携带高滴度猪瘟病毒C株猪睾丸细胞株的建立及蛋白质组学分析

猪睾丸细胞(Swine testicular,ST)广泛用于猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)的传代,为了进一步提高ST细胞增殖的CSFV滴度,我们利用有限稀释法克隆出一种稳定携带高滴度CSFVC株的单克隆细胞株(STC).间接免疫荧光实验结果显示,几乎100％STC细胞携带CSFV抗原;且STC细胞中CSFV滴度为106 TCID50/mL,与CSFV单次感染亲本ST细胞的病毒滴度104 TCID50/mL相比,具有更高的病毒产量.为了探究STC细胞持续带毒后细胞内蛋白表达水平的变化,我们通过非标记定量蛋白质组学分析发现541种蛋白表达水平发生明显变化,并选取其中差异显著且与病毒复制或细胞存活相关的两种上调蛋白(GRP94,GRP78)、两种下调蛋白(β-catenin,ISG15)进行免疫印迹验证.本试验成功获得了可以稳定携带高滴度CSFV C株的STC细胞株,并初步筛选了与细胞持续带毒有关的目标蛋白,不仅为简化猪瘟传代细胞苗生产工艺提供条件,也为研究STC细胞持续携带CSFV稳定传代的机制奠定基础.     

天祝白牦牛与黄牛NGB蛋白三级结构比较分析

通过比较天祝白牦牛(Bos grunniens)与黄牛(Bos taurus)NGB蛋白三级结构,分析天祝白牦牛NGB蛋白氨基酸位点突变对其三级结构的影响。利用生物信息学在线分析网站及软件对天祝白牦牛和黄牛NGB蛋白的同源性、系统发育进化、三级结构进行比较分析。结果显示,天祝白牦牛NGB蛋白进化趋于保守,83号位点为未知突变,97号位点为保守替换;83号位点突变使得NGB蛋白Ser突变为Pro,主要为R侧链由醇羟基突变为四碳环,侧链结构发生改变,使得83号位点由α-螺旋突变为无规卷曲,突变位于E、F链之间,使得E、F链之间的距离由11.79?变为8.21?,致使与卟啉环中心铁原子相连远端His 64距离由2.17?变为2.10?;97号位点突变使得NGB蛋白Arg突变为Gln,主要为R侧链由氮原子突变为氧原子,且与碳原子通过双键连接,侧链结构未发生改变,使得97号位点突变后仍为α-螺旋,突变基团指向亲水相,羧基端与近端His 96位点相连,致使His 96与卟啉环中心铁原子距离由1.98?变为2.00?。经比较天祝白牦牛两处突变未发生在NGB蛋白核心功能区,对NGB蛋白功能未产生影响;突变造成R侧链基团发生改变,可能对NGB蛋白稳定性、柔韧性及溶解度造成一定影响;核心His 64、His 96与卟啉环中心铁原子距离发生改变,说明突变极有可能会对血红素外源配体结合造成一定影响。     

红车轴草总黄酮体外清除自由基作用的研究

通过Fenton 反应产生·OH,邻苯三酚自氧化产生O·-2模型,研究了红车轴草总黄酮体外清除自由基的作用.结果显示红车轴草总黄酮在6.25～200 mg/mL范围内具有清除Fenton 反应产生·OH的作用,在6.25～100 mg/mL浓度范围内对邻苯三酚自氧化产生的O·-2具有清除作用,二者均呈明显的量效关系,对·OH和O·-2半数清除浓度分别为44.06 和54.57 mg/mL.     

猪源冠状病毒TGEV中国分离株纤突蛋白生物信息学分析

以猪源冠状病毒(Porcine coronavirus) TGEV 纤突蛋白基因序列为基础,利用生物软件对TGEV中国分离株纤突蛋白进行N-糖基化位点、跨膜螺旋、进化树、二级结构及抗原位点的预测和分析.结果显示所有TGEV毒株可分为3个基因型,4株中国分离株分别归属于以上3个基因型,属于Ⅰ型的中国株TSX在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上与其他中国株有明显的差异,而同属于Ⅲ型中国毒株SC-Y和TH- 98在跨膜螺旋的氨基酸及二级结构上非常接近,而所有中国分离株抗原表位没有明显差别,表明TGEV在中国没有显著的变异.     

