黄曲霉毒素B_1的免疫检测 Ⅱ.抗体的产生及应用

将黄曲霉毒素Ｂ１肟（ＡＦＢ１Ｏ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及特异性。注射抗原后的第６０天开始有较明显抗体产生,第１２０天达到高峰,维持１５天左右后开始下降;抗体的ＥＬＩＳＡ效价高达１：３００００;和黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）的结构类似物的竞争ＥＬＩＳＡ表明,抗体有很好的特异性。运用该抗体,以ＥＬＩＳＡ分析检测了几种农产品及饲料中污染ＡＦＢ１的含量,并和薄层层析法的分析结构进行了比较,结果表明当ＡＦＢ１的含量大于等于５ｎｇ／ｍｌ时,两者间有很好的相关性。     

志贺氏毒素B亚单位的分离纯化及其多克隆抗体的制备

从高效表达志贺氏毒素Ｂ亚单位（ＳｔｘＢ）的工程菌株ＤＨ５α／ｐＳＵ１０８分离纯化了ＳｔｘＢ,并用它制备了多克隆抗体。ＥＬＩＳＡ试验表明抗ＳｔｘＢ抗血清的滴度达１×１０４。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示该抗血清能与ＳｔｘＢ发生特异反应。这为研究志贺氏毒素Ｂ亚单位的免疫保护作用和痢疾志贺氏Ⅰ型菌苗的研制打下了基础     

伤寒杆菌SOD抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响

为了制备伤寒要直菌ＳＯＤ抗体,研究该抗体对小鼠腹腔吞噬细胞杀灭伤寒杆菌的影响,探讨ＳＯＤ与伤寒杆菌抗吞噬作用的关系。采用纯化的伤寒杆菌（Ｓｔｗｌ）Ｆｅ－ＳＯＤ免疫农兔制备兔抗Ｆｅ－ＳＯＤ抗体。利用ＥＡＬＩＳＡ法检测抗体的效价。免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗体的特性。用不同浓度的抗体预先处理伤寒杆菌,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验。试验结果抗体的ＥＬＩＳ攻疚价为１：１     

饲喂黄曲霉毒素B_1大鼠肝中AFB_1-DNA加合物的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ＳＰ法对４例饲喂黄曲霉毒素Ｂ１的Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝组织中ＡＦＢ１－ＤＮＡ加合物的染色及常规ＨＥ染色发现,４例肝细胞核均出现异型性,但未见肝细胞坏死、增生灶及肝细胞癌;免疫组化揭示部分肝细胞核出现棕黄色、不均质状的ＡＦＢ１－ＤＮＡ加合物,阳性细胞数占１０～８５％。结果提示免疫组织化学方法可作为一种ＡＦＢ１的定位方法,ＡＦＢ１在动物致癌过程中ＡＦＢ１－ＤＮＡ加合物可能具有启动作用     

海蛇乙醇浸出物对实验性大鼠关节炎的防治作用

探讨大鼠灌胃给予海蛇乙醇浸出物（ＡＥＢＦＳＳ）对大鼠胶原性关节炎（ＣＩＡ）的预防和治疗作用。方法用自制的可溶性猪尾Ⅱ型胶原注入实验大鼠左后足造成胶原诱导性大鼠关节炎模型。结果大鼠在致炎前口服ＡＥＢＦＳＳ,当剂量达含４．０ｍｇ浸出蛋白／ｋｇ,可明显推迟ＣＩＡ发病时间,降低ＣＩＡ发病率和减轻关节炎症状;大鼠发生关节炎后口服ＡＥＢＦＳＳ,可明显抑制ＣＩＡ大鼠关节炎症的程度,其作用在用药后７天表现明显;关节组织病理检查表明,口服ＡＥＢＦＳＳ显著减轻了患鼠关节的炎症程度。初步分析表明,口服ＡＥＢＦＳＳ既降低了ＣＩＡ患鼠血清抗ＣⅡ抗体水平,又对患鼠耳迟发型超敏反应（ＤＴＨ）产生了明显的抑制作用。结论口服ＡＥＢＦＳＳ对大鼠胶原性关节炎有显著的防治作用,其机制同时涉及Ｔ和Ｂ淋巴细胞免疫。     

