一种新的大肠埃希菌O157∶H7 vero细胞毒素的纯化及特性分析

目的研究出血性大肠埃希菌的vero细胞毒素。方法通过超声破碎,硫酸铵沉淀及两次离子交换层析,再经过凝胶过滤,最终从大肠埃希菌O157∶H7 882364菌株获得了一种新的vero细胞毒素。对此毒素进行细胞毒性测定和分子量及等电点的测定,并对毒素的N端15个氨基酸序列进行了检测。结果用凝较过滤层析测定纯化的vero细胞毒素分子量为43KD,等电点为3.8,蛋白N端15个氨基酸序列为SFELPALPYAKDALA,其对vero细胞的CD50为4bg。结论这种毒素与VT1毒素和VT2毒素明显不同,因此初步确定为新毒素,称之为VT3。通过实验将推动我国对出血性大肠埃希菌O157∶H7的致病性研究和对VT类毒素和抗毒素的进一步研制和应用。     

微管相关蛋白tau与朊蛋白的相互作用

微管相关蛋白tau参与了许多神经退行性疾病的发生, 其中包括一些人类可传播性海绵状脑病. 为了探讨tau与朊蛋白(PrP)之间可能存在的关系, 首先通过GST pull-down和免疫共沉淀等技术发现重组tau蛋白可通过微管结合区与来源于正常叙利亚仓鼠脑组织中的正常细胞膜朊蛋白(PrP^C)和羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织的异常朊蛋白(PrPSc)相结合. 利用免疫共沉淀实验发现在正常和羊瘙痒因子感染的仓鼠脑组织中存在tau蛋白与PrPC和PrPSc的相互作用, 并且利用激光共聚焦方法检测到PrP和tau蛋白在CHO细胞内具有共定位的关系. 为了确定PrP与tau蛋白相互作用的部位, 构建了不同区域的PrP片段, 从而证明PrP与tau蛋白相互作用的区域位于PrP的N端序列(23~91 aa). PrP与tau蛋白分子间相互作用的直接实验证据提示tau蛋白可能参与PrP的正常生理功能以及朊病毒病的病理过程.     

Saponin对不同趋化因子受体的活化的影响研究

本文通过在稳定表达趋化因子受体的细胞系CHO/CXCR1、CHO/CXCR2、CHO/CXCR3、CHO/CXCR4和CHO/CCR5上进行[35S]GTPγS结合实验,研究了Saponin 对不同趋化因子受体活化的影响。实验结果表明：① 对于CHO/CXCR1和CHO/CXCR4, 在反应体系中添加10 μg/ml Saponin能提高受体G蛋白与[35S]GTPγS的特异性结合,使刺激比率(CPMAgonist/CPMBasal)分别从125%和184%扩大到481%和415%;② 对于CHO/CCR5,10 μg/ml Saponin对受体G蛋白与[35S]GTPγS的特异性结合无影响,刺激比率大小未变;③ 对于CHO/CXCR2和CHO/CXCR3,10 μg/ml Saponin降低了受体G蛋白与[35S]GTPγS的特异性结合,使刺激比率分别从171%和168%减小到130%和114%。实验结果表明Saponin是与受体发生作用,对于不同的趋化因子受体,Saponin对受体的活化的影响不同。     

巨噬细胞炎症状态与过氧化物酶体增殖的相关性研究

肥胖引起巨噬细胞浸润机体组织,诱发慢性低度炎症反应,是形成胰岛素抵抗的重要诱因。因此研究影响巨噬细胞炎症状态的因素,有助于深入了解胰岛素抵抗的形成机理。该文通过免疫荧光、Real-time PCR等技术,研究巨噬细胞炎症状态与胞内过氧化物酶体数量之间的关系。结果表明,当巨噬细胞极化为炎症状态的M1型,胞内过氧化物酶体数量变化不显著;当巨噬细胞极化为抗炎状态的M2型,胞内过氧化物酶体数量显著升高。当饱和脂肪酸诱导巨噬细胞极化为炎症状态的类M1型,胞内过氧化物酶体数量变化不显著;当不饱和脂肪酸诱导的抗炎症状态的类M2型,胞内过氧化物酶体数量显著升高。此外,使用过氧化物酶体增殖缺陷型(Pex3~(–/–))巨噬细胞重复上述实验,也可以极化为M2/类M2型,呈现抗炎状态,但胞内过氧化物酶体数量无显著变化。综上所述,该研究发现巨噬细胞M2/类M2型极化能够诱导胞内过氧化物酶体增殖,但过氧化物酶体增殖不是M2/类M2型极化的必要条件。     

应用基于粒子群优化的支持向量机算法识别真核生物基因的RNA聚合酶II启动子序列

启动子是调节基因表达的重要元件,对其的研究对于阐明基因转录调控机制具有重要意义。作者依据RNA聚合酶Ⅱ启动子序列特性选取高效的特征提取方法,构建了基于粒子群优化的支持向量机(particle swarm optimization-support vector machine,PSO-SVM)新方法,用以识别真核生物基因RNA聚合酶Ⅱ启动子。结合5-折交叉检验方法,得到启动子-外显子、启动子-内含子和启动子-基因间序列的分类准确率分别为97.1%、96.7%和98.8%,其马修斯相关系数分别为0.962、0.934和0.976。结果说明,对比其它启动子识别方法,PSO-SVM方法更能有效地识别真核生物基因启动子。     

