慢生型大豆根瘤菌的结瘤基因转入快生型大豆根瘤菌中

通过三亲本杂交把慢生型大豆根瘤菌USDAllO的基因文库转移至Tn5诱变的不结瘤的快生型大豆根瘤菌321，338中，用链霉素和四环素平板选择大量接合子，接种大豆，通过结瘤基因功能互补，获得7个根瘤，从中分离出的每个菌株都仍具有链霉素和四环素抗性。分离其质粒，发现每个菌株都多了一条较载体质粒pLAFRl分子量大的质粒。将这些质粒转移至大肠杆菌HBl01中，分离其质粒，用32P标记的ncd探针进行DNA—DNA分子杂交，除载体质粒pLAFRl为阴性反应外，其他重组质粒均为阳性反应，即所获得pLAFRl克隆的DNA片段上确有nod结构基因。回收重组质粒pLAFRl：：nod，用限制性内切酶EcoR I进行酶切，从其琼脂糖凝胶电泳图上估计pLAFRl上克隆的DNA片段分子量为32kb。