大肠埃希菌耐药性及其基因同源性分析

目的 研究临床分离的大肠埃希菌对常用抗生索的耐药性及其基因分型,了解其耐药性趋势与传播流行情况,为临床合理治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考依据。方法 采用常规鉴定技术鉴定细菌;采用K—B纸片扩散法测定77株大肠埃希菌对19种药物的耐药性;K—B法鉴定产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）;通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）法对其进行基因分型以确定菌株之间的亲缘关系;FINGERPRINT Ⅱ软件进行细菌基因指纹图谱分析。结果 大肠埃希菌对青霉素类、喹诺酮类药物和氨曲南的耐药性明显增高,亚胺培南和美罗培南是大肠埃希菌感染患者的首选药物;经ESBLs确证试验,ESBLs阳性率为28．60％（22／77）;产ESBLs大肠埃希菌经PFGE指纹图谱分析,除第62株和第70株相似性系数为78．27％外,其余相似度均低于70．0％;ESBLs大肠埃希菌阴性株中除少数几对菌株相似性系数较高外,其余呈散在分布,且电泳带存有6条以上的不同条带,为流行病学无关的不同克隆。结论 大肠埃希菌对常用抗生索耐药性明显增高,且呈多重耐药趋势;该研究尚不能证明存在大肠埃希菌爆发性流行感染,提示可能存在院内感染大肠埃希菌的优势克隆;PFGE基因分型方法是耐药性与流行状况分析的有效手段。     

大肠埃希菌O157及其检验

以往,对食品中的大肠埃希菌检验主要是从食品卫生指标角度进行。通过对大肠埃希菌的检验,以确定食品受粪便污染的程度,而O157：H7大肠埃希菌系临床腹泻病原菌,是致病性大肠埃希菌的重要成员。近年,由该菌引起的食物中毒来势颇为凶猛,深受世界各国政府所重视。本文试对该菌的有关情况做一简述。1腹泻原性大肠埃希菌的分类和引起的疾病（见表1）引起腹泻的大肠埃希菌,已知有肠致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、产肠毒素大肠埃希菌（EIEC与肠出血性大肠埃希菌（EHEC）或称产Vero毒素大肠埃希菌（VTEC）…     

致病性大肠埃希菌血清型分布及对抗生素的敏感性分析

目的了解临床病例中致病性大肠埃希菌的主要血清型和对抗生素的敏感性。方法致病性大肠埃希菌的鉴定使用血清学的方法,药敏试验采用纸片扩散法,WHONET 5.0软件分析药敏结果。结果致病性大肠埃希菌的检出率为5.93%,共分离到7种血清型。在分离到的菌株中,ESBLs的检出率达45%。结论致病性大肠埃希菌是引起小儿腹泻的一种重要致病菌,应开展对致病性大肠埃希菌的检测,根据药敏结果选用合适药物。     

大肠埃希菌O157：H7毒力的分子生物学研究进展

肠出血性大肠埃希菌是一种致病性大肠埃希菌,与人类的出血性肠类和溶血性尿毒症有关,本文介绍了肠出血性大肠埃希菌O157：H7毒力基因研究的新进展,包括研究较多的噬菌体携带的slt基因,引起上皮细胞粘附/消除损害的eae基因,特异质粒上的hly基因和一些新的毒力基因,即tir,toxB,iha和hokw基因。     

医院与社区获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因比较分析

目的 比较在本地区医院感染与社区获得性大肠埃希菌中耐消毒剂基因的流行情况.方法 收集从临床标本中分离出的大肠埃希菌112株,根据感染途径不同,将其分为医院与社区获得性两组,用PCR方法检测耐消毒剂基因qacE△1,并进行组间检出率比较.结果 本地区医院与社区获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因的携带率分别为58.1％(43/74)和23.7％ (9/38),组间比较差异有统计学意义(P ＜0.05);74株医院获得性大肠埃希菌中,产ESBL率为71.6％(53/74),38株社区获得性大肠埃希菌中,产ESBL率为39.5％ (15/38).医院与社区获得性产ESBL大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE△1检出率分别为64.2％(34/53)与6.7％(1/15),组间比较差异亦有统计学意义(P＜0.01).结论 医院获得性感染大肠埃希菌耐消毒剂基因的携带率高于社区获得性大肠埃希菌,产ESBL阳性菌株的携带率显著高于产ESBL阴性菌株,这可能是由于医院环境中消毒剂选择压力和/或携带耐消毒剂基因的菌株在医院内水平传播速度较快的结果.     

