组蛋白激活拟南芥CDPK催化CaMBP10的体外磷酸化反应

植物转脂蛋白 (plant lipid transfer proteins, LTPs) 是高等植物中广泛存在的多基因编码的小分子碱性蛋白. 本研究室已经证明白菜和豌豆LTPs可分别被内源胞浆可溶性和膜结合钙依赖性蛋白激酶 (calcium-dependent protein kinase, CDPK) 磷酸化. 为深入研究CDPK对白菜钙调素结合蛋白10 (calmodulin-binding protein-10, CaMBP10) 的磷酸化性质及特征, 本文从拟南芥可溶性蛋白粗提物中检测到1个分子量约为54 kD的CDPK对CaMBP10有磷酸化作用. 研究表明, 组蛋白可增强 CDPK对CaMBP10的磷酸化活性, 促进磷酸化进程. 而且组蛋白和Ca2+对CDPK具有协同调节效应, 二者共同作用时比Ca2+单独作用时, 激酶的活力增强约12倍. 此外, 不同组蛋白对CDPK的激活能力不同, 组蛋白1对该激酶活性的激活能力要比组蛋白3高约8倍.     

脂质体、免疫刺激复合物和壳聚糖作为黏膜免疫载体的研究现状

查阅国内外文献,采用整理归纳、引用和分析的方法,概述了鼻黏膜免疫载体材料脂质体、免疫刺激复合物和壳聚糖的生物学特性及其在气溶胶疫苗领域的应用。脂质体、免疫刺激复合物和壳聚糖作为气溶胶疫苗鼻黏膜免疫的载体,能够增强疫苗的免疫原性,提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,因此,可作为疫苗抗原激发特异免疫应答的生物材料。     

表达vgb的糖多孢红霉菌载体构建与活性鉴定

目的为了在糖多孢红霉菌(Sac.erythraea)中表达透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb),发挥其在贫氧环境下与氧结合形成氧合态,而改变限氧时细胞原有的代谢方式,将vgb克隆于糖多孢红霉菌表达载体中。方法利用PCR技术克隆vgb,利用基因重组技术构建含有vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒,电穿孔法将vgb转化置糖多孢红霉菌中,鉴定采用SDS-PAGE电泳。vgb在重组糖多孢红霉菌表达产物的生物活性检测用Western blotting分析表示。结果克隆了含有vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒(pBlueV),分子量6.033 kb,筛选了重组糖多孢红霉菌株,重组菌株表达的血红蛋白能与1∶300的VHb抗体呈显色反应。结论vgb在糖多孢红霉菌中获得了表达,这对继续研究生产红霉素的工程菌改造,解决工业发酵工程菌高密度培养具有良好的应用前景。     

利用PCR法扩增透明颤菌血红蛋白基因条件的优化

以透明颤菌染色体基因组DNA为模板,利用PCR技术获取透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb)。在多聚合酶链式反应中采用碱变性模板与热启动等方法进行透明颤菌血红蛋白基因体外扩增,成功地扩增出约0.5 kb的透明颤菌血红蛋白基因,并对vgb的PCR条件进行了研究。获取理想的目的基因PCR反应的综合参数比十分重要。     

转脂蛋白CaMBP10的胶体金标记及对白菜中CaMBP10结合蛋白的鉴定

植物转脂蛋白 (LTP)是一类广泛存在于高等植物中的空间结构高度保守的碱性小分子蛋白,其确切功能和调节机制至今仍不清楚.本室从白菜中分离的钙调素结合 蛋白10 (CaMBP10),经序列分析被鉴定为植物转脂蛋白家族成员.近期研究结果表明 ,CaMBP10 参与了植物的生物与非生物胁迫反应.为了深入探讨CaMBP10的抗性机制,确定植物中与其相互作用的蛋白质,本文拟建立胶体金标记CaMBP10 的方法,通过凝胶覆盖分析,检测植物样品中的CaMBP10 结合蛋白为此,对标记反应的最适条件进行了优化,确定最佳条件为：交联剂戊二醛用量为0.034%,交联反应pH值为7 .0,交联反应时间为40 min,胶体金颗粒度为10 nm,胶体金溶液的pH为7.0. 本文确定建立了植物样品中CaMBP10结合蛋白的分析与鉴定方法.     

