Cloning and expression of 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene

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5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因的克隆和表达

同型半胱氨酸血症是心血管病和出生性缺陷的一个危险因素 .5- 1 0- 亚甲基四氢叶酸还原酶活力的降低是引起高同型半胱氨酸血症的一个重要原因 .克隆了人和大鼠的 5- 1 0 -亚甲基四氢叶酸还原酶的cDNA ,构建了人MTHFR的原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达出MTHFR的蛋白质 .并且初步发现 ,IL- 1和同型半胱氨酸均可以促进大鼠MTHFR基因的表达     

应用肌肉介导基因转移制备5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)抗体

５,１０亚甲基四氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）是叶酸代谢的关键酶．为了试验肌肉介导外源基因人ＭＴＨＦＲ（ｈＭＴＨＦＲ）制备抗体和建立ＭＴＨＦＲ免疫检测的可能性,构建了ＭＴＨＦＲ基因真核表达载体（ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ）;通过基因缝线法将携带ｐｃＤＮＡ３／ＭＴＨＦＲ的质粒,缝合于预先注射再生剂（丁哌卡因）的肌肉内．２个月后分离血清,所得抗体应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ,ＥＬＩＳＡ和胎肝免疫组织化学染色进行免疫鉴定．胎肝免疫组织化学显示,在肝小梁细胞浆中具有大量ＭＴＨＦＲ阳性反应颗粒;Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ有ＭＴＨＦＲ抗体与其抗原特异的褐色条带,分子量约为３７ｋＤ;ＥＬＩＳＡ分析表明,３种不同浓度的抗体与不同剂量的抗原反应具有剂效关系,最适抗体滴度（ＥＤ５０）为１∶４００。以上结果说明肌肉介导外源基因是获得抗体的一种简单、快捷的方法．该抗体可用于ＭＴＨＦＲ的免疫检测和有关的叶酸代谢研究工作．