多重PCR方法快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌

肠毒素性大肠埃希菌(ETEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)和侵袭性大肠埃希菌(EIEC)是引起腹泻的主要大肠埃希菌,威胁着食品安全和人类健康,建立同时检测4种致腹泻性大肠埃希菌的方法具有重要意义。基于ETEC LT肠毒素基因、EPEC bfpA基因、EHECO抗原基因和EIEC侵袭性质粒特异性基因,设计了4对特异性引物,通过对单一PCR反应条件的优化建立了快速检测4种主要致腹泻性大肠埃希菌的多重PCR方法,彼此之间无交叉反应。该多重PCR方法具有良好的特异性和灵敏性,对24株致病菌进行检测,所试4株致腹泻性大肠埃希菌均为PCR阳性,其他菌株则为阴性。实践证明,利用所建立的多重PCR方法对124份肉类、奶类制品及人工污染样品等进行检测,检出15份阳性,与国标(GB4789.6-1994)检测结果相同。结果表明本文建立的多重PCR方法可用于ETEC、EPEC、EHEC和EIEC的单一或混合感染的鉴别诊断及食品安全风险评估,具有良好的实用性。     

致病性大肠埃希菌血清型分布及对抗生素的敏感性分析

目的了解临床病例中致病性大肠埃希菌的主要血清型和对抗生素的敏感性。方法致病性大肠埃希菌的鉴定使用血清学的方法,药敏试验采用纸片扩散法,WHONET 5.0软件分析药敏结果。结果致病性大肠埃希菌的检出率为5.93%,共分离到7种血清型。在分离到的菌株中,ESBLs的检出率达45%。结论致病性大肠埃希菌是引起小儿腹泻的一种重要致病菌,应开展对致病性大肠埃希菌的检测,根据药敏结果选用合适药物。     

致病性大肠埃希菌基因细胞水平致病机制的新进展

致病性大肠埃希菌是引起婴幼儿腹泻的重要病原菌。它的感染是由对宿主细胞的粘附,激活宿主细胞内信号通路,引起细胞病变等多阶段过程构成。近年来对致病性大肠埃希菌致病性的研究在基因水平和细胞水平上取得了显著的进展。本文就致病性大肠埃希菌的致病性基因／产物及感染过程中宿主细胞内的信号传导作一综述。     

益气健脾中药颗粒剂对早期断奶仔猪肠道菌群的影响

目的研究中药复方颗粒剂对断奶仔猪肠道微生态的影响。方法实验选用人工感染大肠埃希菌引起腹泻的28日龄断奶仔猪54头,随机平均分为3组,每组3个重复,Ⅰ组抗生素治疗组、Ⅱ组中药复方颗粒剂治疗组、Ⅲ组不用任何药物治疗的空白对照组。分别于用药后第14天时,每组随机抽取1头屠宰,无菌采集空肠,回肠和盲肠内容物,利用平板计数法测定各肠段大肠埃希菌、双歧杆菌和乳酸杆菌数量。结果 Ⅰ组双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠埃希菌的数量均显著小于Ⅲ组（P〈0.05）;Ⅱ组双歧杆菌和乳酸杆菌的数量显著大于Ⅲ组（P〈0.05）,大肠埃希菌数量显著小于Ⅲ组（P〈0.05）; n组双歧杆菌和乳酸杆菌的数量极显著大于Ⅰ组（P〈0.01）,Ⅱ组与Ⅰ组大肠埃希菌数量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论该中药复方颗粒剂具有显著增加断奶仔猪肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量,降低大肠埃希菌数量,减少腹泻频率的作用。     

