十七碳二羧酸的发酵研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)UP—3—24为出发菌株,经亚硝酸多次诱变,获得一株从正十七烷(nC17)生产十七碳二羧酸(Dc17,)的优良生产菌株NP—260。以20％(V／V)的nC17为碳源,摇瓶发酵4天,Dc17,达8 0 g／L以上。在16L自动控制罐上,不另加其乏生长碳源,加人总量30％(V／V)nC17,进行发酵试验,产酸高峰期,每升发酵液每小时能够产生1．8g的Dc17。其中产酸速率为每小时0.18％,24小时每开发酵液可增加40g以上的Dc17。发酵6天,Dc17高达133g／L以上,回收残烃后,对nC17的转化率为61．8％,后处理收率为77.6％．DC17的纯度为95．4％。     

癸二酸发酵的研究

从保藏菌种中筛选到一株由正癸烷产生癸二酸较高的酵母菌L4(candida sp.)。经诱变、摇瓶培养条件试验,该菌的诱变株L9能直接利用正癸烷大量产生癸二酸,摇瓶发酵5天产癸二酸约60g/L。当加入青霉素、链霉素改变细胞透性;加入脂酰CoA合成酶抑制剂抑制β-氧化;加入NADH和Fe~(?)辅酶促进烃氧化和W-氧化作用均能大幅度地提高产量,产率增加30%左右。16立升自动发群罐生产癸二酸,5天产量稳定在71g/L以上。产品提取率按发酵最终产量和体积计在85%以上。成品分析结果,其主要指标符合企业标准。     

烷烃发酵产生1，13-十三碳二元酸及其诱导作用的研究

从能利用正十二烷产生1,12-十二碳二元酸的热带假丝酵母突变株D28出发,经两次紫外线照射诱变,选育到一株从正十三烷产生1,13-十三碳二元酸较高的突变株2—23号菌。该突变株较出发菌株提高产酸率20％,达40．4g／L。突变株2—23也能将一定链长的长链烷烃以较高的产率转变成相应的单一二元酸。此外,在产酸摇瓶条件试验中观察到烷烃的诱导作用,使突变株产酸能力得以提高。用烷烃预培养的种子发酵正十三烷,其产生1,13一十三碳二元酸的量较糖质碳源培养的种子发酵时要提高30％。     

烷烃发酵产生1，13-十三碳二元酸及其诱导作用的研究

从能利用正十二烷产生1,12-十二碳二元酸的热带假丝酵母突变株D28出发,经两次紫外线照射诱变,选育到一株从正十三烷产生1,13-十三碳二元酸较高的突变株2—23号菌。该突变株较出发菌株提高产酸率20％,达40．4g／L。突变株2—23也能将一定链长的长链烷烃以较高的产率转变成相应的单一二元酸。此外,在产酸摇瓶条件试验中观察到烷烃的诱导作用,使突变株产酸能力得以提高。用烷烃预培养的种子发酵正十三烷,其产生1,13一十三碳二元酸的量较糖质碳源培养的种子发酵时要提高30％。     

正烷烃发酵生产长链混合二羧酸I．菌种的筛选、诱变及鉴定

从702株酵母菌中筛选到21株能利用混合正烷烃产生较多二羧酸的菌株,其中1230号菌株产二羧酸最较高,而产一羧酸极少,经鉴定为热带假丝酵母(Candida tropicalis)。1230号菌株以癸二酸及十二碳二羧酸作指示培养基的唯一碳源,经亚硝基胍及紫外线诱变,挑选出在指示培养基上不生长,而在完全培养基上生长的菌落,最后得到产酸量为2．43％的突变株Us-21。其发酵产物分离提纯后,经气液相色谱鉴定为与基质链长相应的长链混合二羧酸。     

利用正癸烷发酵产生癸二酸的酵母19—2菌株的鉴定

对分离筛选所得的产酸较高,酸质较纯的酵母19—2菌株进行了鉴定,根据其具有较发达的假菌丝,不产生子囊孢子,利用葡萄糖,赤藓醇,不同化硝酸盐;冻化牛奶等主要特征,定为解脂假丝酵母(Candidalipolytica)。该菌对直链烷烃能很好利用,具有较强的趋化性。酵母19—2菌株是一株利用石油正癸烷产生癸二酸的优良菌株。本文报道了对酵母19—2菌株的鉴定     

发酵生产十六烷二羧酸的研究

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)T_25-14为出发菌株,经紫外线多次诱变,获得生产十六烷二羧酸(DC₁₆)能力比原株提高25％以上的4株突变株。其中UH-3-9突变株经多次复筛,产DC16能力都比T25-14,菌株提高50％以上。经摇瓶条件试验,不加其他生长碳源。只加15％(v／v)正十六烷(nCl6),发酵96h,DC16为48．2g/L,转化率41％,产品纯度95．9％。     