甘肃兴隆山马麝呼吸系统疾病流行病初步调查

对甘肃省兴隆山国家级自然保护区马麝人工驯养场马麝呼吸系统疾病进行了自然概况及饲养管理情况调查、既往流行病学统计、临床症状和病理剖检变化观察、预防和治疗情况调查。结果表明,马麝呼吸系统疾病的流行与当地的温度和湿度(尤其是湿度)密切相关,年平均湿度较高的月份该病的发病率明显高于年平均湿度较低的月份;天气骤冷、阴雨连绵等应激因子可促使本病的发生。     

鱼类生长性状改良及其调控研究进展

水产种质资源是水产业持续、健康、稳定发展的重要物质基础,培育出优质、高产、高效的新品种是保障养殖业可持续发展的关键。鱼类的生长速度是评价养殖价值的重要指标,也是选育的重要性状之一,然而鱼类育种的基础薄弱,鱼类品种改良的理论基础和技术创新一直困扰着鱼类育种工作。本文从内因(遗传等)和外因(食物、温度、溶氧及种内种间关系等)两方面探讨了各因子对鱼类生长的影响,依此就鱼类生长性状的调控策略进行了述评,并对其做了展望,以期为鱼类生长性状的改良及其调控提供理论依据和指导。     

河西绒山羊DRB3基因外显子2多态性分析

研究采用PCR-SSCP方法检测1 046只河西绒山羊DRB3基因第2外显子的多态性,并克隆、测序群体内变异产生的各等位基因,分析各等位基因间的遗传关系和进化意义。结果表明,河西绒山羊DRB3基因第2外显子表现了18个等位基因(LG001-LG018)控制的31个基因型,LG005为优势等位基因,LG005*005为优势基因型,18个单倍型序列分析发现44个核苷酸多态位点、29个氨基酸多态位点;与GenBank下载序列比对分析结果表明,16个DRB3的等位基因是本研究首次发现;DRB3基因遗传多态指数中,观察杂合度为0.269 6,多态信息含量为0.869 9,有效等位基因数为1.369 1;经χ2适合性检验,该群体偏离了Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.05);18个DRB3基因外显子2的单倍型序列NJ系统发育树呈2支分化趋势。研究认为河西绒山羊DRB3基因第2外显子具有丰富的遗传多态性;河西绒山羊DRB3基因最初由2个等位基因突变分化成两大类等位基因。     

甘肃岷县当归不同药用部位挥发油的提取及其成分分析

采用水蒸气蒸馏法分别提取产于甘肃岷县道地产区当归的当归身、当归尾、当归头中的挥发油,使用气相-质谱联用(GC-MS)分析其挥发油的化学组分.在相同提取测定条件下,当归不同部位提取的挥发油中各化学成分含量存在差异性,当归身、当归尾、当归头在保持较多藁本内酯的同时,均含有其他有效成分,且这些有效成分种类与含量不尽相同.提示当归不同药用部位的挥发油化学成分含量具有一定的差异,药理作用的物质基础不同,探寻当归不同部位的挥发油的化学成分变化规律,为中药当归的加工及临床应用提供科学依据.     

免疫致敏结合局部乙酸刺激法建立大鼠溃疡性结肠炎模型

目的结肠黏膜组织致敏法加乙酸局部刺激法建立复合大鼠溃疡性结肠炎模型。方法30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、用药组(各10只),用结肠黏膜组织致敏法加乙酸局部刺激法建立大鼠复合溃疡性结肠炎模型后,用药组给予SASP灌胃,模型对照组和正常对照组给予生理盐水,均灌胃2周后处死大鼠,分离其结肠组织和血清。生化法检测各组结肠中MDA、SOD、GSH-PX、NO、TNOS和iNOS值,放免法测定大鼠血清及结肠IL-4及TNF-α含量变化,酶联免疫法测定大鼠血清IFN-γ含量变化。结果与空白对照组比较,模型组大鼠结肠组织MDA、NO、TNOS及iNOS含量升高,SOD、GSH-Px水平显著降低。与模型组比较,SASP组SOD、GSH-Px计数水平显著升高,组织MDA、NO、TNOS及iNOS含量降低。模型组血清和结肠IL-4含量较对照组明显降低,而模型大鼠血清和结肠TNF-α含量明显升高,模型组大鼠血清IFN-γ含量明显升高。SASP组IL-4含量升高,TNF-α和IFN-γ含量明显降低。结论改进的复合造模方法,可以较好的模拟人类UC病变的慢性活动性特点,适合药效观察和评价。