鲍曼不动杆菌耐消毒剂基因检测

目的 了解深圳市人医院鲍曼不动杆菌抗季铵盐类消毒剂基因的检出率及基因型特点.方法 收集深圳市人民医院临床标本中分离鲍曼不动杆菌67株,PCR检测分离株的qacA/B、qacE△1、qacC、qacG和qacJ 5种抗季铵盐类消毒剂基因.结果 67株鲍曼不动杆菌中qacE△l基因阳性42株(62.6％),qacA/B与qacG基因各有一菌株阳性,未检测出qacC或qacJ基因阳性菌株.结论 深圳市人医院鲍曼不动杆菌中抗季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型.     

SHV-59型β-内酰胺酶的克隆与表达

目的构建SHV-59型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增SHV-59基因全长编码序列,扩增产物经NdeI、XhoI酶切后连接至pET-26b（＋）表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点（PI）。结果PCR扩增获得879bp的产物,重组表达载体经NdeI、XhoI酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,表明载体[pET-26b（＋）／SHV-59]构建成功。目的等电点为7．6。结论β-内酰胺酶SHV-59在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。     

深圳市金黄色葡萄球菌耐药性分析及分子分型

目的了解深圳市金黄色葡萄球菌的耐药性特点及分子分型特征。方法收集2012年来自深圳市7所医院的428株金黄色葡萄球菌,以琼脂稀释法测定其对12种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),采用聚合酶链式反应(PCR)检测杀白细胞毒素(PVL),并对携带PVL基因的菌株进行多位点基因序列分型(MLST)。结果428株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)共116株(26.2%),甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)共312株(73.8%)。在12种抗菌药物中,该菌对青霉素和红霉素的耐药率最高,分别为88.8%和44.2%;未发现替考拉宁、利奈唑胺和万古霉素的耐药株。MRSA对青霉素和环丙沙星的耐药率显著高于MSSA。428株金黄色葡萄球菌中,有60株(14.02%)携带PVL基因。MLST分型结果显示共有14种已知序列型和4种新的序列型,其中ST59和ST338最多,分别为16株和12株。结论深圳地区金黄色葡萄球菌MRSA检出率以及对多种抗菌药物的耐药率均低于全国平均水平,PVL基因阳性率处于中等水平;存在多种ST分型,以ST59和ST338多见,具有遗传多样性和独特的遗传背景。     

乳酸球菌,挛生球菌在新生儿颊粘膜的定植

本文选择颊粘膜上皮细胞表面有微菌落形成的２０例新生儿,取颊粘膜试子进行了较为细致的细菌培养、分离和鉴定,结果其中１３例菌落生长很纯,均为α－溶血性菌落;另有３例α－溶血性菌株为绝对优势菌,二者共计１６例,占８０％（１６／２０）。其中ＬＣ．ｌａｃｔｉｓ．ｃｒｅｍｏｒｉｓ与Ｇｅｍｅｌ－ｌａ在新生儿高定植率以及培养时菌落很纯显示对其它杂菌有较强的定植抗力等等,均提示它们是新生儿颊粘膜的有益定植菌,并很可能在新生儿呼吸系统的抗感染功能中发挥一定作用。     

头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌AmpC基因和ESBLs检测及耐药性分析

目的了解深圳地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌头孢菌素酶(AmpC酶)基因型分布、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及其耐药特点。方法收集深圳地区三家大型综合医院临床标本分离对头孢西丁耐药的肺炎克雷伯菌73株。用碱裂解法提取菌株的质粒,采用多重PCR扩增AmpC基因,应用DNA测序确定其基因型。并对所有菌株进行ESBLs表型确证试验;用K-B法对其进行药物敏感试验。结果 48株(65.8%)AmpC基因扩增阳性,经DNA测序显示,其中46株为DHA-1型,1株为CMY-2型,1株同时产DHA-1和CMY-2型;73株肺炎克雷伯菌中49株ESBLs阳性,其中36株AmpC基因和ESBLs均为阳性。AmpC和(或)ESBLs阳性菌株对多数药物的耐药率高于AmpC和ESBLs均阴性者。结论本地区头孢西丁耐药肺炎克雷伯菌质粒AmpC酶检出率高,基因型主要为DHA-1,同时产AmpC酶和ESBLs菌株较常见。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶基因型分析

