体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠

将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配,共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中,有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。     

家蝇卵黄蛋白基因的克隆与结构序列分析

家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源 .根据 3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物 ,用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为 76 8bp的mdYP1基因的部分DNA片段 .经地高辛标记成特异性探针 ,从构建的家蝇基因组文库中筛选出一个阳性克隆 ,并从该克隆中分离到大小为 3991bp的mdYP1基因组基因 .序列分析显示 ,该基因组序列含有约1 6kb的 5′ 上游区和 1 0kb的 3′ 下游区 ,编码区由一个 6 1bp的内含子和大小分别为 2 2 2bp和10 2 8bp的 2个外显子组成 .5′ 上游区含有典型的CAAT TATA盒 .     

猪瘟兔化弱毒E2基因序列测定与分析

采用微量法(100μl)从牛睾丸细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒(HCLV)RNA,成功地用于RT-PCR扩增。采用Taq Track Sequence System试剂盒方法,用Bio-Rad Model 300 Xi DNA测序仪直接用PCR产物进行序列测定。经过反复多次的序列测定,HCLV E2基因的全部序列已被证实。该序列已被国际基因库(GeneBank)收录,编号为U72048。 将测定的HCLV囊膜糖蛋白E2基因序列输入计算机,采用DNAsis软件与日本的GPE株、ALD株和欧洲的Brescia株、Alfort株猪瘟     

HIV-1结构蛋白在重组痘苗病毒中的高效表达研究

HIV-1粒子中含有3类结构蛋白,即核心蛋白(Gag)、聚合酶(pol)和外膜蛋白(Env)。Gag蛋白既具有诱导体液免疫和细胞免疫的抗原决定簇,又能够自我装配成病毒样粒子     

猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达

本研究首次用RT-PCR技术分两段扩增了我国猪瘟病毒(HCV)标准强毒石门株的主要保护性抗原E2基因,并将其进行了克隆和序列分析。将这两个片段连接成完全的E2基因,并将其克隆到原核表达载体pBV220和pET-28a( )中,重组表达载体转化、诱导的受体菌经Western印迹和直接ELISA检测能够表达E2抗原。 用RT-PCR技术对从我国多个地区收集的猪瘟病料进行检测,结果从吉林、长春、南京、重庆、昆明、佛山病料中扩增出了HCV E2保     

犬瘟热疫苗弱毒部分融合蛋白基因的序列分析

本研究根据Barret T报道的犬瘟热病毒(CDV) Onderstepoort株融合蛋白(F)的基因序列设计了一系列引物,从中选出了一对可扩     

牛病毒性腹泻病毒P125基因重要区的比较与分析

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)为黄病毒科瘟病毒属中的成员。根据在细胞培养物中是否产生病变,可将BVDV分为致细胞病变(CP)和非致细胞病变     

马立克氏病病毒基因结构与功能及其基因工程重组疫苗的研究现状

马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＭＤＶ）主要侵害鸡的性腺、神经、肌肉、皮肤、虹膜及各内脏器官,引起单个或多个组织器官的淋巴细胞增生和单核细胞浸润,是对养鸡业危害最为严重的传染病病原之一。该病最初由匈牙利病理学家Ｊ．ＭａｒｅＫ报...     

鸡减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端结构的分析

从中国发病鸡中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍＶｉｒｕｓ,ＥＤＳＶ）弱毒株（ＡＡ－２）,其基因组全长约为３３ｋｂ。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解ＥＤＳＶ全基因组,构建了以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ（ＫＳ＋）为载体的右末端片段的克隆（约４．２ｋｂ）,对其进行了序列测定和结构分析。该片段全长４１８３个碱基对（ｂｐ）,位于基因组右末端８７．３ｍ．ｕ．－１００ｍ．ｕ．。结果显示,该片段与哺乳动物腺病毒右末端Ｅ４区结构不同,与禽Ⅰ型腺病毒代表株ＣＥＬＯ右末端片段亦无同源性。本文为深入了解ＥＤＳＶ基因组结构特点,ＥＤＳＶ与其他腺病毒基因结构与功能的进化关系和ＥＤＳＶ载体的构建奠定了分子生物学基础     

噬菌体抗体文库的构建及人源抗HIV-1 gp 160抗体的筛选

构建人源噬菌体抗体文库如下：ＨＩＶ感染者脾细胞中提取ｍＲＮＡ,经反转录再以人ＩｇＧ重链Ｆｄ两端及轻链“通用”引物分别扩增Ｆａｂ基因片段,依次插入到噬菌粒载体ｐＣｏｍｂ３中,电转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,经辅助噬菌体救助,重组噬菌体得以溶源裂解,Ｆａｂ表达于噬菌体包膜蛋白Ⅲ的Ｎ端．此噬菌体抗体库的容量为５×１０５．筛选抗ＨＩＶ－１同时又具有能被抗独特型抗体“ＩＦ７”所识别的独特型的阳性抗体：以重组包膜糖蛋白ｇｐ１６０及ｇｐ４１多肽对噬菌体抗体文库进行三次淘选,使抗ｇｐ１６０的特异性抗体得到１００倍的富集．然后通过直接ＥＬＩＳＡ和竞争性ＥＬＩＳＡ实验筛选出两株结合性较好的特异性抗ｇｐ１６０抗体－３Ｂ株与１Ｄ株．直接ＥＬＩＳＡ实验表明这两株克隆均能被“１Ｆ７”所识别,为抗独特型多肽的筛选奠定了基础．