应用肌肉介导基因转移制备5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体

５,１０亚甲基四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）是叶酸代谢的关键酶．为了试验肌肉介导外源基因人ＭＴＨＦＲ（ｈＭＴＨＦＲ）制备抗体和建立ＭＴＨＦＲ免疫检测的可能性,构建了ＭＴＨＦＲ基因真核表达载体（ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ）;通过基因缝线法将携带ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ的质粒,缝合于预先注射再生剂（丁哌卡因）的肌肉内．２个月后分离血清,所得抗体应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,ＥＬＩＳＡ和胎肝免疫组织化学染色进行免疫鉴定．胎肝免疫组织化学显示,在肝小梁细胞浆中具有大量ＭＴＨＦＲ阳性反应颗粒;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ有ＭＴＨＦＲ抗体与其抗原特异的褐色条带,分子量约为３７ｋＤ;ＥＬＩＳＡ分析表明,３种不同浓度的抗体与不同剂量的抗原反应具有剂效关系,最适抗体滴度（ＥＤ５０）为１∶４００。以上结果说明肌肉介导外源基因是获得抗体的一种简单、快捷的方法．该抗体可用于ＭＴＨＦＲ的免疫检测和有关的叶酸代谢研究工作．     

丙型肝炎病毒E2基因DNA免疫实验动物研究

将编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２蛋白４１７～７５０位氨基酸的ＤＮＡ片段　克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ　３．１（－）中的ＣＭＶ　ＩＥ启动子下游,构建成ＨＣＶ　Ｅ２重组真核表达质粒　ｐｃＥ２。ＥＬＩＳＡ法检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫兔血清中的Ｅ２抗体变化和维持规律,结果显示免疫２０ｄ已有　抗体产生,３０ｄ后开始进入高峰,４０ｄ时达到最高值,至第９０ｄ抗体水平保持平稳,抗体滴度　达到１∶１６００左右。流式细胞计数仪（ＦＡＣＳ）检测ｐｃＥ２　ＤＮＡ免疫鼠ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞变　化情况,与注射空载体ｐＣＤＮＡ３．１（－）的阴性鼠相比,ＣＤ４＋淋巴细胞水平略有上升,ＣＤ８＋　细胞水平有较大升高,增幅达３５．４６％。免疫组化检测结果显示注射ｐｃＥ２的小鼠组织中有明显　的阳性着色,而注射ｐｃＤＮＡ３．１（－）的对照组小鼠免疫组化结果为阴性。以上结果表明：ｐｃＥ２　在实验动物内表达出的ＨＣＶ　Ｅ２蛋白可以引起免疫动物的体液免疫应答和细胞免疫应答,尤其　是ＭＨＣ－１限制性杀伤性ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞水平的提高对清除　病毒是十分有利的,因此ＨＣＶ　Ｅ２　ＤＮＡ免疫有可能成为预防和治疗ＨＣＶ感染的一条新途径。     

专一识别脱落酸甲酯的单克隆抗体的制备与应用

专一识别２－顺（Ｓ）ＡＢＡ甲酯的单克隆抗体来源于以ＡＢＡ分子中的１－ＣＯＯＨ为偶联位点合成的免疫原。它与游离态ＡＢＡ和结合态ＡＢＡ葡萄糖酯的交叉反应仅分别为１％与３．５％,而与ＡＢＡ类似物,如２－顺－黄质醛、紫黄质以及ＡＢＡ的２－反式异构体和（Ｒ）－对映体则无交叉反应。利用该抗体建立的高度灵敏和精确的ＡＢＡｍｅ酶联免疫测定法,其检测线性范围为０．０４８～１．５２ｐｍｏｌ。通过ＡＢＡｍｅＥＬＩＳＡ和ＧＡ１＋３ＥＬＩＳＡ分析可知羊蹄叶片衰老与内源ＧＡ１＋３／ＡＢＡ比值的下降有关。     

流行性出血热免疫球蛋白的研制

本文首次报告采用纯化灭活流行性出血热（ＥＨＦ）Ⅰ型疫苗免疫健康献血员,采集ＥＨＦ抗体高滴度的血浆,用低温乙醇法及盐析法分离纯化三批ＥＨＦ免疫球蛋白。结果表明：（１）采用０,１,３,４（月）或０,１,４,５（月）免疫程序,疫苗剂量１～２ｍｌ（０．１５～０．３０ｍｇ蛋白）,受免献血员血清平均抗体滴度可达１∶４０６（ＥＬＩＳＡ）或１∶１１２（ＲＰＨＩ）。（２）通过生化检定,三批制品的电泳纯度为９７．０５％,９６．８４％,９９．２６％;ＩｇＧ单体和二聚体含量为８９．５５％,９１．３０％和９８．２１％。（３）用空斑抑制中和试验及免疫印染试验证明所纯化的免疫球蛋白具有抗ＥＨＦ病毒特异性。（４）三批ＥＨＦ免疫球蛋白的效价测定,结果为ＥＬＩＳＡ滴度≥１∶５１２,ＲＰＨＩ滴度≥１∶１０２４,ＰＲＮＴ（中和抗体）滴度１∶４０。按１６％蛋白计,ＥＨＦ免疫球蛋白的效价可达原料血浆的１０倍以上。（５）无菌、安全、毒性及热原质试验检定结果,全部通过《中国生物制品规程》要求。     

