新生隐球菌的酚氧化酶及用于菌种鉴定的研究

采用4％玉米浸汁咖啡酸琼脂(CACA)培养基。观察了具不同生物学特性的新生隐球菌的酚氧化酶活性,并对临床常见的多种酵母和酵母样真菌作了该酶的检测。结果,受试的3个变种、5种血清型和尿素酶阴性新生隐球菌均呈明确的阳性反应;150株常见酵母和酵母样真菌中43株新生隐球菌全部呈酚氧化酶阳性。107株其它酵母和酵母样真菌全部阴性。具各种不同生物学特性的新生隐球菌均特异性地产生酚氧化酶,用检测该酶的方法作该菌鉴定的特异性和敏感性均为100％,且可于72小时内得到结果。此外,结合尿素酶试验可以准确的鉴定出尿素酶阴性的新生隐球菌。     

红茶菌抗菌蛋白产生方式的初步研究*

从红茶菌液中分离得到膜醋酸菌与裂殖酵母。采用单菌培养与混合菌培养,探讨了各菌对红茶菌抗菌蛋白的产生所起的作用。初步推断,裂殖酵母先合成相关蛋白,该蛋白经膜醋酸菌产生的酶修饰后,抗菌活力显著提高。不同属酵母与膜醋酸菌共培养,结果表明裂殖酵母优于其它酵母。     

产香酵母Pichia myanmarensis LX15的分离纯化及对精酿啤酒风味物质形成的影响

为了适应精酿啤酒对个性化风味的需求,能产生特定风味化合物的产香酵母成为研究者的研究重点。从精酿啤酒原液中分离到1株产香酵母LX15菌,该菌细胞呈圆形或卵圆形、多极芽殖生长;LX15菌在玉米粉培养基上培养7~10 d不形成假菌丝,在酵母膏蛋白胨培养基上培养3 d能够形成子囊孢子。经生理生化特征和系统发育分析,确认该生香酵母为Pichia myanmarensis菌中的一个菌株,所产主要风味化合物包括乙酸乙酯、乙酸异戊酯、己酸乙酯和辛酸乙酯。当LX15菌与啤酒酵母C1菌共发酵时,能够产生协同效应,提高酯类化合物和高级醇类的含量,并与LX15菌的接种比例正相关,但并不影响啤酒酿造的整体发酵速率和发酵能力。因此,LX15菌是一株适于提高精酿啤酒风味的产香酵母菌。     

对从面包中筛选酵母菌及其发酵特性的研究

目的 从野生酵母筛选出对可溶性糖产生既可氧化又可还原、并发生反式反应的酵母菌株,使其能应用于相关物质的生物合成.方法 对从面包中滋生出多种的野生菌落采用依形态、使易糖氧化为主要特征筛选出野生酵母菌落.结果 从3株野生菌株(JM1、JM2、JM3)中筛选出JM1,该菌株能使体内发生反式催化的氧化反应.结论 该菌株适宜的生...     

发酵过程中原花色素对酵母氧化状态的影响

【目的】研究葡萄酒发酵过程中原花色素对酿酒酵母氧化状态的影响。【方法】以一株商业酵母和一株实验室筛选酵母为研究对象, 向模拟葡萄汁培养基中添加0.1、1.0 g/L原花色素, 考察发酵末期酵母活菌数和存活率, 以及不同时期酵母超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)的含量。【结果】原花色素可以提高发酵末期活菌的数量及存活率, 同时会提高胞内SOD和CAT的活性, 降低胞内MDA的含量, 而且原花色素含量越高作用越明显。【结论】在发酵过程中原花色素可以清除细胞内活性氧, 对细胞产生保护作用, 进而保证发酵顺利进行。     

