水稻可溶性糖蛋白的纯化与鉴定研究

从水稻鲜叶中提取总蛋白,对总蛋白中的蛋白质含量进行了测定;通过硫酸铵沉淀将总蛋白提取液进行分级,从而达到了总蛋白细分和放量的目的。四级份的分级蛋白分别通过ConA-Sepharose 4B 亲和层析进行糖蛋白纯化,按吸收峰收集的各级糖蛋白混合物进行冷冻干燥,得到干粉;结合PAS法染色和考马斯亮蓝R-250染色对四级份的糖蛋白样品鉴定,在其中3个级份中均检测出糖蛋白;由于感度的差异,按考马斯亮蓝R-250染色可检测出近30种糖蛋白(包括部分糖肽),按PAS法染色可检测到7种糖蛋白;对3种含量较高的糖蛋白进行了胶上纯化,3种糖蛋白的PAS法染色均证实了3种样品为单一的糖蛋白或者糖肽,分别命名为RG1、RG2和RG3。     

植物中铵转运蛋白的研究进展

铵转运蛋白在众多生物中被克隆与鉴定,它是一种广泛存在于微生物、植物细胞及动物的细胞膜上主动转运铵离子的载体,分子量约为48kD,含有10～11个跨膜域.本文阐述了植物铵转运蛋白分离鉴定的过程,对于铵转运蛋白的结构、功能、基因表达调控等方面作了较详细叙述.不同氮素条件下,铵转运蛋白基因通过转录调控表现了对铵离子吸收转运的不同特点,使植物根系在较宽的浓度范围中吸收铵离子,为细胞内铵离子库的内稳态提供了理论依据.铵转运蛋白有助于作物更有效的吸收氮素,为农业生产粮食增收提供了有利保障.     

碱茅(puccinellia tenuifolra)Put-Cu/Zn-SOD基因的克隆及在酵母中的表达

从碱茅根cDNA文库分离得到Put-Cu/Zn-SOD全长cDNA,其序列全长为2 700 bp,该基因的开放读码框为长615 bp,所编码的蛋白由204个氨基酸组成,其预测分子量约为20.6 kD、理论等电点约为5.63.Put-Cu/Zn-SOD氨基酸序列与水稻Cu/Zn-SOD序列有较高的同源性为87%.将Put-Cu/Zn-SOD基因构建到酵母表达载体pYES2,并转化至酵母(INVSc1).对pYES2-Put-Cu/Zn-SOD转化酵母进行盐碱、氧化胁迫实验.结果表明:重组酵母的抗盐碱、氧化能力明显高于对照(pYES2转化酵母),结果显示了碱茅的Cu/Zn-SOD基因在酵母表达中,具有提高酵母抗盐碱和耐氧化能力.     

水稻NADP-苹果酸酶的原核表达、纯化和抗体制备

构建了水稻NADP-ME_2基因cDNA的原核表达载体pQE30,并诱导表达出有生物学功能的融合蛋白。用Ni-NTA琼脂糖亲和层析纯化出NADP-ME_2融合蛋白,并测定了融合蛋白酶学特性(V_(max)、K_m、K_(cat)、底物特异性)。用纯化的NADP- ME_2融合蛋白免疫家兔,制备出抗水稻NADP-ME特异性抗体。全蛋白双向电泳后Western印迹表明水稻中至少有4个NADP-ME家族蛋白质成员。     

一株耐碳酸盐Bacillus属细菌的鉴定与特性分析

本研究从松嫩平原pH值在10.0以上、植物难以生存的斑块状裸地中分离到一株细菌SA-5,经鉴定该菌株为革兰氏染色阴性,杆状,接触酶阳性,氧化酶阴性,菌落呈橙黄色的好氧细菌,可水解淀粉.抗逆特性分析显示,菌株SA-5可在高达275 mmol/L Na2CO3或pH 12.0以及2.0 mol/L NaCl培养基中生长,中性条件下生长明显受到抑制,其中对碳酸盐的耐受性远高于普通植物.根据16S rDNA序列等分析结果显示,菌株SA-5属于Bacillus属,仅与菌株Bacillus aurantiacus K1-5T相似性最高,为99%,与其余已发表菌株均低于97%.由以上结果可见,菌株SA-5是Bacillus属中一株嗜碱耐盐菌,并且菌株SA-5对耐碳酸盐基因的开发具有潜在的价值.     

26个唐菖蒲品种RAPD分析

唐菖蒲是世界著名的切花之一,由于是纯粹的外来品种,目前国际上对其分类尚无统一的方法,主要是依据其生物习性等形态特征进行分类,受环境影响很大。同工酶是基因的产物,利用同工酶可以进行唐菖蒲品种鉴定和分类,但它在植物的不同器官组织发育的不同时期存在差异,而分子标记技术具有不受环境、器官、组织发育不同时期影响、遗传性稳定、分析简单等特点而被广泛应用在花卉品种分类上。利用RAPD技术对26个主要唐菖蒲切花品种进行分类和亲缘关系的研究,从520个随机引物中筛选出33个用于PCR反应,共在206个位点上扩增出条带,平均每个引物扩增位点6.24个,多态性位点185个,占总带数的89.8%,可以进行品种的鉴定。从分子水平揭示出唐菖蒲切花品种种质资源遗传基础狭窄,夏花大花型唐菖蒲品种间存在一定的亲缘关系。     

朝鲜碱茅抗坏血酸过氧化物酶的基因克隆和表达

构建到酵母表达载体pYES2-PutAPx,并导入酵母IVSC1菌株后在半乳糖的诱导下分析具有抗氧化性.本研究成功克隆了抗坏血酸过氧化物酶基因(PutA Px)编码区,并做了初步分析,为进一步研究逆境诱导的氧化胁迫的作用机理研究奠定了基础.     

小球藻亲环蛋白A(CyPA)基因克隆及表达特性分析

亲环蛋白广泛存在于生物体中,并发挥着重要的作用。本研究从小球藻cDNA文库中筛选获得亲环蛋白A(CyPA Gene);通过提取转化35S::CyPA::GFP融合质粒拟南芥的原生质体研究表明,CyPA定位于叶绿体中;过表达CyPA基因的酵母能够增强InV酵母对NaCl、NaHCO3胁迫的生长能力;通过实时定量PCR研究表明,在非生物胁迫的条件下,CyPA基因的表达量升高,推测CyPA基因与非生物胁迫抗性相关,亲环蛋白A参与生物体的抗逆生存能力。     

茶树叶糖蛋白分离及鉴定的初步研究

茶叶是一种有益健康的保健食品,保健功能在于它有多种化学活性成分。近年来研究表明,茶叶糖蛋白可能是茶叶的保健因子之一。从茶树叶中提取了总蛋白、45%~70%硫酸铵分级总蛋白、分级蛋白Sephadex G-100凝胶层析分离出粗糖蛋白,根据糖蛋白糖链及蛋白的对照染色鉴定出多种茶树叶糖蛋白,并从SDS-胶上快速纯化了三种茶叶糖蛋白。ConA-Sepharose 4B亲和层析从茶树叶总蛋白中分离出16种天然活性糖蛋白。     

杂草稻的研究现状与展望

杂草稻属于野生稻与栽培稻中间类型.一方面,由于杂草稻与栽培稻之间的前期形态、生理生化特性相似,很难化学控制其在稻田发生,影响水稻产量与品质;另一方面,杂草稻长期自然生长繁衍,其抗病、虫、寒、旱、盐碱等特性优于栽培稻,而且与栽培稻的亲缘关系相对接近,是一种改良栽培稻抗逆性的天然基因库.