多重PCR方法快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌

肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)和侵袭性大肠埃希菌(EIEC)是引起腹泻的主要大肠埃希菌,威胁着食品安全和人类健康,建立同时检测4种致腹泻性大肠埃希菌的方法具有重要意义。基于ETEC LT肠毒素基因、EPEC bfpA基因、EHECO抗原基因和EIEC侵袭性质粒特异性基因,设计了4对特异性引物,通过对单一PCR反应条件的优化建立了快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌的多重PCR方法,彼此之间无交叉反应。该多重PCR方法具有良好的特异性和灵敏性,对24株致病菌进行检测,所试4株致腹泻性大肠埃希菌均为PCR阳性,其他菌株则为阴性。实践证明,利用所建立的多重PCR方法对124份肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出15份阳性,与国标(GB4789.6-1994)检测结果相同。结果表明本文建立的多重PCR方法可用于ETEC、EPEC、EHEC和EIEC的单一或混合感染的鉴别诊断及食品安全风险评估,具有良好的实用性。     

肝移植术后感染大肠埃希菌的DNA多态性与耐药性分析

应用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)技术分析肝移植术后大肠埃希菌感染株DNA的多态性,并对其进行分型,研究肝移植术后大肠埃希菌感染的流行状况,并探讨大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)与基因型之间的关系。应用1条含10个碱基的随机引物对20株大肠埃希菌的DNA进行随机扩增,ESBLs试验使用双纸片协同法。20株大肠埃希菌经RAPD分为11个基因型,ESBLs检测12株大肠埃希菌阳性,ESBLs阳性大肠埃希菌在700 bp有共同条带。肝移植术后感染以内源性感染为主,肠道细菌移位可能是大肠埃希菌感染的一个主要因素,ESBLs阳性检出率高,ESBLs阳性与基因型之间具有相关性。     

Vgb在大肠埃希菌中表达及生物活性的研究

目的将vgb克隆到大肠埃希菌表达载体pQE-30中,研究vgb表达产物对细胞摄氧能力的影响。方法利用PCR和基因重组技术克隆vgb与大肠埃希菌表达质粒pQE V,大肠埃希菌转化采用CaCl2法,VHb活性分析采用CO示差光谱法。结果克隆了vgb和重组质粒pQE V,vgb基因在大肠埃希菌中获得表达,在A420 nm处达到典型吸收峰。结论 vgb在大肠埃希菌中表达产物加强了对氧的摄取能力,对解决细胞高密度发酵培养中氧需矛盾、促进代谢产物的产率具有非常重要的应用价值。     

禽源致病性大肠埃希菌安徽分离株I型菌毛pilA基因的序列测定与分析

目的探明大肠埃希菌I型菌毛pilA基因在不同宿主来源菌株间的同源性,为利用Ⅰ型菌毛基因诊断和防治大肠埃希菌病提供理论基础。方法以禽源致病性大肠埃希菌安徽分离株基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增Ⅰ型菌毛pilA基因,并进行序列测定与分析。结果 13株不同血清型禽源致病性大肠埃希菌安徽分离株均携带pilA基因,彼此间该基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别介于84.9%～99.7%和86.2%～99.2%。pilA基因核苷酸序列在安徽分离株与鸡源参考株、猪源参考株以及人源参考株之间的同源性分别为85.9%～99.7%、85.9%～93.9%和87.5%～100%,氨基酸序列同源性分别为83.1%～99.2%、88.5%～93.8%和90%～100%。系统发育进化树分析显示JD16、JD34、JD11、JD24、YD2、JD8和YD1禽源安徽分离株与人源参考株sPH2的亲缘关系较近,在进化树的同一分支上;GD3、YD5、GD2、YD3、YD5和YD7禽源安徽分离株与鸡源参考株PDI-386和猪源参考株107/86的亲缘关系较近,在进化树中属于同一分支;GD1禽源安徽分离株与鸡源参考株HY1-2和MS2-1的亲缘关系较近,在进化树中属于另一分支。结论大肠埃希菌I型菌毛pilA基因在不同宿主来源菌株及不同血清型菌株之间高度保守,可作为大肠埃希菌病的诊断基因和疫苗候选基因。     