肉毒碱乙酰转移酶基因敲除对长链二元酸生产代谢过程的影响

在利用热带假丝酵母发酵生产长链二元酸的过程中 ,脂肪酸将进入 β 氧化途径 ,代谢产生能量 ,从而降低产物收率。首次以负责运输的肉毒碱乙酰转移酶为改造目标 ,在肉毒碱乙酰转移酶基因中插入潮霉素B抗性基因 ,构建DNA转化质粒 ,并进行一次同源重组 ,得到肉毒碱乙酰转移酶基因单拷贝敲除的基因工程菌。根据摇瓶实验结果 ,该基因工程菌与原始菌株相比 ,十三碳二元酸的产量与摩尔转化率分别提高了 13 0 %和 11 8%。     

异源表达脂肪酶的重组酵母筛选培养基的改良

在脂肪酶产生菌的筛选中,最常用的方法是三丁酸甘油酯琼脂平板透明圈法和橄榄油琼脂平板变色圈法。而传统的三丁酸甘油酯平板缺乏有效营养成分,重组酵母无法生长;橄榄油平板灵敏度较低,低脂肪酶活力的重组酵母不能产生变色圈,这给产脂肪酶基因工程菌的鉴定带来了困难。本研究在三丁酸甘油酯平板的基础上,添加适合酵母生长的营养成分,获得了新的改良培养基;重组酵母在该培养基上生长良好、水解圈清晰,检测脂肪酶灵敏度高。     

红酵母产类胡萝卜素提取工艺的优化研究

目的:从提取溶剂及提取条件等方面对红酵母产类胡萝卜素提取工艺进行了优化研究。方法:用单因子实验对提取溶剂进行了筛选;用析因试验对提取条件进行了分析研究;通过最陡爬坡实验和中心组合设计实验,优化得到了最佳的类胡萝卜素提取条件。结果:结果表明丙酮和二甲亚砜组成的复合体系是理想的提取溶剂。溶剂添加量、提取温度、提取时间、丙酮与二甲亚砜组分比例都对红酵母产类胡萝卜素提取产生一定影响,其中溶剂添加量和丙酮与二甲亚砜组成比例的影响最为显著(P<0.001)。最佳优化提取条件为:溶剂添加量为42.66%(V/V),丙酮与二甲亚砜组成比例为62.47%(V/V),温度为20℃,提取时间为90min,在此条件下红酵母产类胡萝卜素的最大提取量为5.51μg/ml。结论:实验得到了红酵母发酵产类胡萝卜素溶剂提取条件的一个非常合适的模型。     

脂肪酶产生菌的筛选及不对称水解合成S-(+)-萘普生

从１６个土样中分离获得一株脂肪酶产生菌Ｅ－５３＃,该菌可优先水解Ｓ－（＋）－萘普生甲酯为Ｓ－（＋）－萘普生,ｅｅ值可超过８７％。该菌经初步鉴定为芽孢杆菌,最佳产酶培养基为葡萄糖０．５％、蛋白胨０．５％、酵母膏０．２％。０．５％的橄榄油,能诱导脂肪酶的大量产生。     

混菌状态对新菌系产生VC前体KGA的影响

通过测定氧化葡萄糖酸杆菌产酸变化,研究了新菌系混菌状态对产酸的影响。结果显示：新混菌体系中,种液KGA为4.1-5.5mg/ml,混合菌菌群氧化葡萄糖酸杆菌/掷孢酵母为26-35：1,混菌生物量达0.46-0.60(OD值）,有利于二菌在发酵中相互协调,促进产酸,调节接种生物量可增加产酸速度,缩短产酸周期,但不影响最终产酸量。     

梗孢酵母属的一个新种

作者于1978年从福建省福州市西湖公园的芒果花中分离出一株酵母1519。该菌株不产生子囊孢子、掷孢子,亦未见到有锁状连合。未发现有性繁殖。无性繁殖是在母细胞上产生小梗,小梗上产生子细胞,子细胞还可再生小梗再生子细胞。如果子细胞不脱落则成链状或分枝的链状。不发酵任何糖。按照形态和繁殖特征只符合Lodder(1970)酵母分类专著中半知菌部分的梗孢酵母。因此将它放入梗孢酵母属,命名为福州梗孢酵母(Sterigmatomyces fuzhouensis sp.n.)。     

