成年牦牛心室壁微血管的形态特征

用ABS血管铸型、扫描电镜观察法和血管炭素墨水灌注、组织切片法研究了成年牦牛心脏微血管的构筑特征,首次对各级微血管的管径和毛细血管的密度进行了测量,并对成年牦牛心室壁的微血管进行了分类.结果显示:成年牦牛心脏微动脉、毛细血管前微动脉和毛细血管的管径平均值分别为为 78.50±10.23 μm ,16.24±2.27 μm ,6.57±2.28 μm.其管径范围分别为12.5～100 μm,12.50～19.99 μm,6.25～12.50 μm.成年牦牛心脏微动脉一般经3-4级分支才发出毛细血管,其第一、第二、第三和第四级分支的管径平均值分别为87.64±4.87 μm, 69.46±6.67 μm, 48.52±5.77 μm,30.45±5.44 μm.其范围分别为79.55～95 μm, 59.31～79.55 μm,37.50～59.31 μm,19.99～37.50 μm.成年牦牛心肌层毛细血管的密度为2 528±263根/mm2,靠近心外膜处毛细血管的密度为1 864±179根/mm2,心内膜毛细血管的密度为1 636±235根/ mm2.成年牦牛心脏微动脉铸型表面呈典型的"树皮样"结构,偶尔可见卵圆形的内皮细胞核压痕.成年牦牛心脏毛细血管前微动脉铸型形态呈锥状,铸型表面有环行缩窄.成年牦牛心脏的毛细血管铸型表面光滑,有环形缩窄,无内皮细胞核压痕.成年牦牛心肌层中毛细血管与心肌纤维平行,并形成"H"形或"Y"形的广泛吻合,而在靠近心内膜处毛细血管形态较为扭曲,毛细血管多形成平面或立体的吻合.成年牦牛心脏微静脉管径多在300 μm以下,管腔扁且不规则,微静脉铸型呈"树根"样结构.     

羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建、表达及其免疫原性

通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )和已插入CpG序列的pcDNA3.1-CpG中,构建pcDNA3.1-P32、pcDNA3.1-CpG-P32和pcDNA3.1-CpG-MP32质粒;用脂质体法转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)试验验证其表达效果;经肌肉免疫注射健康BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测抗体;在免疫后的第3、5周取免疫小鼠的脾细胞,用流式细胞仪检测CD4 和CD8 T细胞亚群.结果所构建的真核表达载体在BHK-21细胞中都能表达P32蛋白;免疫小鼠血清在免疫第2周后均能检测到羊痘特异性IgG抗体;免疫组小鼠脾脏CD4 T细胞数目和CD4 /CD8 T细胞比值明显高于对照组.结果提示,所构建的真核载体可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答.     

鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因.将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoR Ⅰ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1.将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPV gB蛋白主要抗原域的高效表达.免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性.应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPV gB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA.结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490＞0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490＞2.应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%.     

牦牛SND1基因特征序列分析及其蛋白在乳腺的表达

Staphylococcal nuclease and tudor domain containing 1（ SND1,Tudor-SN）是一种参与基因调控的转录共激活因子蛋白,本研究意在克隆牦牛泌乳相关基因SND1,分析其生物特性,研究其蛋白在乳腺的表达。采集牦牛泌乳期乳腺组织,胰蛋白酶消化法得到原代乳腺上皮细胞,纯化到3代, 采用RT-PCR扩增克隆SND1基因,测序并拼接,并用相关生物信息软件分析牦牛SND1基因特性;用免疫组织化学和免疫荧光技术对牦牛SND1基因编码蛋白进行定位分析。获得如下结果：牦牛SND1基因全序列为3294 bp,含有2733 bp的ORF,共包含20种氨基酸。SND1基因编码蛋白为非分泌蛋白,非跨膜蛋白;同源性分析显示,牦牛SND1基因与野牛、家牛、藏羚羊、山羊、猪、野骆驼、马、黑猩猩、人、褐家鼠的同源性分别为99%、98%、96%、94%、91%、90%、90%、89%、89%、85%;系统进化树表明与野牛和家牛的进化水平较近,与人和鼠的进化水平较远。免疫组织化学染色结果显示,SND1蛋白在分泌上皮细胞（乳腺上皮细胞）和导管上皮细胞呈阳性高表达,在肌上皮细胞呈弱表达。免疫荧光显示,SND1蛋白在乳腺上皮细胞胞核高表达,胞质弱表达。上述研究结果为进一步探究SND1对牦牛泌乳机能的调节提供了相关依据,也为高寒哺乳动物的研究提供了参考资料。     

牦牛FSHR 基因部分序列多态性及其与繁殖性状的关联分析

本研究旨在分析牦牛FSHR 基因5’端及第一外显子的多态性,并分析其与繁殖性状的关联性,为从遗传角度上解决牦牛产犊间隔过长的问题提供参考。以4 个种群的667 头牦牛为研究对象,应用PCR-SSCP 方法检测FSHR 基因的多态性,并用最小二乘法分析雌性个体该基因多态性与产犊间隔的关系。结果表明,三个扩增片段共获得牦牛FSHR 基因940 bp 的序列,由5’端和第一外显子组成,与其它哺乳动物的对应序列有较高的同源性。共发现9 处突变位点,其中一处位于开放阅读框内,但属于同义突变。不同种群间的产犊间隔差异显著(P <0. 05);FSHR 基因不同基因型对产犊间隔影响差异不显著(P > 0. 05),但AB、LL、LM、LN 及RT 基因型均有缩短牦牛产犊间隔的趋势。     

