DNA重组技术(Ⅰ) 小量快速提取质粒DNA方法

质粒DNA的提取是最基础的DNA重组技术。国内外已经发展了许多方法用于批量提取质粒DNA。这些方法都可以获得满意的效果。这里介绍两种小量快速提取质粒DNA的方法,可用于重组子筛选及酶切分析。 (一)碱裂解法 1.将过夜培养的菌液1.5ml转移到小离心管内,15.000r/min离心30sec,弃去上清,将离心管倒置尽量除去培养液。 2.将沉淀的菌体再悬于100ml冰冷的溶液A中(50mM葡萄糖,25mM Tris pH8.0,10mM EDTA),不必要加入溶菌酶。 3.向A液中加入新配制的溶液B200μl(0.2N NaOH,1％SDS),迅速倒置几次,混合两溶液,放在冰浴上3—5分钟。 4.再加入150μl溶液C(5M醋酸钠60ml,冰醋酸11.5ml,蒸馏水28.5ml)混均后冰浴3～5分钟。     

刺激杏仁基底外侧核对外侧缰核神经元单位放电的影响

用玻璃微电极细胞外记录大鼠外侧缰核(LHN)神经元的单位放电。共记录了110个神经元。其中痛兴奋神经元(LHPE)75个;痛抑制神经元(LHPI)11个;广动力型神经元2个;无反应神经元17个;此外还有5个对躯体与内脏伤害性刺激反应不同的神经元。电刺激杏仁基底外侧核(以下简称杏仁核,AMG)对LHPE和LHPI的自发放电主要产生抑制作用,分别占总数的81.1％和72.7％,并抑制其对伤害性刺激的反应;对无反应神经元和广动力型神经元无明显影响。AMG内微量注射吗啡能抑制LHPE的伤害性刺激反应,但对其自发放电无明显影响。微量注射纳洛酮则可增加LHPE的自发放电频率,并加强其对伤害性刺激的反应。注射纳洛酮还可以取消电针对LHPE的伤害性刺激反应的抑制作用。     

人鼠嵌合抗体重链基因转染小鼠骨髓瘤细胞的初步研究

本文介绍了通过人鼠嵌合抗体重链基因转染小鼠骨髓瘤J558L的研究,叫详尽地阐述了用原生质体融合发将重组的人鼠嵌合抗体重链基因转染到J558L骨髓瘤细胞中,并用ELSA法检测转染子的过程和方法,同时简要地说明了影响转染率的一些因素。     

用琼脂糖凝胶制备电泳——冻融法纯化质粒DNA

随着基因工程研究的不断发展,DNA做为一种实验材料要求纯化方法更加简便,质量更高。目前关于质粒DNA的纯化方法已有许多报道。国外多采用氯化铯密度梯度离心法,国内则限于条件,很少应用此法。我们建立了琼脂糖制备电泳——冻融法,以纯化质粒DNA及DNA的酶切片段。方法简便易行,而且效果良好。     

用琼脂糖凝胶制备电泳— 冻融法纯化质粒DNA

随着基因工程研究的不断发展，DNA 做 为一种实验材料要求纯化方法更加简便，质量 更高。目前关于质粒DNA的纯化方法已有许 多报道fs-5I。国外多采用氯化艳密度梯度离心 法，国内则限于条件，很少应用此法。我们建 立了琼脂糖制备电泳— 冻融法，以纯化质粒 DNA及DNA的酶切片段。方法简便易行，而 且效果良好。     

除臭生物滤池稳定运行期的微生物生态 DNA指纹研究

采用 DNA 指纹方法研究除臭生物滤池稳定运行期的微生物种群的动态变化, 通过扩增不同阶段的细菌 16SrRNA 基因的 V3 可变区 , 结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术分析除臭生物滤池的生物种群的结构变化, 并回收主要的 DNA 片段, 采用 PCR 测序, 并与 NCBI 进行比对。结果表明 , 不同阶段的除臭生物滤池, 微生物的多样性及其丰度存在较大差别 , DNA 指纹图谱存在明显差异 , 同时在滤池的不同层次上也表现出明显的空间多样性, 序列比对显示硫氧化细菌在除臭系统稳定运行期占有优势地位。这些研究为更好的处理恶臭气体提供可靠的科学依据, 同时也为生物除臭的应用提供一定的理论基础。     

小鼠(BALB/c）未分化型免疫球蛋白重链可变区(VH）基因的克隆

我们曾报道了由小鼠胎儿基因文库中克隆 未分化型免疫球蛋白重链恒定区CE基因的 研究结果〔3,。与此同时我们还从小鼠基因文库 中克隆出未分化型免疫球蛋白重链可变区VH 基因。并对其进行了初步的研究。免疫球蛋白 的重链和轻链可变区的空间叠折形成了抗原－ 抗体结合位点,这对于结合特异抗原具有重要 作用[1,27。因此克隆与研究免疫球蛋白可变区基 因对于认识抗体的特异性、多样性都有一定的 意义汇‘,‘,。     

转基因鱼

引言 利用显微注射技术已经在一定范围内产生了一些转基因动物种,而这项技术在鱼类上的应用也正在取得某种程度的成功。研究用于鱼类的最佳显微注射技术及探讨一种用于大批量培养的改良方法终将导致在商业生产规模上出现转基因鱼品种,这种鱼能将所需要的特性如快速生长,疾病抗性等转递给后代。     

DNA重组技术(Ⅱ) 小量制备噬菌体DNA的方法

从噬菌体包装的全基因文库中克隆目的基因,是重组DNA基本技术之一。对筛选到的噬菌体进行DNA扩增和酶切分析,以确定克隆的正确性是必要的步骤。 下面介绍两种常用的小批量制备噬菌体DNA的方法。