用琼脂糖凝胶制备电泳——冻融法纯化质粒DNA

随着基因工程研究的不断发展,DNA做为一种实验材料要求纯化方法更加简便,质量更高。目前关于质粒DNA的纯化方法已有许多报道。国外多采用氯化铯密度梯度离心法,国内则限于条件,很少应用此法。我们建立了琼脂糖制备电泳——冻融法,以纯化质粒DNA及DNA的酶切片段。方法简便易行,而且效果良好。     

用琼脂糖凝胶制备电泳— 冻融法纯化质粒DNA

随着基因工程研究的不断发展，DNA 做 为一种实验材料要求纯化方法更加简便，质量 更高。目前关于质粒DNA的纯化方法已有许 多报道fs-5I。国外多采用氯化艳密度梯度离心 法，国内则限于条件，很少应用此法。我们建 立了琼脂糖制备电泳— 冻融法，以纯化质粒 DNA及DNA的酶切片段。方法简便易行，而 且效果良好。     

一种简易的抽提共价闭合环状DNA的方法1)

纯净的、具有生物学活性的共价闭合环状 DNA是DNA体外重组技术的一个重要基础。     

关于蚕豆M染色体异染色质区的研究

本文报告了一种用苏木精染色显现蚕豆染色体异染色质区的方法,与低温处理加孚尔根反应法作了对比,分析了它们的异同点。作者根据前人工作和本实验结果,提出了在典型异染色质区和常染色质区之间应有一些过渡等级存在的论点,并把蚕豆 M 染色体的异染色质区初步区分出五个等级,对它们的性质作了一些讨论。     

限制性内切酶Bam HI的制备

限制性内切酶是DNA体外重组极其重要的工具。Bam HI是使用最多的一种工具酶。它识别碱基的序列为:5′G↓GATTC3′。对质粒_PBR322_PBR317等只有一个酶切位点,同时它恰好切在质粒_PBR322的抗四环素基因上,所以使受体菌失去抗四环素的能力,因此,用这种质粒作DNA体外重组的载体,则便于筛选重组子。目前,Bam HI除广泛用于DNA的体外重组外,还用于DNA的限制性酶切图,DNA     

影响pBR322质粒DNA对E. Col I C600转化的因子

在DNA体外重组技术的研究和应用中，转 化是个很重要的步骤。自Cohen等人^[2]在1972 年首次用CaCl：处理的方法成功地进行了R因 子对E. colt C600的转化之后，这个方法一直 广泛地应用于大肠杆菌各受体菌系的转化。鼠 伤寒沙门氏杆菌S. typhimurium^[3]和金黄色葡 萄球菌S. aureus^[4]，的转化也都沿用此法。直 至1978年，Michael等^[5]在用pBR 322质粒 DNA对E. colt X1776的转化中却采用了与 此不同的方法。     

一种简易的抽提共价闭合环状DNA的方法

纯净的、具有生物学活性的共价闭合环状DNA是DNA体外重组技术的一个重要基础。 本文报道的是我们实验室经常使用的抽提质粒pBR 322 DNA的方法。在Zasloff等酸酚法的基础上省略了蛋白酶K和RNA酶,代之     

蚕豆(Vicia faba)有丝分裂和减数分裂过程中细胞板形成的细胞化学研究

本文以蚕豆(Vicia faba)的体细胞和花粉母细胞为材料,对细胞板形成过程进行了细胞学和细胞化学分析。有丝分裂的后期末或末期初,两组子染色体间的纺锤体区改组成成膜体。在成膜体内许多小颗粒在赤道面融合成细胞板。随成膜体的扩展细胞板横过细胞而最终形成。用PAS反应染色时,体细胞的成膜体显现粉红色,而细胞板呈现很强的多糖反应。体细胞中期的纺锤体被甲基绿-派洛宁染成鲜红色而与周围细胞质有明显区别。成膜体RNA很多,细胞板也含丰富的RNA。在减数分裂I的中期和后期纺锤体的形成是正常的,但在分裂末期不形成成膜体。早末期在纺锤体的赤道面上可以看到一种象似细胞板形成初期阶段的膜状结构。它只出现在纺锤体的赤道面上,但不能离心地扩展,并终于在第一次减数分裂末消失。这个结构对多糖和RNA呈负染色反应。作者认为,减数分裂I的细胞板不能完成其发育,至少部分地是由于没有多糖和RNA。在减数分裂Ⅱ的中期和后期形成纺锤体,但不出现成膜体。四个子核组成后,它们互相间再形成纺锤体,总共形成六个纺锤体。在每个纺锤体的赤道面上形成的细胞板对多糖和RNA呈现正的染色反应。本文对其他作者以前描述过的形成细胞板的小颗粒或小泡的化学本质,以及细胞板形成的机制做了简短的讨论。     

从小鼠胎儿基因文库中筛选分离免疫球蛋白重链C_ε基因

本文阐述了以缺口翻译制备的pIge DNA为探针(4.4×10~6cpm/μg DNA),用吸印法从小鼠胎儿基因文库中筛选分离出免疫球蛋白重链C_ε基因克隆。同时,从扩大培养的噬菌体中提取出DNA,并用EcoRI酶消化,0.7％琼脂糖凝胶平板电泳分离,分离的DNA片段转移至硝酸纤维素滤膜上,以pIgs DNA探针杂交,进而确证有两条阳性带,为免疫球蛋白重链C_s基因。电泳法测定其大小分别约为3.5 kb和3.0 kb。也显示出在小鼠胎儿中的未分化型免疫球蛋白重链C_g基因内有一个限制性内切酶Eco RI位点。     

Charon 4A噬菌体DNA的制备

由David改造的Charon 4A噬菌体,目前已普遍作为无性繁殖各种DNA的良好载体。它具有极好的安全性。Charon 3A、4A和16A噬菌体已被确定为EK_2级的载体——宿主系统。 Charon 4A噬菌体DNA为46kb碱基对长。经EcoRI酶消化成4个片段,其中19和12kb片段可作为制备真核基因文库的载体,可