环境因子对新组合菌系产生Vc前体KGA的影响

通过测定氧化葡萄糖酸杆菌产酸变化,研究了环境因子对新菌系产酸酌影响。结果显示：新混菌体系产酸温度范围为24—33℃,28℃左右为最适,适当增加通气量(25—35ml装液量,300ml三角瓶)有利于掷孢酵母和氧化葡萄酸杆菌协调,通气量过大、过小都会破坏二菌比例,进而破坏而二菌间协调性,不利于2-酮基-L-古龙酸的积累。     

碱茅(puccinellia tenuifolra)Put-Cu/Zn-SOD基因的克隆及在酵母中的表达

从碱茅根cDNA文库分离得到Put-Cu/Zn-SOD全长cDNA,其序列全长为2 700 bp,该基因的开放读码框为长615 bp,所编码的蛋白由204个氨基酸组成,其预测分子量约为20.6 kD、理论等电点约为5.63.Put-Cu/Zn-SOD氨基酸序列与水稻Cu/Zn-SOD序列有较高的同源性为87%.将Put-Cu/Zn-SOD基因构建到酵母表达载体pYES2,并转化至酵母(INVSc1).对pYES2-Put-Cu/Zn-SOD转化酵母进行盐碱、氧化胁迫实验.结果表明:重组酵母的抗盐碱、氧化能力明显高于对照(pYES2转化酵母),结果显示了碱茅的Cu/Zn-SOD基因在酵母表达中,具有提高酵母抗盐碱和耐氧化能力.     

微生物的正烷烃代谢I．假丝酵母的正烷烃代谢产物的研究

我们研究了假丝酵母属不同菌种代谢正烷烃的产物,观察到其发酵液中均产生醇、酸、酯,由此可认为醇、酸、酯是烷烃代谢中正常而普遍的产物。由于菌种不同,代谢产物和途径亦不相同,如AS 2．1207菌能一端甲基氧化烷烃生成一羧酸,亦能两端甲基氧化生成二羧酸。而1230号菌及其突变株u㈦-则主要两端甲基氧化生成二羧酸。此外,As2．1 207悄能利用烷烃产生不饱和一羧酸及比基质链长的一羧酸,说明它姓一株具有脱氯驶加长碳链能力的黹株。     

α-1,6-甘露糖转移酶基因敲除的毕赤酵母菌株构建及其用于融合蛋白HSA/GM-CSF 表达的研究

酵母对蛋白的糖基化修饰过程不同于哺乳动物,其特点为产生高甘露糖型糖基且易发生过度糖基化。本研究通过两步基因重组敲除目标基因的方法成功敲除了毕赤酵母中的α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)基因,获得了och1敲除的菌株。以此为基础,构建了高效表达人血清白蛋白与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子融合蛋白(HSA/GM-CSF)的工程酵母,与野生型毕赤酵母表达的过度糖基化HSA/GM-CSF不同,och1敲除菌表达的该融合蛋白糖基化程度明显降低,这为该融合蛋白的开发提供了重要基础。och1敲除菌株的构建不仅提供了一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,而且为进一步的酵母糖基工程改造提供了基础。     