致病性大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因的双重PCR检测方法的建立

目的实现对致病性大肠埃希菌（E．coli）、沙门菌（Salmonella）的同时检测,建立快速灵敏的双重PCR检测方法。方法以致病性大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因为研究对象,根据GenBank发表的大肠埃希菌和沙门菌毒力岛基因序列,分别设计合成了大肠埃希菌毒力岛irpl、irl）2和fyuA,沙门菌毒力岛mgtC、sseL和sopB等6对引物,以禽致病性大肠埃希菌（CVCC1565）菌株和沙门菌（ATCC9150）菌株的核酸混合物为模板,经引物特异性试验,引物组合,成功建立了快速鉴别检测致病性大肠埃希菌和沙门菌的双重PCR方法。结果特异性试验结果显示,引物irpl、irp2和fyuA仅能扩增出大肠埃希菌（CVCC1565）的特异性片段,大小分别是799、414和948bp;引物mgtC、sseL和sopB仅能扩增出沙门菌（ATCC9150）的特异性片段,大小分别是500、269和1000bp。敏感性试验结果表明大肠埃希菌和沙门菌的最低检测限分别为2．2×101CFU／mL和2．0×101CFU／mL。结论本研究建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于致病性大肠埃希菌和沙门菌的联合检测与鉴别诊断。     

2007年上海市儿童社区获得性腹泻致病菌谱分析

为了解上海地区社区获得性腹泻儿童致病菌流行病学情况,对2007年度就诊于我院的2871例社区获得性腹泻患儿进行粪便弯曲菌、志贺菌、沙门菌,霍乱弧菌、副溶血性弧菌、致腹泻大肠埃希菌、气单胞菌、耶尔森菌进行培养分离、鉴定及部分菌株的血清分型。结果发现,弯曲菌在腹泻患儿粪便中的分离率为11.1%(172/1556),4月份感染率最高(P<0.001),多见于1～4岁儿童(P<0.05);其次是志贺菌,分离率为3.2%(91/2871),其中福氏志贺菌占63.7%;第3位是致腹泻大肠埃希菌,分离率为1.0%(30/2871),其中肠致病性大肠埃希菌占70.0%,以O55/K59血清型为主。沙门菌、气单胞菌分离率不超过0.5%,未检测到霍乱弧菌、副溶血性弧菌和耶尔森菌。本次调查显示,弯曲菌、志贺菌、致腹泻大肠埃希菌是目前上海地区儿童社区获得性腹泻的3种主要致病菌。弯曲菌感染率明显高于志贺菌及致腹泻大肠埃希菌,提示临床微生物室应将弯曲菌、致腹泻大肠埃希菌作为儿童社区获得性腹泻常规监测的病原微生物。     

肠致病性大肠埃希菌eae基因及编码蛋白紧密素

肠致病性大肠埃希菌是引起婴儿腹泻的一类重要病原菌,主要病理学变化是引起肠黏膜A／E损伤。eae基因编码的紧密素是引起A／E损伤的主要毒力因子,本文主要是对eae基因和紧密素的分子结构,作用及其表达调控进行综述。     

大肠埃希菌O157：H7毒力的分子生物学研究进展

肠出血性大肠埃希菌是一种致病性大肠埃希菌,与人类的出血性肠类和溶血性尿毒症有关,本文介绍了肠出血性大肠埃希菌O157：H7毒力基因研究的新进展,包括研究较多的噬菌体携带的slt基因,引起上皮细胞粘附/消除损害的eae基因,特异质粒上的hly基因和一些新的毒力基因,即tir,toxB,iha和hokw基因。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对三种氨基糖苷类抗生素的耐药性分析

【摘 要】 目的 评价庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星三种氨基糖苷类抗生素（AGs）对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性。方法 对902株大肠埃希菌和404株肺炎克雷伯菌,采用VITEK-2全自动微生物分析仪配套的AST-GN13药敏卡进行庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的体外药敏试验。结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株检出率分别为40.8％和36.6％;产ESBLs的大肠埃希菌对庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的敏感率分别为42.4%、39.1%和96.5%,与非产ESBLs菌株比较,敏感率差异均有统计学意义（P<0.01）;产ESBLs的肺炎克雷伯菌对庆大霉素、妥布霉素及阿米卡星的敏感率分别为64.2%、62.8%和91.9%,与非产ESBLs菌株比较,敏感率差异均有统计学意义（P<0.01）;阿米卡星对产与非产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均高度敏感,敏感率均在91%以上。结论 本地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs菌株流行严重,ESBLs的产生可使大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对AGs的耐药情况加重,提示ESBLs和AGs引起的耐药可能存在一定的相关性。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs检测及耐药性分析

