纳豆芽孢杆菌发酵生产维生素K2的生物合成途径及其基因调控

阐述了用经过物理和化学诱变后,筛选得到的纳豆芽孢杆菌发酵生产维生素K2的方法,VK2的生物合成途径以及分子生物学机制,并简要介绍了VK2的临床应用。为进一步研究与开发VK2提供理论依据。     

美洲鲽抗冻蛋白基因的克隆及在E.coli中的表达

本文报告了美洲鲽抗冻蛋白基因的克隆及在E.coli中表达的研究,以质粒P~(CT5)作为抗冻蛋白基因的供体,p~(ORF-2)作为表达载体。用HpaⅡ酶从质粒p~(CT5)上切下抗冻蛋白基因片段,再经Bal 31酶,绿豆核酸酶处理,连接上BglⅡ接头,然后插入到p~(ORF-2)的BglⅡ位点上,借助于p~(ORF-2)上的β-半乳糖苷酶基因的活性,使含正确插入抗冻蛋白基因的克隆呈现出蓝色菌落,共获得4000多个转化子,其中有201个蓝色克隆。对于50个蓝色克隆提取质粒DNA,电泳后发现均大于p~(ORF-2)。用BglⅡ消化后,可以发现有300—1500bpDNA片段,同时确定了抗冻蛋白基因在p~(ORF-2)中的插入方向,对于正确插入的克隆作出部分限制性内切酶图谱,测定出插入的抗冻蛋白基因片段的DNA序列,然后将重组质粒从E.coli MH1000菌株转化到E.coliTK1046中,研究分析表达产物,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳结果证明插入的抗冻蛋白的基因已表达,有明显的融合蛋白带,分子量大于β-半乳糖苷酶、是由大肠杆菌的外膜蛋白F,抗冻蛋白和β-半乳糖苷酶组成。融合蛋白含量占总蛋白的20％左右。     

纳豆激酶的研究与应用

纳豆激酶的研究与应用付利,杨志兴（黑龙江省科学院应用微生物研究所）纳豆为日本的传统发酵大豆食品,已食用了２０００年以上。它是由枯草杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓＳｕｂｔｉｌｉｓ）或纳豆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｎａｔｔｏ）发酵大豆制造成的,日本民众十分喜欢食用。同时也被用作民间药品,以预防和治疗心脑血管性疾病。     

一种具有纤溶活性的枯草杆菌蛋白激酶的研究──Ⅰ高产酶菌株的筛选与鉴定

本文主要阐述了一种具有纤溶活性的枯草杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）蛋白激酶产生菌株的筛选与鉴定的研究结果。作者从初筛的１２株Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｌｉｌｉｓ菌中,通过对固体发酵和液体发酵所产生的枯草杆菌蛋白激酶,用琼脂糖－纤维蛋白平板法测其活性,经比较不同菌株的活性,筛选出两株高产酶菌株：Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＨＷ—１２和Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓＨＷ—３。同时对菌体和菌落形态特点、生理生化反应进行了鉴定,认为Ｂ．ＳｕｂｔｉｌｉｓＨＷ－１２菌株可用来做为发酵生产该酶的菌种。     

赤子爱胜蚯蚓(Eisenia Foetida)纤溶酶的研究,Ⅳ纤溶酶组成成分的分子量测定

本文报告了用SephadexG—100柱层析法纯化样品和聚丙烯酰胺凝胶电泳测定纤溶酶组成成分的分子量的研究结果。经柱层析分离的纤溶酶电泳测定分子量结果为11条带,分别为68,000、49,000、42,000、41,000、36,000、29,000、27,000、26,000、25,000、21,000和12,000。而纤溶酶的主要组分集中在21.000与42.000之间,为其活性组分。     

抗冻蛋白及其基因结构

(一)鱼抗冻蛋白的发现简况由于海水的溶质依数性质冰点温度降低到-1.9℃.海洋硬骨鱼类血清中溶质浓度约为海水的1/3,故冰点为-0.8℃.当水温降到-0.8℃时有冻死的危险.有些鱼类则游到较暖和或较深的海水中去,在100米深处海水温度可低于-0.8℃,但由于缺乏冰晶成核作用而处于过冷状态,鱼类可以生存.有些适应于冰层下生活的鱼类如何抗冻呢?1957年有人报导生活在北极的鱼血清冰点为-1.4℃,是什么原因使冰点降低这么多呢?这激发了研究者的兴致.1969年斯坦     

含人抗体恒定区基因的酵母表达质粒的构建

本文主要报告了用以表达人-鼠嵌合抗体基因的酵母表达载体的构建、筛选与鉴定的研究结果.作者利用高度表达的酵母质粒YEP_(51),与含人抗体恒定区基因的pSV_2gptHuG_4两个质粒为材料,构建成可以供表达任何小鼠单克隆抗体的可变区基因,以构成嵌合的人-鼠抗体基因,用酶切回收插入DNA片段、原位和斑点杂交法对重组质粒予以鉴定和筛选,获得了pYEP-H重组的酵母表达载体.     

赤爱胜蚯蚓(Eisenia Foetida Sarigny)纤溶酶的研究 Ⅶ.纤溶酶片释放度的研究

本文采用紫外分光光度法对纤溶酶片的释放度进行了测定研究,释放T5O为45分钟,释放时间80分钟,释放量不少于70％。本测定方法快速简便,适宜生产中控制药品质量,进一步指导生产。     

用琼脂糖凝胶制备电泳——冻融法纯化质粒DNA

随着基因工程研究的不断发展,DNA做为一种实验材料要求纯化方法更加简便,质量更高。目前关于质粒DNA的纯化方法已有许多报道。国外多采用氯化铯密度梯度离心法,国内则限于条件,很少应用此法。我们建立了琼脂糖制备电泳——冻融法,以纯化质粒DNA及DNA的酶切片段。方法简便易行,而且效果良好。