肠致病性大肠埃希菌eae基因及编码蛋白紧密素

肠致病性大肠埃希菌是引起婴儿腹泻的一类重要病原菌,主要病理学变化是引起肠黏膜A／E损伤。eae基因编码的紧密素是引起A／E损伤的主要毒力因子,本文主要是对eae基因和紧密素的分子结构,作用及其表达调控进行综述。     

032肠致病性大肠埃希菌的效应蛋白在肠黏膜刷状缘损伤中的作用

肠致病性大肠埃希菌（EPEC）在肠道细胞的定植可对小肠黏膜细胞产生典型的附着和缺失性（A／E）损伤,其病理改变是局部刷状缘微绒毛的破坏,细菌的紧密黏附及黏附部位细胞骨架的聚集。EPEC通过Ⅲ型分泌系统（TTSS）将效应蛋白运输到宿主细胞内,导致A／E损伤及腹泻。与A／E损伤相关的基因及LEE致病岛编码的效应蛋白包括Tir、     

致病性大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因的双重PCR检测方法的建立

目的实现对致病性大肠埃希菌（E．coli）、沙门菌（Salmonella）的同时检测,建立快速灵敏的双重PCR检测方法。方法以致病性大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因为研究对象,根据GenBank发表的大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因序列,分别设计合成了大肠埃希菌毒力岛irpl、irl）2和fyuA,沙门菌毒力岛mgtC、sseL和sopB等6对引物,以禽致病性大肠埃希菌（CVCC1565）菌株和沙门菌（ATCC9150）菌株的核酸混合物为模板,经引物特异性试验,引物组合,成功建立了快速鉴别检测致病性大肠埃希菌和沙门菌的双重PCR方法。结果特异性试验结果显示,引物irpl、irp2和fyuA仅能扩增出大肠埃希菌（CVCC1565）的特异性片段,大小分别是799、414和948bp;引物mgtC、sseL和sopB仅能扩增出沙门菌（ATCC9150）的特异性片段,大小分别是500、269和1000bp。敏感性试验结果表明大肠埃希菌和沙门菌的最低检测限分别为2．2×101CFU／mL和2．0×101CFU／mL。结论本研究建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于致病性大肠埃希菌和沙门菌的联合检测与鉴别诊断。     

泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌基因分型

目的 了解深圳市人民医院临床泌尿系感染标本中产ESBLs大肠埃希菌的基因型特点.方法 收集近几年深圳市人民医院临床尿液标本中非重复的产ESBLs大肠埃希菌43株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,阳性株进行DNA测序分型.结果 43株产ESBLs大肠埃希菌中40株CTX-M基因阳性,分别为CTX-M-14型36株,CTX-M-9型2株,CTX-M-15型2株,其中17株CTX-M-14型菌株检出TEM-1基因;所有菌株均未检出SHV基因.结论 本地区致泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌中,CTX-M-14型为主.     

大肠埃希菌性阴道感染小鼠模型的建立

目的 :建立大肠埃希菌定植的阴道感染小鼠模型。方法 :在阿莫西林溶液 (12 5mg/ml)冲洗小鼠阴道冲洗处理下 ,将致病性大肠埃希菌接种到小鼠阴道内。结果 :各组小鼠阴道冲洗液检出的平均对数值比较 ,经过阿莫西林溶液小鼠阴道冲洗处理后再接种大肠埃希菌的阿莫西林 +大肠埃希菌组 ,阴道内定植的大肠埃希菌数量 (8 18± 1 0 9)较经过生理盐水小鼠阴道冲洗处理后再接种大肠埃希菌组 (5 72± 0 6 8)明显增多 (P <0 0 5 ) ,而且小鼠阴道感染的症状明显 (P <0 0 5 )。结论 :通过抗生素处理后 ,再在小鼠阴道内接种大肠埃希菌 ,大肠埃希菌能够在小鼠阴道内得到定植 ,即建立起大肠埃希菌性阴道感染的小鼠模型。     

木糖异构酶基因xylA表达载体构建

以大肠埃希菌MG1655的基因组为模板,通过PCR扩增获得木糖异构酶基因xylA。利用敲除编码对基因转录起负调控作用的lacIq基因的大肠埃希菌/谷氨酸棒杆菌穿梭质粒pEC-XK99E,酶连后转化大肠埃希菌BL21和谷氨酸棒杆菌ATCC 13032。成功构建出了具有大肠埃希菌BL21表达活性的木糖异构酶表达载体pEC(lacI-)-xylA。     