由细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）引起的细菌耐药性一直是临床相关感染性疾病治疗中的棘手问题。从不同病区患者标本中分离了96株大肠埃希菌和80株肺炎克雷伯菌,分剐采用双纸片协同试验和药物敏感试验检测了上述菌株产生ESBLs情况及对17种抗生素的耐药性。结果发现,27．1％（26／96）的大肠埃希菌株和22．5％（18／80）肺炎克雷伯菌株产ESBLs。ICU病房分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌株ESBLs总阳性率（46．0％）与介入科病房和烧伤科病房分离菌株ESBLs总阳性率（28．6％和25．0％）无显著性差异（P〉0．05）,但明显高于呼吸科、骨科、其他病房及门诊部分离菌株ESBLs总阳性率（6．3％～14．3％,P〈0．01）。不产ESBLs大肠埃希菌株和肺炎克雷伯菌株对17种抗生素耐药率明显低于产ESBLs菌株。产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对氨曲南均敏感,对氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星耐药率仅为15．8％-23．4％。上述实验结果提示,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床菌株中有较高的ESBLs阳性率,不同病区患者感染的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率有很大差异,氨曲南、氨苄西林／舒巴坦、阿莫西林／棒酸、阿米卡星可作为治疗产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌感染性疾病的首选药物。     

合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布与耐药性分析

目的了解安徽省合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布和耐药状况,以期筛选出菌苗株和指导临床合理用药。方法对46份疑似大肠埃希菌病病料进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。采用玻片凝集试验对分离到的46株致病性大肠埃希菌进行血清型鉴定。同时分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测致病性大肠埃希菌的耐药性和ESBLs阳性菌株。结果46株致病性大肠埃希菌中,除7株细菌未能定型外,其余39株细菌分布于10个血清型,O127：K63血清型为优势血清型,占定型菌株的33．33％。46株致病性大肠埃希菌对21种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,15个ESBLs阳性菌株表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率均高于ESBLs阴性菌株。结论O127：K63血清型为优势血清型,可作为菌苗株。合肥地区动物源性大肠埃希菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠埃希菌多重耐药更为突出。     

大肠埃希菌耐药性及其基因同源性分析

目的 研究临床分离的大肠埃希菌对常用抗生索的耐药性及其基因分型,了解其耐药性趋势与传播流行情况,为临床合理治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考依据。方法 采用常规鉴定技术鉴定细菌;采用K—B纸片扩散法测定77株大肠埃希菌对19种药物的耐药性;K—B法鉴定产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）;通过脉冲场凝胶电泳（PFGE）法对其进行基因分型以确定菌株之间的亲缘关系;FINGERPRINT Ⅱ软件进行细菌基因指纹图谱分析。结果 大肠埃希菌对青霉素类、喹诺酮类药物和氨曲南的耐药性明显增高,亚胺培南和美罗培南是大肠埃希菌感染患者的首选药物;经ESBLs确证试验,ESBLs阳性率为28．60％（22／77）;产ESBLs大肠埃希菌经PFGE指纹图谱分析,除第62株和第70株相似性系数为78．27％外,其余相似度均低于70．0％;ESBLs大肠埃希菌阴性株中除少数几对菌株相似性系数较高外,其余呈散在分布,且电泳带存有6条以上的不同条带,为流行病学无关的不同克隆。结论 大肠埃希菌对常用抗生索耐药性明显增高,且呈多重耐药趋势;该研究尚不能证明存在大肠埃希菌爆发性流行感染,提示可能存在院内感染大肠埃希菌的优势克隆;PFGE基因分型方法是耐药性与流行状况分析的有效手段。     