一些化学和物理因素对羊瘙痒因子263K蛋白酶抗性的影响

朊病毒(prion)具有超强的理化因素抵抗能力,可抵抗常规物理和化学因子对其感染性的灭活.为了研究不同理化因素对PrPSc蛋白酶抗性的影响,采用不同浓度的NaOH、NaOCl、SDS、温度变化以及3%SDS与温度变化联合处理羊瘙痒因子263K,再经蛋白酶K(Proteinase K,PK)消化,通过Western blot检测观测PrPSc的PK抗性.结果发现,上述几种理化因素对羊瘙痒因子263K的PK抗性有不同程度的破坏作用.NaOH浓度在0.05mol/L以上,NaOCl游离氯含量在0.1%以上,温度在121℃以上都能使PrPSc的PK抗性消失;而1%～5%SDS不能使PrPSc的PK抗性完全消失,3%SDS与温度的联合作用可有效地破坏PK抗性,同时使所需温度降低.还发现,在较低浓度的化学因子或温度的条件下即可出现PK抗性的破坏,而在较高浓度或温度处理时才出现蛋白本身的消失.这些结果提示,与PrPSc感染性的结果相似,PK抗性可受相似浓度或强度的理化因素影响,具有明显的浓度或强度相关性,对判定消除PrPSc的感染性有一定的指导意义.     

禽流感病毒毒力与生态学选择

禽流感（Avian Influenza,AI;也有俗称为Bird Flu）是禽流行性感冒的简称,是由甲型流感病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）的感染和（或）疾病综合征^[1]。甲型流感病毒具有16个血凝素亚型（Subtype）,分别为HA1～16;9个神经氨酸酶亚型,分别为NA1-9。与其他动物来源的流感病毒不同的是,从禽（鸟）来源的甲型流感病毒含有所有不同的HA与NA亚型,因此被认为禽（鸟）是甲型流感病毒的储存基因库。HA亚型与NA亚型的组合构成了甲型流感病毒的亚型联合（HANA）,即为血清型^[2]。     

斑皮柠檬桉的组织培养与快速繁殖

1植物名称斑皮柠檬桉[Corymbia citriodora ssp．variegata（F．Muell．）K．D．Hill＆L．A．S．Johnson]。2材料类别带腋芽的茎段。3培养条件基本培养基为DCR和MS。（1）诱导培养基：2DCR＋6-BA1．0mg．L-1（单位下同）＋NAA0．05;（2）继代增殖培养基：2DCR＋6-BA0．5＋NAA0．05;（3）生根培养基：1／2MS＋NAA0．8＋IBA0．5。以上培养基中均加入2％蔗糖和0．5％琼脂,     

羊瘙痒病263K毒株感染的仓鼠脑中PrP分子形式多样性的动态测定

正常细胞的朊蛋白(PrPC)代谢和构象的改变是引发动物和人类可传播性海绵状脑病(transmissiblespongiformencephalopathies,TSEs)的根本原因。将羊瘙痒病(scrapie)仓鼠适应株263K颅内接种仓鼠,在接种后的第20、40、50、60、70、80天,通过Westernblot动态检测仓鼠脑中PrP存在的形式。结果在接种后第40天,在感染动物脑组织中即检测到PrPSc分子,比临床症状出现的时间早(平均潜伏期为66 7±1 1天),且无糖基化形式的PrP分子所占百分比在接种后期增加明显。除了标准分子量大小(30kD～35kD)的PrP分子外,在感染动物脑中存在着高分子量和低分子量形式的PrP分子。定量分析显示,随着接种潜伏期的延长,不同形式PrP分子的含量也在增加,其中低分子量形式的PrP分子与临床症状的出现密切相关。蛋白去糖基化实验表明,在感染动物脑组织中,除了标准分子量大小的PrP蛋白外,还存在一条更小分子量的PrP条带,而正常动物脑组织仅存在标准大小的PrP分子。低分子量形式的PrP分子具有与全长PrP分子相类似的糖基化模式。结果提示,scrapie263K感染的仓鼠脑组织中存在不同分子形式的PrPSc,其PrP分子的代谢可能不同于正常动物。     

基于核基因分子多态性的葡萄属物种鉴定

葡萄属(Vitis)植物主要分布于东亚、北美洲以及欧洲至中亚地区。由于葡萄主要采用无性繁殖方式,地区间品种交流较多,同名异物及同物异名现象较为普遍,给葡萄属物种的分类、鉴定造成一定困难。本研究通过序列同源性比对的方法对葡萄属4种植物基因组的保守编码区进行比对,挖掘保守序列93条,经过验证,找到了一条可用于开发多态性分子标记的KOG3174同源序列,并根据该序列设计得到3对引物,可用于4种葡萄的分类、鉴定。