透明颤菌(沈阳株)血红蛋白基因克隆与序列分析

目的：以透明颤菌（Vitreoscilla）基因组DNA为模板,扩增透明颤菌血红蛋白基因（vgb）。方法：采用PCR81与摹甲季缉彗术,将PCR产物插入到克隆载体PET28a中,测序应用DNA测序仪。结果：获得了约0．5kbDNA片段,测序结果与已发表的透明颤菌血红蛋白基因核苷酸序列比较,同源性为97％。结论：所扩增的DNA片段确认是透明颤菌血红蛋白基因。     

HIV-1gag/IFNα-2b的构建与表达鉴定

目的：构建艾滋病病毒核心蛋白(gag)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达质粒,观察其在痘苗病毒中共表达结果,研究其意义。方法：利用基因重组技术,将IFNα-2b基因片段插入到gag基因的nt531位点,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选,挑出重组痘苗病毒。经免疫荧光、Western blot和Dot-ELISA鉴定表送产物。结果：间接免疫荧光实验结果显示,转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光。免疫印迹实验与Dot-EILSA结果均显示重组质粒转染细胞的裂解物中存在表达的gag／IFNα-2b蛋白。结论：成功地构建了重组真核细胞表达质粒,表达的蛋白具有良好的免疫原性与免疫反应性。     

蚊虫叮咬止痒消炎剂的研制及应用

目的研制蚊虫叮咬止痒消炎剂,观察应用该蚊虫叮咬止痒消炎剂对吉林洮南地区背点伊蚊和刺扰伊蚊叮咬后的治愈效果。方法药品制备采用渗漉法和超声波提取法,质量控制依据中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB 15979-2002,效果观察采用局部外用涂抹法。结果该止痒消炎剂12、24和48 h平均痊愈率分别为24.30%、55.14%和17.76%,总有效率为97.20%。结论该蚊虫叮咬止痒消炎剂符合中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB 15979-2002的规定,对吉林洮南地区优势蚊种叮咬后具有明显的治愈效果,适用于部队野外执行任务携带。     

北方寒带地区透明颤菌理化特性的研究

目的为了研究透明颤菌在微生物发酵工业生产中的应用,对东北寒带地区透明颤菌的理化特性进行研究。方法透明颤菌的分离采用培养基(PYA)富集培养与形态观察的方法,采用分光光度计、光扫描与CO差示光谱确定透明颤菌的生理生化性质。结果研究分离的透明颤菌在蛋白胨0.4%,酵母0.6%,NaAc 0.02%,pH7.8,34℃,150 r/min时可获得较大生长速率,NaAc浓度为1%,pH7.5-8.0时菌体生长最快。透明颤菌在稳定期血红素含量约为每克湿菌中11 nmol,样品在5000 r/min离心后出现血红蛋白的吸收峰。结论分离培养出寒带地区生长的透明颤菌,并确定了其理化性质,为在发酵工业生产中应用透明颤菌奠定了参考依据。     

Vgb在大肠埃希菌中表达及生物活性的研究

目的将vgb克隆到大肠埃希菌表达载体pQE-30中,研究vgb表达产物对细胞摄氧能力的影响。方法利用PCR和基因重组技术克隆vgb与大肠埃希菌表达质粒pQE V,大肠埃希菌转化采用CaCl2法,VHb活性分析采用CO示差光谱法。结果克隆了vgb和重组质粒pQE V,vgb基因在大肠埃希菌中获得表达,在A420 nm处达到典型吸收峰。结论 vgb在大肠埃希菌中表达产物加强了对氧的摄取能力,对解决细胞高密度发酵培养中氧需矛盾、促进代谢产物的产率具有非常重要的应用价值。