人母乳中分泌型免疫球蛋白A的抗体特异性分析

目的探讨人母乳中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）的抗体特异性,了解母体所哺育的新生儿及婴儿对病原微生物的抵抗力,为预防新生儿及婴儿感染性疾病提供实验依据。方法制备轮状病毒、肠致病性大肠埃希菌。采用间接ELISA法检测81份配对初乳和成熟乳中针对轮状病毒、柯萨奇病毒、埃可病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌和沙门菌“O”9种病原微生物的特异性sIgA。Wester—blot鉴定9份初乳中抗肠致病性大肠埃希菌的特异性sIgA。结果81份初乳中均检出抗上述9种病原微生物的特异性sIgA,其阳性率按秩序分别为34．5％、6．2％、3．7％、18．5％、23．5％、8．6％、9。8％、11．1％和14．8％。81份成熟乳中仅检出抗轮状病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、空肠弯曲菌、肠致病性大肠埃希菌和沙门菌O的sIgA,其阳性率分别为19．8％、7．4％、6．2％、2．5％、2．5％和3．7％。未检出抗柯萨奇病毒、埃可病毒和幽门螺杆菌的特异性sIgA。初乳中抗轮状病毒sIgA阳性率高于成熟乳（P〈0．05）,抗腺病毒和呼吸道合胞病毒sIgA的阳性率高于成熟乳（P〈0．05,P〈0．01）。Wester—blot鉴定9份初乳中含有3种对肠致病性大肠埃希菌的特异性sIgA。结论在母乳中含有抗多种病毒和细菌的特异性sIgA,其阳性率低于30％。初乳中特异性sIgA水平高于成熟乳。如何提高乳汁中的特异性sIgA水平,增强新生儿及婴儿的抗感染力,是儿童保健值得探讨的问题。     

禽源致病性大肠埃希菌的耐药性与中草药有效成分的抑菌活性测定

以28株合肥地区禽源致病性大肠埃希菌为实验材料,采用K-B纸片琼脂扩散法检测禽源致病性大肠埃希菌的耐药情况。同时采用平板打孔法测定盐酸小檗碱、绿原酸、靛玉红和丹参酮ⅡA 4种中草药有效成分的抑菌活性。结果表明,28株禽源致病性大肠埃希菌对17种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类和喹诺酮类抗菌药物的耐药率分别介于0%～92.86%、14.29%～50.00%、78.57%～100%和57.14%～71.43%。中草药有效成分盐酸小檗碱和丹参酮ⅡA对大肠埃希菌具有较好的抑制活性,抑菌率分别为92.86%（26/28）和89.29%（25/28）。     

零售食品中耐药性和肠外致病性大肠埃希菌的检测

美国有数百万泌尿道感染（UTI）是由大肠埃希菌（简称大肠杆菌）所致的肠外感染。由于肠外致病性大肠杆菌株（ExPEC）的耐药，其治疗变得更加困难，这种特殊的大肠杆菌还可产生导致肠外感染的特殊毒力因子（VF）。     

大肠埃希菌高产AmpC酶的检测及耐药性分析

目的了解深圳市人民医院高产AmpC酶大肠埃希菌的存在现状及其耐药性。方法采用Tris-ED-TA纸片裂菌法检测148株大肠埃希菌的AmpC酶。用琼脂稀释法测定产酶株对11种抗生素的最低抑菌浓度（MIC）。结果 148株大肠埃希菌中6株检出AmpC酶,检出率为4.1%。所有产AmpC酶大肠埃希菌对亚胺培南敏感,MIC为0.12～0.25μg/ml;对头孢吡肟的MIC值也较低,为0.5～32.0μg/ml,仅1株耐头孢吡肟。所有产AmpC酶大肠埃希菌对头孢西丁耐药,MIC为32～128μg/ml;对氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸和哌拉西林/他唑巴坦等加酶抑制剂复合物耐药性较强。结论深圳市人民医院大肠埃希菌高产AmpC酶检出率为4.1%。产酶株对多种抗生素耐药性较高。     