杆菌JSM1601发酵产核酸的研究

确定了杆菌（Brevibacterium ammoniagenes）JMS1601发酵产核酸的最佳发酵培养基：葡萄糖12％,酵母浸膏1．5％,磷酸二氢钾0．3％。最佳摇瓶培养条件：温度32℃,摇床转速160r／min,接种量（v／v）5％,装液量100ml／500ml。     

解脂假丝酵母8-2利用液体石蜡发酵生产工业用柠檬酸

果园土壤筛选出一株能利用液体石蜡生成柠檬酸的酵母菌,经鉴定为解脂假丝酵母(Candida lipolytica) 8—2。在该菌所产生总酸中约50％为柠檬酸。摇瓶及500升发酵罐试验证明,8—2菌在含10—12％液体石蜡、0.25—0.5％玉米浆及6％CaCO,作中和剂的培养基中,一般能生成7％以上的柠檬酸,最高可达10．72％。此种工艺可生产工业用柠檬酸。     

N^＋离子注入热带假丝酵母对长链二元酸产量的影响

用热带假丝酵母(Candidatropicalis)SCB412作为出发菌株,经能量50KeV、剂量l×1011～5×1015ions/cm2的N+离子注入诱变处理,以产生可遗传的诱变.N+离子注入后,存活率与剂量呈指数衰减关系log(存活率%)=8.23-0.604×log(剂量),在培养过程中可观察到酵母菌菌落和细胞形态均发生了变化.经筛选,获得了一株能够利用正十二烷烃发酵产生长链二元酸的高产菌热带假丝酵母SCB609.在初始正十二烷烃浓度为15%(v/v)下产酸量由43.5g/L上升到73.2g/L.比较两株菌发酵生长特性的差异,产酸过程有一定的变化.     

蛭弧菌J26转化山梨糖生产2—酮基—L—古龙酸发酵条件的研究

对新分离得到的能产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸（2-KGA）的优良菌株蛭弧菌J26,进行了一系列摇瓶发酵条件试验,通过添加一些其它有机碳源或其它氮源,可使蛭弧菌J26摇瓶发酵产生2－KGA由50-60mg／ml上升到70mg／ml以上,采用SMA探针技术的流加发酵摇瓶试验产生2－KGA可以达到83．9－91．7mg／ml。本文还对发酵时种子液的接种量、发酵初始精浓度、初始pH值等对产酸的影响,进行了比较研究,对摇瓶发酵全过程的单一菌体形态特征进行了电子显微镜观察。     

假单胞菌产脂肪酶条件的初步探索

对假单胞菌（Pseudomonassp）2106菌株产脂肪酶条件的初步探索表明,该菌株脂肪酶为组成型,不受油脂类底物的诱导。碳源的种类（单糖、双糖、多糖）和浓度对产酶影响不大,氮源以豆饼粉和玉米浆混合添加最好。最适发酵温度为32℃,摇瓶转速140r／min。实验中还通过正交试验优化了产酶培养基组成。     

枯草杆菌JSIM-1018糖代谢突变株积累D-核糖研究

从收集的Bacillus,Brevibacterum,Corynebacterium,Pseudomonas,Arthrobacter等属菌种中进行D-核糖产生菌的筛选,对其中BacillusSM-18菌株用紫外线和甲基磺酸乙酯诱变,选育到莽草酸营养缺陷型突变株JSIM-1018．发酵产物经物理、化学鉴定为D-核糖．某些有机氮源如酵母粉、玉米浆、牛肉膏、蛋白陈以及某些芳香族氨基酸对突变株积累D-核糖有促进作用。在以葡萄糖为碳源的培养液中,摇瓶发酵D-核糖最高可达929／L,3000L发酵罐中     

维生素C二步发酵的新组合菌系

以掷孢酵母作为伴生菌与氧化葡萄糖酸酐菌组成新混菌体系,对其产酸性能和特点进行了研究。实验室摇瓶结果显示,新菌系混菌状态不同,产酸不同,以KGA含量为4．8,小菌／掷孢酵母为31：1种液接种时,最有利于产酸,增加接种生物量可提高产酸速度,缩短发酵周期,但不影响最终产酸量,相同条件下,新菌系产酸能力高于现有菌系,酸量增加5mg/ml-7mg/ml,发酵周期缩短6h-8h,酸转经率提高3％4－％,最高产酸点PH值下降约0．5,表现出较大的产酸潜力和可修饰性。     

芦竹内生真菌F0238细胞生长及其代谢调控

对芦竹内生真菌F0238的细胞生长和代谢产曲酸量进行了代谢调控。结果表明,F0238生长及产曲酸的营养和环境条件为：PDA培养基,8％淀粉为碳源,0．2％蛋白胨为N源,发酵温度28℃,初始pH为6．5,发酵时间5d／（120h）,装液量80mL/500mL三角瓶。在摇瓶试验的基础上,对该菌发酵过程作了初步放大试验（10L全自动发酵罐）,得到F0238发酵过程的动态曲线。动态曲线反映了在一个发酵周期内,发酵液的pH值、DO值及残糖的降低趋势和生物量与抗菌产物量的上升趋势。     