猴B病毒相关抗体及B病毒抗体检测的比较研究

本文比较了用ＨＳＶ－１（ＩＥＡ）和Ｂ病毒（ＩＦＡ）的方法检查猴Ｂ病毒相关抗体和Ｂ病毒抗体的结果：ＩＥＡ检查出的Ｂ病毒相关抗体阴性猴,经ＩＦＡ检查,全部为Ｂ病毒抗体阴性。用ＩＦＡ检查了Ｂ病毒相关抗体阴性的恒河猴,在单笼隔离饲养六个月后,有９８．３％的动物Ｂ病毒相关抗体仍为阴性,表明ＩＲＡ的阴性结果有较好的一致性。本文讨论了建立无Ｂ病毒感染猴群的可行性。     

黄腐酸对冬小麦幼苗IAA、ABA水平的影响及作用机理的探讨

本实验用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ） 法测定了黄腐酸（ＦＡ） 处理后冬小麦幼苗吲哚乙酸（ＩＡＡ） 、脱落酸（ＡＢＡ） 的水平。结果表明，ＦＡ 能使ＩＡＡ、ＡＢＡ 水平增加，这与ＦＡ 能刺激植物生长、抑制气孔开启是一致的，而且ＦＡ 与这两种激素都没有协同作用。说明ＦＡ 既能直接对植物起作用，也能通过改变内源激素水平间接起作用     

植物花粉管质膜类整合素蛋白的免疫印迹检测

植物花粉管质膜类整合素蛋白的免疫印迹检测孙颖徐小冬孙大业（河北师范大学生物系石家庄０５００１６）关键词整合素,花粉管,质膜,免疫印迹ＩＭＭＵＮＯＢＬＯＴＳＯＦＩＮＴＥＧＲＩＮＬＩＫＥＰＲＯＴＥＩＮＳＩＮＰＯＬＬＥＮＴＵＢＥＭＥＭＢＲＡＮＥＯＦＨＥＭ...     

细菌及其毒素诱发小鼠胸腺细胞凋亡的机制初探

给ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔注射产肠毒素Ｂ金黄色葡萄球菌（ＳＥＢＳ）、绿脓杆菌（ＰＡ）或葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）,均可引起小鼠胸腺萎缩,呈现胸腺重量减轻、胸腺细胞数减少、胸腺细胞存活率降低。实验发现,在这些细菌或毒素作用下,胸腺细胞发生了具有细胞凋亡的特征性形态学和生化学变化。进一步研究表明,小鼠胸腺细胞凋亡的机制可能与这些细菌或毒素诱导宿主产生ＴＮＦ－α、ＩＦＮｒ和ＩＬ－６等细胞因子有关。     

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

用重组人促红细胞生成素（ｒｈＥＰＯ）免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,取其脾细胞在ＰＥＣ４０００作用下与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一株能分泌抗ｒｈＥＰＯ单抗隆抗体的杂交瘤细胞株２Ｆ１２,染色体数目大于１００条,间接ＥＬＩＳＡ法测定腹水和细胞培养上清效价,分别为１．６×１０＾－７和４×１０＾－４。测定抗体亚类时,则同时显示ＩｇＡ和ＩｇＧ１,其轻链为κ链;相对亲和力为５×１０％＾－１２ｍｏｌ／Ｌ。单抗２Ｆ     

黄曲霉毒素B1的免疫检测Ⅱ．抗体的产生及应用

将黄曲霉毒素B₁肟(AFB₁O)与牛血清白蛋白(BSA)的连接物,通过多点、多次免疫法注射免疫兔子。分析了抗体的产生进程、效价以及特异性。注射抗原后的第60天开始有较明显抗体产生,第120天达到高峰,维持15天左右后开始下降;抗体的ELISA效价高达1：30000;和黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的结构类似物的竞争ELISA表明,抗体有很好的特异性。运用该抗体,以ELISA分析检测了几种农产品及饲料中污染AFB₁,的含量,并和薄层层析法的分析结构进行了比较,结果表明当AFB₁．的含量大于等于5ng／ml时。两者间有很好的相关性。     