血流感染患者大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶及耐药性分析

目的分析血流感染患者大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（Extended—Spectrum Beta Lactamases,ESBLs）的现状及其耐药特征,为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法对浙江省上虞市人民医院2011年1月至2012年12月住院患者血培养分离的96株大肠埃希菌,采用纸片扩散表型确证试验进行ESBLs检测,用K．B法做药敏试验。结果血培养的大肠埃希菌分离率2011年、2012年分别为19．48％、17．47％。大肠埃希菌产ESBLs的检出率2011年、2012年分别为60．00％、60．78％。产ESBLs菌株对多种抗菌药物的耐药率显著高于不产ESBLs菌株。无论大肠埃希菌是否产ESBLs,碳青霉烯类抗生素均具有很高的敏感率。结论血流感染患者分离的大肠埃希菌产ESBLs比率高,产ESBLs菌株对多种抗菌药物耐药性高。可经验性使用碳青霉烯类抗生素治疗大肠埃希菌所致的血流感染。     

金双歧去除肠道产ESBLs大肠埃希菌定植效果的临床观察

目的 探索和研究金双歧对肠道产ESBLs大肠埃希菌的除菌作用,为临床利用金双歧辅助治疗多重耐药菌引起的感染性疾病提供依据.方法 在重症医学科患者采集肛拭子标本进行产ESBLs大肠埃希菌定菌筛查,选取40例产ESBLs大肠埃希菌患者随机分成试验组和对照组,试验组口服金双歧进行肠道内去定植.结果 试验组21例产ESBLs大肠埃希菌患者口服金双歧3～7d后,再次取肛拭子进行筛查,17例未再检出产ESBLs大肠埃希菌,4例再次检出,金双歧去除肠道产ESBLs大肠埃希菌定植有效率为87.5％;对照组19例,3～7d后,再次取肛拭子进行筛查,14例再次检出产ESBLs大肠埃希菌,5例未检出,肠道自行清除产ESBLs大肠埃希菌清除率为26.3％.结论 金双歧具有去除肠道产ESBLs大肠埃希菌定植的效果.     

2921株大肠埃希菌的临床分布与耐药分析

目的了解近五年来本院分离的大肠埃希菌(ECO)的临床分布和耐药性变化,为临床合理治疗大肠埃希菌引起的感染提供参考。方法采用VITEK-32全自动微生物分析系统,对2009-2013年分离的大肠埃希菌进行菌株鉴定和药物敏感试验,用WHONET 5.4软件进行耐药统计分析。结果 2009-2013年本院共分离出2 921株ECO,2009-2012年大肠埃希菌主要分离自尿液,平均占29.4%,2013年大肠埃希菌主要分离自血液,占27.6%;2011-2013年产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌平均检出率为70.1%,高于2009-2010年的平均检出率64.1%(P0.05);主要来源于普外科和ICU,分别占22.1%、18.4%;非产ESBLs大肠埃希菌对头孢替坦、哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南的耐药率高于产ESBLs大肠埃希菌(P0.05),对本研究其他药物的耐药率,非产ESBLs大肠埃希菌低于产ESBLs大肠埃希菌(P0.05);产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑啉、头孢曲松、氨苄西林/舒巴坦的耐药率均90%,非产ESBLs大肠埃希菌对氨苄西林的耐药率70%。结论大肠埃希菌是临床常见致病菌,本市产ESBLs大肠埃希菌的分离率非常高,耐药问题十分严重,应加强合理使用抗菌药物管理,定期监测,控制耐药菌的产生,预防医院感染暴发流行。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析

目的了解杭州市第一人民医院产ESBLs大肠埃希菌的发生比例及对临床上常用的24种抗菌药物的耐药率变化.方法收集2003 2004年该院各类临床标本中分离的大肠埃希菌,采用NCCLS推荐的表型确证试验方法检测ESBLs菌株;药敏试验采用纸片扩散法.结果2003年与2004年,产ESBLs的大肠埃希菌分离率分别为46.11%（184/399）、57.44%（386/672）（P=0.0003）;2年来,ESBLs阳性菌对临床常用的24种药物表现出较高的耐药性,耐药率上升非常显著（P=0.0005）;非产ESBLs大肠埃希菌对大多数抗菌药物仍保持较高的敏感率;但2004年ESBLs阴性的大肠埃希菌的耐药性,比2003年显著上升（χ^2=37.785,P=0.0005）.结论尽早开展产ESBLs菌的监测,合理使用抗菌药物,对于有效控制产ESBLs菌的播散与流行是一项重要措施.