD11质粒的拷贝数,进行了抗药性质粒pFD11的温度敏感突变型的分离工作。大肠杆菌K12W1485 hisyvl(F~-)(pFD11)的培养物经离心收集菌体,然后悬于pH6.0的磷酸缓冲液中,用NTG200微克/毫升37℃处理30分钟,用0.05M硫     

乳酸发酵短杆菌 (Brevibacterium lactofermentum)氟丙酮酸敏感突变型赖氨酸的生产

<正> 从乳酸发酵短杆菌AJ3990诱发产生的FP—敏感突变型中可以选得较高赖氨酸产量的菌株。洗涤细胞在FP及生物素共存时,可以协同刺激赖氨酸的生成。FP分别在0.04mM和1 mM浓度时,可以抑制AJ3990 50%细胞生长及PDH的活力。因此,FP及过量的生物素对于赖氨酸的生物合成的协同效应似乎是由于PDH/PC活力比例的最优化造成的。这可以通过选择FP—敏感突变型,并从中得到具有赖氨酸合成最佳的PDH活力菌种而证实。赖氨酸生产菌产量最高菌种,AJ11204,经比较,仅为亲本AJ3990PDH活力的27%。它在过量生物素存在时,产生70克/升赖氨酸及从葡萄糖50%转化率。     

人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因第3内含子的克隆和分析

从端粒酶活性呈阳性的永生细胞株人肺腺癌细胞SPC A 1中分离了总RNA ,以此为模板 ,结合RT PCR技术和长模板PCR技术 ,用hTERT基因特异性引物扩增到一长约 2 .2kb的cDNA片段。将该片段纯化后克隆到通用测序载体T easyvector上得到重组质粒。用测序引物SP6和T7对该片段进行部分双向测序。经序列分析和同源比较推测该片段包含了hTERT基因的第 3内含子。该结果提示了RT PCR技术和长模板PCR技术用于真核生物基因内含子克隆的可行性。进一步的分析表明 ,该片段在不同细胞的RT PCR产物中的产量不同 ,提示hTERT基因前体mRNA中的第 3内含子可能在不同细胞中有不同的剪接效率。