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1.
G蛋白亲和色谱法纯化动物血清、抗体效果比较   总被引:5,自引:0,他引:5  
比较 Hitrap G蛋白 Sepharose亲和色谱系统对不同动物血清或腹水的纯化效果 ,为抗体纯化提供依据。结果显示 ,G蛋白对不同动物血清 Ig G吸附能力不同 ,体现在单位体积抗体回收量明显不同 ,这一特点与 A蛋白亲和色谱系统相似。该方法简便快速 ,纯化抗体纯度高 ,免疫活性好 ,色谱柱可反复使用多次  相似文献   
2.
为简便、快速、灵敏地测定基因工程半成品中大肠杆菌(DH5α)残余蛋白的含量,用大肠杆菌DHSα菌体蛋白免疫家兔,制备抗血清,建立了间接ELISA法、直接ELISA法、夹心ELISA法和Dot-ELISA法。4种方法的灵敏度很接近,分别为0.5ng/ml、0.5ng/ml、1.5ng/ml、1ng/ml,都明显高于聚丙烯酰胺方法。前3种方法的直线范围分别为0.5~1250ng/ml、0.5~2500ng/ml、0.5~10000ng/ml。经8次测定,显示很好的重复性。  相似文献   
3.
目的:利用酵母双杂交系统筛选与人POT1(human protection of telomeres 1,hPOT1)相互作用的蛋白。方法:以hPOT1的300~634氨基酸片段为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选能与hPOT1相互作用的蛋白质;运用营养缺陷型培养基和X-α-Gal实验排除假阳性,并对阳性克隆进行序列测定和比对。结果:经过酵母双杂交筛选,发现7个与hPOT1相互作用的蛋白;选取NM23B与hPOT1通过GST-pull down和免疫共沉淀进行进一步的验证,结果证明它们确实存在相互作用。结论:hPOT1能与NM23B发生相互作用,在此实验基础上可以进一步研究NM23B与hPOT1相互作用的生物学意义。  相似文献   
4.
为了研究端粒酶催化亚基hTERT基因在癌变细胞中组成型表达的调控机制,采用凝胶阻滞电泳(EMSA)实验方法检测人粒系白血病细胞HL-60、人红系白血病细胞K562、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2及正常人肺成纤维细胞2BS等体外传代的肿瘤和正常二倍体细胞核提取物中与hTERT启动子核心序列结合的核因子活性。结果在4种实验肿瘤细胞中均可检测出与hTERT基因启动子结合的核因子活性,而正常二倍  相似文献   
5.
目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达GST/MKRN1融合蛋白,亲和层析分离纯化目的蛋白,进行动物免疫制备多克隆抗体。方法:MKRN1cDNA全长1449bp,编码482个氨基酸残基。将其基因片段克隆到pGEX-4T-1载体上,获得pGEX-4T-1-MKRN1原核表达重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达,经谷胱甘肽Sepharose4B介质填充的层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到pGEX-4T-1-MKRN1多克隆抗体。结果:ELISA结果显示血清抗体效价可达到1∶256000。通过Western免疫印迹及免疫细胞荧光分析,自制的多克隆抗体能特异地与MKRN1蛋白相互作用,可用于免疫细胞化学分析。结论:制备了效价和特异性良好的抗MKRN1多克隆抗体,经实验验证获得的免疫血清能够满足针对MKRN1的Western免疫印迹和细胞免疫组化检测的实验要求,为今后深入研究MKRN1表达的组织分布、细胞内定位及与端粒酶催化亚基(hTERT)之间相互作用的生物学意义提供了有用的实验工具。  相似文献   
6.
地高辛标记法检测人源细胞系端粒长度   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:建立一种灵敏的、非同位素标记的端粒长度检测方法,并用于人源细胞系的肿瘤研究。方法:以地高辛标记寡核苷酸(TTAGGG)3为探针,对基因组DNA进行Southern印迹检测,经CDP-Star显色后与DNA标准分子量比较,利用图像分析系统计算端粒长度。结果:通过严格控制探针的工作浓度(1∶3000稀释)、DNA上样量(1.5~2.5μg)、杂交温度(42±1℃)等主要影响因素,获得了比较好的杂交条带。结论:建立了一种稳定、可靠、低背景的地高辛标记检测端粒长度的方法;对正常细胞、永生化细胞和肿瘤细胞进行了端粒长度的检测和对比分析。  相似文献   
7.
用重组人促红细胞生成素(rhEPO)免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞在PEC4000作用下与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得一株能分泌抗rhEPO单抗隆抗体的杂交瘤细胞株2F12,染色体数目大于100条,间接ELISA法测定腹水和细胞培养上清效价,分别为1.6×10^-7和4×10^-4。测定抗体亚类时,则同时显示IgA和IgG1,其轻链为κ链;相对亲和力为5×10%^-12mol/L。单抗2F  相似文献   
8.
一种新的制备多克隆抗体的方法   总被引:3,自引:0,他引:3  
用亲和色谱纯化的rhEPO作为抗原免疫KM小鼠和Bal b/c小鼠,然后腹腔注射S180细胞或SP2/0细胞。S180细胞可刺激KM小鼠产生腹水,腹水量大,抗体效价高。而直接注射SP2/0细胞既未能使KM小鼠产生腹水,也未能使Bal b/c小鼠产生腹水。实验提供了一种新的简便、快速、经济地制备高效价多克隆抗体的方法。  相似文献   
9.
用大肠杆菌DH5α菌体蛋白免疫家兔制备抗血清,建立了双抗体夹心ELISA方法。经初步测定,该方法的灵敏度为1.5ng/ml,与间接ELISA法的灵敏度相似,比聚丙烯酰胺凝胶电泳的考马斯亮兰染色方法的灵敏度高将近700倍,比银染色方法的灵敏度高将近30倍。在20~10000ng/ml范围内呈直线关系,直线相关系数为0.996。经八次重复测定,显示很好的重复性。该方法可用于测定基因工程产品中DH5α菌体蛋白的残余量。  相似文献   
10.
人端粒保护蛋白hPot1的一种新选择性剪接体的克隆及鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
hPot1是端粒单链结合蛋白,在维持染色体末端的稳定性中发挥着重要作用。从前列腺癌细胞C4-2中提取总RNA,以反转录得到的cDNA为模板,扩增全长的hPot1 cDNA,发现hPot1基因的一种新的剪接形式。这种新的剪接形式缺失了野生型hPot1基因的第2个外显子,并且造成了读码框架的改变,使翻译提前终止,表达出一段有45个氨基酸残基的短肽。进一步检测表明,这一hPot1 mRNA新剪接体广泛存在于多种组织来源的细胞中,提示这一剪接形式可能是细胞调控hPot1功能的一种调节机制。  相似文献   
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