解脂假丝酵母利用正癸烷产生癸二酸的研究

我们从石油酵母和细菌中,以及采自不同地区的油浸土、植物的花和果实中,经过了广泛筛选,得到能利用正癸烷产生癸二酸的优良菌株酵母19—2。经鉴定为解脂假丝酵母(Candidalipotytica)。初步研究了该菌在摇瓶发酵中产生癸二酸的条件,在正癸烷、尿素、磷酸二氢钾、玉米浆和醋酸钠组成的培养基上,可以氧化正癸烷而产生癸二酸。发酵96小时左右,投油比10％(v／v),发酵液中癸二酸含量为32—40克／升,对正癸烷收率为43—55％。在发酵培养中,用醋酸钠作碳源,菌生长良好。正癸烷不作唯一生长碳源,只由菌体酶催化转化为癸二酸。产酸的最适氮源是尿素,玉米浆对产癸二酸较为有利。在普通300,~y{---角瓶中,装液量对产癸二酸影响很大。在带有挡板三角瓶中,装量对产癸二酸亦有关系。此外,种子种龄、种子生长的最终PH、接种置对产癸二酸亦有很大影响。并做了500升罐的扩大试验,产酸稳定,重现性良好。     

一株产絮凝剂不动杆菌的筛选及其絮凝特性

从活性污泥中筛选出一株高效的微生物絮凝剂产生菌,鉴定为鲍曼不动杆菌.蚕豆根尖细胞微核试验未显示该菌株所产絮凝剂具有遗传毒性.该菌产絮凝剂的最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和酵母浸出汁,培养时间为24 h.在絮凝体系中加入Ca2 能明显提高发酵液的絮凝率.在pH为8.0时对高岭土悬浊液和污水具有良好的絮凝效果.     

三种李斯特菌菌体蛋白提取方法的比较

通过对3种李斯特菌菌体蛋白提取方法主要是破壁方式的比较,找到一种可高效提取李斯特菌菌体蛋白的方法,为该菌的深入研究提供可靠技术。以绵羊李斯特菌新鲜液体培养物为材料,收集菌沉淀,分别选用3种破壁方式破除细胞壁,三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)-丙酮沉淀法沉淀破壁液中的菌体蛋白,采用聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western-blot分析所得菌体蛋白。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法提取得到的李斯特菌菌体蛋白SDS-PAGE条带清晰丰富,Western-blot条带特异。溶菌酶-超声破壁-TCA-丙酮沉淀法可有效提取李斯特菌菌体蛋白,满足常用蛋白分析技术的要求,是一种提取李斯特菌菌体蛋白的可靠方法。     

一株产絮凝剂不动杆菌的筛选及其絮凝特性

从活性污泥中筛选出一株高效的微生物絮凝剂产生菌, 鉴定为鲍曼不动杆菌。蚕豆根尖细胞微核试验未显示该菌株所产絮凝剂具有遗传毒性。该菌产絮凝剂的最佳碳源和氮源分别为葡萄糖和酵母浸出汁, 培养时间为24 h。在絮凝体系中加入Ca2+能明显提高发酵液的絮凝率。在pH为8.0时对高岭土悬浊液和污水具有良好的絮凝效果。     

中间硫杆菌C3对硫氰酸钠的氧化

从处理硫氰酸盐废水的混合菌中分离到一株兼性自养菌——中间硫杆菌C3。该菌既能利用有机化合物,如糖、有机酸、醇、蛋白胨、尿素和丙烯腈而异养生长,也能氧化硫代硫酸钠和硫氰酸盐自养生长。该菌氧化硫氰酸钠的能力强、速度快,48小时可氧化1200mg／L,硫氰酸钠既能作为能源,又能作为碳和氮源。低浓度的糖、醇和有机酸不影响菌对硫氰酸钠的氧化能力,而300mg肛丙烯腈和低浓度酵母浸出液及天冬酸钠对硫氰酸钠的氧化有抑制作用。氧化1n,肘硫氰酸钠形成ln·M硫酸盐和0．5加村的氨,pH变化不大。呼吸试验表明,氧的吸收与细胞的培养条件,以及反应时的细胞浓度和基质浓度有关。从加葡萄糖和硫氰酸钠的培养基中,收集的细胞悬液为一40mg／L,在300m喀／L硫氰酸钠时,氧的吸收最高。氧和硫氰酸钠的克分子比为1.52—1.61：1,呼吸商值为0.35。本文根据呼吸商值和代谢过程推论出硫氰酸钠生物氧化的反应式。