产酸丙酸杆菌生长特性及5L罐发酵动力学研究

论文在摇瓶水平对产酸丙酸杆菌基本生长特性（温度、pH、摇床转速、接种量、种龄等）、碳源、氮源利用情况、产物抑制及5 L罐发酵动力学进行了研究。结果表明,该菌在32℃,初始pH 6．5,摇床转速150 r/min,接种24 h的种子液,接种量为5％条件下,产酸丙酸杆菌生长及产酸水平达最高值;该菌可利用碳源十分广泛,但对氮源要求比较高,只可利用有机氮源;在不同初始葡萄糖浓度下,产酸丙酸杆菌生长及产酸水平差异不大,无明显底物抑制现象;在2g/L的初始丙酸盐浓度下,该菌生长受到明显抑制;在5L发酵罐中,初始葡萄糖浓度为58．8 g/L,发酵72 h,葡萄糖消耗完全,丙酸终浓度达22．4 g/L,丙酸得率和产率分别达0．381 g/g和0．295 g/（L·h）,丙酸占总酸比例达72．10％。     

供氧对产丙三醇假丝酵母产丙三醇发酵研究

研究了产丙三醇假丝酵母(Candidaglycerolgenesis)产丙三醇及副产物与氧供给的关系。摇瓶试验发现其它营养条件一定,玉米浆添加量决定酵母量。在04%的玉米浆和装液比008时产丙三醇最高,副产物乙醇、乙酸和乙酸乙酯最小,玉米浆和装液比影响丙三醇和副产物的形成。在5L的反应器中以搅拌转速控制供氧水平,菌体生长阶段比耗氧速率为28mg/(g·h),在发酵阶段比耗氧速率16mg/(g·h)。适量供氧能得到高产率的丙三醇,而只产生微量的乙醇、乙酸和乙酸乙酯。     

丙酸发酵的研究

北京丙酸杆菌(Propionibacrerium beijingense)不能利用无机氮。蛋白胨和酵母膏的种类对该菌生长和产酸的影响显著,其中以酵母膏最好,浓度以l一2％为宜。丙酸发酵最适温度为25一30℃,最适pH为6．5,葡萄糖浓度以1-2％为佳。使用下列发酵培养基(％)：葡萄糖2．酵母膏2,CaCO3,1．5,丙酸产量为9．35g／L,对糖的产率达51．94％,丙酸对乙酸的比例近5：l。     

碳源和氮源对玫瑰栗色链霉菌No．336产葡萄糖异构酶的影响

玫瑰粟色链霉菌(Streptomyces rosecocastaneus) No. 336变异株对碳源或氮源的利用及其和产葡萄糖异构酶的关系,用半合成培养基进行了摇瓶液体培养试验。测定以15种单精和糖醇、8种寡糖和5种多糖作为碳源,6种含氮化合物作为氮源对菌的生长和产酶的影响。证明N。．336菌株除利用L一阿拉伯糖和D二木糖等五碳糖作为碳源外,也能利用D一葡萄糖等六碳糖作为碳源和能源。糖醇对酶的形成或无明显影响,或有抑制作用。在供试的氮源中,玉米浆和酵母膏对产酶的影响明显优于蛋白胨,该菌几乎不能以无帆氮化合物或乙酸镶作为唯一的氮源。C／N比的试验表明,2：1、1：1或3：1的培养基组成有利于葡萄糖异梅酶的形成,提高氮素含量虽能促进菌的生长,但对产酶不利。以麦麸水解液和玉米浆为主要成分的培养基有利于No.336菌株的生长和产酶,每毫升培养液的酶活力在180单位以上。     

产氨短杆菌B1-15-15分段合成法制造5’-肌苷酸及其它核苷酸类物质

产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)B_1-15-15,为野生型,需生物素,对Mn++不敏感菌株,它具有“分段合成”核苷酸的能力,将外源核酸碱基转变为相应的核苷酸类物质。在30℃摇床培养3天后,加入0.3—0.5％的次黄嘌呤继续培养2天,可产生5'-IMP12一16克／升。发酵的适宜条件为：培养基分别灭菌前的pH,糖镁液为5．7(自然pH),磷氮液为7.0;发酵过程中补加尿素控制pH6.7—7.0,尿素总量0.7％左右;玉米浆用量3—4％;Mn++ 50一100微克／升。在30℃培养2天,补加0．4％尿素和0．4%次黄嘌呤,提高温度至37℃培养,可缩短发酵周期至2.5天,5'-IMP产量为9．54克／升。