拟南芥ACOL8基因在乙烯合成与响应中的功能分析

植物激素乙烯在多种生理生化过程中发挥重要作用,但其在特定组织器官中的合成机制尚不完全清楚。拟南芥中存在12个功能未知的ACC氧化酶类似蛋白（ACO-like homolog,ACOL）,运用基因定点编辑技术构建了ACOL8的功能丧失型突变体,发现该基因的突变削弱了经典的乙烯“三重反应”。与野生型相比,突变体黄化幼苗下胚轴及主根的长度显著增加,这与突变体对外源ACC的敏感性下降现象一致。同时还发现ACOL8基因的表达受乙烯信号的正反馈调控,EIN3过表达增强其表达水平,而etr1-3的突变则产生相反效应。再者,在正常条件下,ACOL8基因的突变并未影响拟南芥的生长;但在盐胁迫条件下,突变体的根冠比显著下降,这说明该基因参与植物的盐胁迫响应。综上,这些结果说明ACOL8可能具有ACC氧化酶的功能,参与乙烯的合成与响应。     

专一识别脱落酸甲酯的单克隆抗体的制备与应用

专一识别２－顺（Ｓ）ＡＢＡ甲酯的单克隆抗体来源于以ＡＢＡ分子中的１－ＣＯＯＨ为偶联位点合成的免疫原。它与游离态ＡＢＡ和结合态ＡＢＡ葡萄糖酯的交叉反应仅分别为１％与３．５％,而与ＡＢＡ类似物,如２－顺－黄质醛、紫黄质以及ＡＢＡ的２－反式异构体和（Ｒ）－对映体则无交叉反应。利用该抗体建立的高度灵敏和精确的ＡＢＡｍｅ酶联免疫测定法,其检测线性范围为０．０４８～１．５２ｐｍｏｌ。通过ＡＢＡｍｅＥＬＩＳＡ和ＧＡ１＋３ＥＬＩＳＡ分析可知羊蹄叶片衰老与内源ＧＡ１＋３／ＡＢＡ比值的下降有关。     

识别未衍生化的13—羟化GAs及其葡萄糖苷的单克隆抗体

抗ＧＡ３ 及其葡萄糖苷的ＭＡＢ１０单克隆抗体源于以ＧＡ３ 中的３ 位羟基（３－ＯＨ）为偶联位点,人血清白蛋白（ＨＳＡ）为载体合成的ＧＡ３－３－ＨＳＡ 免疫原． 该抗体对１３－羟化ＧＡｓ（１３－ＯＨＧＡｓ、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ５ 等）和ＧＡ３ 葡萄糖苷具有高亲和力． ７ 位羧基的甲酯化可显著降低ＭＡＢ１０ 对１３－ＯＨ ＧＡｓ的亲和力,而３－ＯＨ 的糖苷化却未降低其亲和力． 用该抗体建立的两种分别用于ＧＡ３ 及其葡萄糖苷测定的酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）,其检测线性范围均为０．２～２０ ｐｍ ｏｌ． 借助这两种ＥＬＩＳＡｓ,研究了羊蹄（Ｒｕｍ ｅｘ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）叶片中ＧＡ３ 及其类似ＧＡｓ和葡萄糖苷的动态变化．结果表明,叶片衰老与游离态ＧＡｓ的糖苷化有关;而６－ＢＡ 延缓衰老则可能与其减缓ＧＡｓ的糖苷化有关     

烟草原胚中赤霉素GA7与GA4分布的免疫电镜观察

烟草原胚中赤霉素ＧＡ７与ＧＡ４分布的免疫电镜观察陈以峰１梁世平１杨弘远２郑志富２周燮１（武汉大学生命科学学院植物生殖生物学研究室武汉４３００７２）２（南京农业大学农学系南京２１００９５）关键词原胚,赤霉素,免疫电镜定位,烟草ＤＩＳＴＲＩＢＵＴＩＯＮＯ...     

一种与核酸复合的脱落酸结合蛋白

用抗脱落酸 (Abscisicacid ,ABA)结合蛋白 (ABBP)血清作为探针筛选玉米cDNA表达文库 ,从 2 0 0 0 0 0个独立噬斑中 ,仅获得 1个编码多肽的cDNA克隆 ,它与动物的某些核酸结合蛋白基因的同源性高达 6 0 %～ 6 5 % .此外 ,获得 1 2 0个编码玉米 1 7SrRNA的cDNA克隆 .鉴于此 ,对经ABA亲和纯化所得的ABBP及其抗血清进行了复查 .发现rRNA伴随ABBP而存在 ;该抗血清除能识别ABBP外 ,还能识别rRNA ,推断某些ABBP具有与核糖核酸结合的性质 ,即能与rRNA形成复合物     

An ABA-binding protein with nucleic acid-binding property

ＴｈｅｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅＡＢＡｉｓｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐｌａｎｔｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓ,ｓｕｃｈａｓｅｍｂｒｙｏｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒｅｓｐｏｎｓｅｏｆｖｅｇｅｔａｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｓｔｏｓｔｒｅｓｓｅｓ.Ｄｕｒｉｎｇｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ,ｍｕｃｈｉｓｋｎｏｗｎａｂｏｕｔｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｅｖｅｎｔｓｉｎＡＢＡｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓ…     

细胞分裂素的混合抗体型免疫亲和柱的制备与应用

内源细胞分裂素可以分成三组：异戊烯基腺苷组（ｉＰＡｓ）、玉米素核苷组（ＺＲｓ）、二氢玉米素核苷组（ＤＨＺＲｓ）。从这三组分别选ｉＰＡ、ＺＲ、ＤＨＺＲ为半抗原合成免疫原,获得的三种免抗血清基本上只识别相应组的细胞分裂素。将经初纯化的三种抗血清偶联到ＣＮＢｒ活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ上制成免疫亲和柱。在其中的一根柱床高２．１ｃｍ、体积３．５５ｍｌ、直径１．５ｃｍ的亲和柱上,在流速１．５ｍｌ／ｍｉｎ、８０％冷甲醇为洗脱剂的条件下测得该柱容量为３．６—４．０μｇ、回收率达９３．９％～９８．３％。用该柱对丝瓜茎木质部伤流中细胞分裂素进行了纯化．表明能够用此柱对植物粗提液中的细胞分裂素进行快速分离纯化。     

专一识别甲酯化赤霉素7，4的单克隆抗体的制备

合成Gas－3-O－HAS免疫原的同时,往往产生Gaa－7－CONH—HAS等其它成分,从而有可能通过特定的ELISA分步筛选法,在一次单抗研制流程中兼得两类针对不同Gas抗原决定簇的单克隆抗体(Mabs)。交叉反应结果表明,其中的Mab BG2对GA_7/4甲酯具有高亲和力和专一性,它与GA7me的亲和力比GA3me与GA1me分别高出100与200倍。7位羧基的甲酯化可显著增加Gas与该抗体的结合,而A环上双键或3β基的缺失,19,10－r-内酯环的破坏及D环上13位羟基的存在却严重降低Gas．与它的结合。这种高专一性的单抗将可用于高等植物和真菌体内早期非羟化途径中的GA7与GA4的免疫定量与定位研究。用该抗体建立的GA4me与GA7me ELlSAs具有极高的灵敏度,两者的检测范围分别为1．0×10^-14～1．O×1O^-13mol与2．0×10^-15～2．0×10^-13mol。