构建大肠埃希菌底盘细胞合成N-糖基化蛋白的研究进展

N-糖基化是自然界中主要的翻译后修饰之一,对蛋白质结构和功能的影响十分重要。随着糖工程领域的快速发展,在大肠埃希菌(Escherichia coli)中完成治疗性蛋白的N-糖基化修饰变得更加普遍。利用基因编辑技术对大肠埃希菌基因组进行编辑,使大肠埃希菌获得新的性状和生产能力,可以提高目标糖蛋白的产量。本文综述了通过基因编辑技术改造大肠埃希菌基因组来构建大肠埃希菌底盘细胞,及在此基础上优化N-糖基化效率以提高N-糖基化蛋白产量的研究进展,为构建具有N-糖基化修饰功能的工程菌株提供依据,为更好地进行糖蛋白生产,及进一步高效开发“糖蛋白工厂”提供策略。     

合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布与耐药性分析

目的了解安徽省合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布和耐药状况,以期筛选出菌苗株和指导临床合理用药。方法对46份疑似大肠埃希菌病病料进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。采用玻片凝集试验对分离到的46株致病性大肠埃希菌进行血清型鉴定。同时分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测致病性大肠埃希菌的耐药性和ESBLs阳性菌株。结果46株致病性大肠埃希菌中,除7株细菌未能定型外,其余39株细菌分布于10个血清型,O127：K63血清型为优势血清型,占定型菌株的33．33％。46株致病性大肠埃希菌对21种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,15个ESBLs阳性菌株表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率均高于ESBLs阴性菌株。结论O127：K63血清型为优势血清型,可作为菌苗株。合肥地区动物源性大肠埃希菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠埃希菌多重耐药更为突出。     

大肠埃希菌的分型研究

目的分析上海某医院各科室分离大肠埃希菌的药敏状况和致病性,了解大肠埃希菌在该院流行情况。方法采用K-B琼脂法进行药敏试验,多重PCR技术进行基因分型。结果药敏结果显示该菌对多种常用抗生素具有耐药性,仅对阿米卡星等药物敏感。85株菌分为4个基因型,其中B2型25株,致病性最强;D型37株,致病性次之。菌株间亲缘关系表明可能存在院内流行。结论实验获得菌株具有较强耐药性和致病性,应当采取相应的措施预防院内感染的流行。     

大肠埃希氏菌的分型方法及其研究进展

大肠埃希氏菌是一种条件性致病菌,致病性的大肠埃希氏菌具有高度的传染性,会严重危害健康。快速准确地测定大肠埃希氏菌的污染来源对有效缩小疫情影响范围极有帮助,从而避免对人类健康和经济贸易造成重大损失。建立简便高效的分型方法是微生物溯源的关键,常见的大肠埃希氏菌分型方法可分为表型分型和分子分型,这些分型方法各有优劣,具有不同的适用范围。本文详细介绍了大肠埃希氏菌的分型方法,并对国内外大肠埃希氏菌分型的研究进展进行综述,为致病菌溯源方法的选择提供参考依据,对防御并控制致病菌引起的流行病传播具有重要的意义。     

内蒙古地区临床危重患者三种常见感染细菌耐药基因的检测及耐药性分析

目的:探讨内蒙古地区临床危重患者常见感染细菌耐药基因的检测及耐药性相关因素,以便临床合理运用抗菌药物,为病原菌感染的预防和控制提供依据。方法:选取2010年1月至2013年1月在我院重症监护室治疗的病例中检测出的215株细菌为研究对象,运用相关的检测手段分析细菌的耐药性和耐药基因情况。结果:经过临床的检测后得出大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌分别为85株、55株和75株,其中产ESBLs大肠埃希菌54株,非产ESBLs大肠埃希菌31株;产ESBLs肺炎克雷伯菌15株,非产ESBLs肺炎克雷伯菌40株。大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌对美罗培南、亚胺培南的敏感性最高,且在产与非产ESBLs菌株耐药上比较有差异性(P0.05);产与非产ESBLs菌株耐药基因检测方面比较无明显差异性(P0.05)。结论:大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍氏不动杆菌均存在多重耐药情况,且耐药与喹诺酮耐药机制有一定的相关性。