褪黑素缓解空肠黏膜上皮细胞氧化损伤的效果研究

肠道黏膜氧化损伤与畜禽的生长发育和腹泻等疾病的发生密切相关，而褪黑素作为一种吲哚胺类化合物，具有明显抗氧化保护作用。为探究褪黑素对肠黏膜上皮细胞氧化损伤时的保护作用，本研究选取原代小鼠空肠黏膜上皮细胞，利用硫酸亚铁和过氧化氢处理建立氧化损伤模型，并通过添加不同浓度的褪黑素预处理上皮细胞，检测细胞损伤、氧化产物、抗氧化酶和炎性相关细胞因子的表达变化。结果发现，硫酸亚铁和过氧化氢处理后，黏膜上皮细胞明显受损，丙二醛含量显著增加、抗氧化酶表达水平降低。而褪黑素能明显减轻细胞氧化损伤程度、抑制丙二醛的产生并增加抗氧化酶的表达。同时，褪黑素还能显著减少炎性因子白介素-6的表达，并增加趋化因子白介素-8的表达。因此，褪黑素可以缓解自由基增加诱发的空肠黏膜上皮细胞氧化损伤，并能够减轻细胞损伤引起的炎症反应。     

肠道湿热泄泻和寒湿泄泻“同病异治”的物质基础研究

目的 建立湿热、寒湿泄泻大鼠模型，采用白头翁汤与理中汤治疗湿热、寒湿泄泻模型大鼠，分析湿热、寒湿不同证型泄泻大鼠临床症状、细胞密度、氧化应激等指标的差异，为探索泄泻“同病异治”的治疗特色提供客观依据。方法 将SD大鼠分为：空白组(CON组);湿热泄泻模型组(DHD组);湿热+白头翁汤组(DHB组);湿热+理中汤组(DHL组);寒湿泄泻模型组(CDD组);寒湿+理中汤组(CDL组);寒湿+白头翁汤组(CDB组)7个组。番泻叶+湿热、寒湿环境建立湿热、寒湿泄泻大鼠模型，采用白头翁汤和理中汤进行“以方测证”研究，记录各组大鼠的临床症状。HE染色观察脾组织病理学变化。AB-PAS染色观察结肠、回肠中杯状细胞，回肠中潘氏细胞密度变化。Western Blot检测大鼠结肠组织Nrf2、HO-1、AQP-4的表达量。结果 (1)湿热、寒湿泄泻大鼠模型成功建立，湿热泄泻大鼠临床症状更明显。(2)白头翁汤、理中汤可有效改善湿热、寒湿泄泻大鼠的临床症状与脾病理组织变化。(3)泄泻大鼠肠杯状细胞、潘氏细胞密度均降低(P<0.01),湿热泄泻大鼠更明显。白头翁汤、理中汤可分别提高湿热、寒湿泄泻大鼠肠杯状...     

干扰素刺激基因IFIT1抑制蓝舌病病毒的复制

为了研究干扰素刺激基因1(Interferon-induced protein with tetratricopeptide repeats 1,IFIT1)在蓝舌病病毒1型（Bluetongue virus serotype 1,BTV1）感染复制过程中的作用，首先利用实时定量PCR检测到BTV1感染绵羊睾丸细胞后IFIT1基因的转录水平明显升高，利用RT-PCR方法扩增获得羊IFIT1基因，测序后进行生物信息学分析，将其克隆到质粒载体pcDNA3.1/（+）上，构建重组表达质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1，将其转染BHK-21细胞，观察到IFIT1基因在细胞内的成功表达，然后利用BTV1感染质粒pcDNA3.1-OV-IFIT1转染的细胞，从病毒的mRNA转录、蛋白表达和病毒滴度的变化评价IFIT1对BTV1复制的影响。结果显示，IFIT1在细胞中的过表达可显著抑制BTV1复制，相反，敲低IFIT1的表达可促进BTV1的复制。本研究首次报道了干扰素刺激基因IFIT1在BTV1感染复制过程中的作用，这将有助于揭示BTV1和宿主细胞IFIT1的相互作用机制，同时也为抗病毒药物研发...     

苦豆子对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症的抗炎作用和机制研究

以RAW 264.7细胞为研究对象，探究苦豆子对脂多糖诱导的RAW 264.7细胞炎症的抗炎作用和机制。采用水煎煮、水超声、75%乙醇回流和75%乙醇超声分别制备苦豆子水煎煮提取物(water decocting extract, WDE)、水超声提取物(water ultrasonic extract, WUE),75%乙醇回流提取物(ethanol reflux extract, ERE)和75%乙醇超声提取物(ethanol ultrasonic extract, EUE),D101大孔树脂吸附法制备苦豆子总生物碱提取物(total alkaloids extract, TAE)和总黄酮提取物(total flavonoids extract, TFE),水提醇沉法制备苦豆子总多糖提取物(total polysaccharides extract, TPE),通过酸性染料比色法、NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH分光光度法、苯酚-硫酸法分别测定TA、TF和TP的含量，并采用正交法初步设计TAE、TFE和TPE ...