目的 了解深圳市人民医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的ESBLs和头孢菌素(AmpC)酶基因型分布特点.方法 收集深圳市人民医院产ESBLs肺炎克雷伯菌临床菌株64株,PCR法分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,并进行DNA测序分型.同时应用多重PCR对其中的头孢西丁耐药株进行AmpC酶基因扩增,DNA序列确定其基因型.结果 64株产ESBLs肺炎克雷伯菌中,61株(95.3％)检出至少一种ESBLs基因.其中51.6％ (33/64)检出SHV-12基因,46.9％(30/64)检出CTX-M-14基因.11株(17.2％)检出AmpC基因,其中10株为DHA-1型,1株为CYM-2型.19株(29.7％)检出2种以上的ESBLs或ESBLs合并AmpC基因.结论 该院产ESBLs肺炎克雷伯菌中,最常见的ESBLs基因型为SHV-12和CTX-M-14型;AmpC酶的主要基因型为DHA-1,菌株中同时产生多种β-内酰胺酶的较多.     

泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌基因分型

目的 了解深圳市人民医院临床泌尿系感染标本中产ESBLs大肠埃希菌的基因型特点.方法 收集近几年深圳市人民医院临床尿液标本中非重复的产ESBLs大肠埃希菌43株,PCR分别扩增菌株的TEM、SHV、CTX-M基因,阳性株进行DNA测序分型.结果 43株产ESBLs大肠埃希菌中40株CTX-M基因阳性,分别为CTX-M-14型36株,CTX-M-9型2株,CTX-M-15型2株,其中17株CTX-M-14型菌株检出TEM-1基因;所有菌株均未检出SHV基因.结论 本地区致泌尿系感染产ESBLs大肠埃希菌中,CTX-M-14型为主.     

泌尿系感染病原菌分布及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院泌尿系感染病原菌的分布及耐药性,为临床医师合理使用抗菌药物提供科学依据。方法对655株泌尿系统感染病原菌进行常规鉴定,用k-B法或ATB-FUNGUS 3对其进行药敏试验。结果病原菌构成比前5位分别为大肠埃希菌（37.9%）、假丝酵母（18.0%）、肠球菌（13.1%）、肺炎克雷伯菌（6.6%）、铜绿假单胞菌（6.3%）。病原菌对各种抗菌药物产生了不同程度的耐药,肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率为14.3%～26.8%。结论深圳市人民医院泌尿系感染病原菌主要以大肠埃希菌、假丝酵母和肠球菌等为主,病原菌对抗菌药物已产生了一定的耐药性,应加强监测与控制。     

OKP-B-13型β-内酰胺酶的克隆与表达

目的构建OKP-B-13型β-内酰胺酶的表达载体。方法抽提菌株的质粒,应用PCR扩增OKP-B-13基因全长编码序列,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b(+)表达载体,重组质粒经酶切及DNA测序确证后,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。超声破碎法提取表达蛋白产物,检测其活性,等电聚焦电泳检测蛋白的等电点(pI)。结果PCR扩增获得879 bp的产物,重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的基因已成功接入表达载体,重组菌的粗提物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/OKP-B-13]构建成功。目的等电点为7.1。结论β-内酰胺酶OKP-B-13在原核表达细胞中实验了基因重组表达,为进一步分析酶的特性提供条件。     

铜绿假单胞菌对11种抗生素的耐药性差异

目的探讨不同标本分离铜绿假单胞菌对11种抗生素耐药性的差异,指导临床合理使用抗生素。方法按常规方法培养分离后,经VITEK-AMS60或VITEK-II自动微生物鉴定分析仪的鉴定,用Kirty-Bauer法做药物敏感试验。结果尿液与血液之间,以及尿液与伤口分泌物之间,分离株均对所检测的11种抗生素的耐药性差异有非常显著性（P〈0.01）,尿液与穿刺液分离菌对除亚胺培南和美洛培南外的9种抗生素的耐药性差异有非常显著性（P〈0.01）,血液与穿刺液、血液与伤口分泌物和穿刺液与伤口分泌物间,除穿刺液与伤口分泌物分离菌对美洛培南的耐药性差异有显著性（P〈0.05）外,其他差异均无显著性（P〉0.05）。结论不同标本来源铜绿假单胞菌对哌拉西林等11种抗生素存在耐药性差异。