黄曲霉素毒B1的免疫检测Ⅰ.抗原的制备

黄曲霉素Ｂ１抗原的制备是ＡＦＢ１免疫检测的第一步。研究了回流温度和时间对黄曲霉毒素Ｂ１肟产生的影响,通过统计分析得到８５℃,回流２ｈＡＦＢ１Ｏ的产率最高,为８９％,。在此基础上进一步研究了ＡＦＢ１Ｏ与载体蛋白－牛血清蛋白（ＢＳＡ）反应的起始摩尔比对产物摩尔比的影响,随着反应起始摩尔比的增加,产物的摩尔比也稍有增加,但是增中幅度不显著,而ＡＦＢ１Ｏ的利用率则随着起始摩尔比的增加而减少,选择２０：１为     

用核酸免疫技术制备抗丙肝病毒C区单克隆抗体

用丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１区真核表达质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１按４００ｕｇ／只剂量免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠,１４周后同一剂量再加强免疫一次。加强免疫后２周,在５０％ＰＥＧ１４５０介导下将脾细胞与ＳＰ２／０小鼠骨髓瘤细胞（５１）融合。实验结果融合率达５４．３％（３１３／５７６）。阳性率为５．４％（１７”３１３）。克隆化后得到６株稳定分泌抗丙肝病毒Ｃ区单克隆抗体杂交瘤细胞株。这６株杂交瘤均产生ＩｇＭ抗体,接种ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠后产生腹水的效价为１６４－１３２０（ＥＬＩＳＡ）。     

高效价甘薯羽状斑驳病毒抗血清的制备

用嫁接方法将甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）接种到Ｉ．ｓｅｔｏｓａ上扩繁,以０．２ｍｏｌ／ＬｐＨ７．２ＰＢＫ缓冲液、垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提取纯化ＳＰＦＭＶ。纯化的ＳＰＦＭＶＯＤ２６０／２８０的比值为１．２５。将纯化的ＳＰＦＭＶ免疫家兔制备抗血清,在环状沉淀和微量沉淀试验中,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１：４０９６;以ＳＰＦＭＶ－ＩｇＧ为第一抗体,应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对甘薯和Ｉ．ｓｅｌｏｓａ叶片中的ＳＰＦＭＶ分别作了测定。     

噬菌体抗体文库的构建及人源抗HIV-1 gp 160抗体的筛选

构建人源噬菌体抗体文库如下：ＨＩＶ感染者脾细胞中提取ｍＲＮＡ,经反转录再以人ＩｇＧ重链Ｆｄ两端及轻链“通用”引物分别扩增Ｆａｂ基因片段,依次插入到噬菌粒载体ｐＣｏｍｂ３中,电转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,经辅助噬菌体救助,重组噬菌体得以溶源裂解,Ｆａｂ表达于噬菌体包膜蛋白Ⅲ的Ｎ端．此噬菌体抗体库的容量为５×１０５．筛选抗ＨＩＶ－１同时又具有能被抗独特型抗体“ＩＦ７”所识别的独特型的阳性抗体：以重组包膜糖蛋白ｇｐ１６０及ｇｐ４１多肽对噬菌体抗体文库进行三次淘选,使抗ｇｐ１６０的特异性抗体得到１００倍的富集．然后通过直接ＥＬＩＳＡ和竞争性ＥＬＩＳＡ实验筛选出两株结合性较好的特异性抗ｇｐ１６０抗体－３Ｂ株与１Ｄ株．直接ＥＬＩＳＡ实验表明这两株克隆均能被“１Ｆ７”所识别,为抗独特型多肽的筛选奠定了基础．     

HFRS患者特异性IgA,IgE抗体及其免疫复合物测定

为进一步研究ＨＦＲＳ免疫损伤机制,用ＥＬＩＳＡ法同步测定了１０８例不同临床型、不同病日、病期ＨＦＲＳ患者血清中特异性ＩｇＡ、ＩｇＥ抗体以及ＨＦＲＳ病毒特异性ＩｇＡ、ＩｇＥ型ＣＩＣ的水平及检出率。发现ＨＦＲＳＩｇＡ型抗体在轻型病例高于中、重型病例;ＨＦＲＳＩｇＥ型抗体及ＩｇＥ型ＣＩＣ在重型病例高于中、轻型病例。上述差异在病程早期（发热、休克少尿期,或是３～８病日）尤为突出。ＩｇＡ型ＣＩＣ则未见到上述差异。