高效价甘薯羽状斑驳病毒抗血清的制备

用嫁接方法将甘薯羽状斑驳病毒（ＳＰＦＭＶ）接种到Ｉ．ｓｅｔｏｓａ上扩繁,以０．２ｍｏｌ／ＬｐＨ７．２ＰＢＫ缓冲液、垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提取纯化ＳＰＦＭＶ。纯化的ＳＰＦＭＶＯＤ２６０／２８０的比值为１．２５。将纯化的ＳＰＦＭＶ免疫家兔制备抗血清,在环状沉淀和微量沉淀试验中,用提纯病毒测定抗血清的效价均为１：４０９６;以ＳＰＦＭＶ－ＩｇＧ为第一抗体,应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对甘薯和Ｉ．ｓｅｌｏｓａ叶片中的ＳＰＦＭＶ分别作了测定。     

应用Dot—ELISA检测PVX,PVY和PVS

以ＮＣＭ为固相载体、应用间接ＥＬＩＳＡ法测定了纯化的ＰＶＸ、ＰＶＹ和ＰＶＳ;对接种的烟草,马铃薯块茎的芽、休眠块茎顶端的稀释度ＰＶＸ分别为：１／２０４８０－１／８１９２０、１／５１２０;ＰＶＹ分别为１／８１９２０、１／２０４８０和１／５１２０;ＰＶＳ分别为１／８１９２０－１／３２７６８０、１／２０４８０－１／８１９２０和１／５１２０－１／２０４８０,和Ｃｏｃｋｔａｉｌ－ＥＬＩＳＡ相关,检测ＰＶＸ和     

表达Osmotin蛋白的转基因马铃薯对晚疫病的抗性分析

将缺失C端信号肽序列的Osmotin基因和在第96位氨基酸处发生琥珀突变的Osmotin基因置于CaMV双35S启动子驱动下，转化马铃薯，获得NPTII抗性植株。经对20株NPTII抗性植株的Southern检测和对55株NPTII抗性植株的Nouthern分析，证实了Osmotin基因的插入和转录。对21株转Osmotin基因和17株转琥珀突变Osmotin基因植株的抗病性测定，分别筛选出8株和10株抗病性与非转基因植株有显著差异(α=0.05)的转基因植株。对8株转Osmotin基因植株的Dot blotELISA和Western杂交分析，证明Osmotin蛋白胞外分泌能够赋予转基因植株叶片抗晚疫病的能力，研究结果暗示Osmotin蛋白具有抑菌活性的部位可能位于其N-端。