连续培养生产L－氨基酸

在５升发酵罐上对Ｌ－Ａｒｇ和Ｌ－Ｌｙｓ作了单级连续培养试验。从嗜醋酸棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍａｃｅｔｏａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｍ）产Ｌ－Ａｒｇ的突变型ＭＣ－１３的连续培养液中分离出的ＳＣ－１９０菌株能连续超过２５０小时稳定地产Ｌ－Ａｒｇ达６０ｇ／Ｌ。用谷氨酸棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）产Ｌ－Ｌｙｓ突变株Ｂ－６进行连续培养,可稳定维持５００小时之久。连续培养产Ｌ－Ｌｙｓ·ＨＣｌ浓度达１０５ｇ／Ｌ,体积产率为５．６ｇ／Ｌ／ｈ,是流加培养的２．５倍。产率提高依赖于氧气的供应,实验表明连续培养是分离适于连续培养菌株和提高产率的有效手段。     

欧文氏菌和棒杆菌的属间融合研究*

研究了用原生质体融合技术获得欧文氏菌和棒杆菌的融合细胞。串联发酵Ｄ－葡萄糖产生２－酮基－Ｌ－古龙酸的第一步发酵菌株欧文氏菌ＳＣＢ２４７经０．８ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解０．５ｈ后,原生质体的形成率和再生率分别为９９．８％和２７．８％。第二步发酵菌株棒杆菌ＳＣＢ３０５８经预处理后由１．３ｍｇ／ｍＬ溶菌酶酶解２ｈ,原生质体的形成率和再生率分别为９９．５％和５６．３％。用携带氨苄青霉素抗性标记的ＳＣＢ２４７和经热灭活的ＳＣＢ３０５８为亲本,在４０％ＰＥＧ６０００和０．２ｍｏｌ／Ｌ新生磷酸钙等适宜条件下融合,融合频率为３．６×１０~(－６)。在非选择和选择培养基上连续传代十几次后,对融合子的单菌形态、染色结果、菌落形态、色泽、总蛋白量、同工酶、发酵性能等方面与亲本进行了比较。结果表明,融合子确系棒杆菌和欧文氏菌的融合细胞。摇瓶发酵结果显示,所得的３８株稳定的融合子中约４０％能转化葡萄糖为维生素Ｃ前体２－酮基－Ｌ－古龙酸。     

应用单克隆抗体CL－2、CL－4对大肠癌、癌旁病变的免疫组化研究

应用抗人结肠癌单克隆抗体ＣＬ－２,ＣＬ－４,对２０５例大肠癌及癌旁病变进行了免疫组化研究。ＣＬ－２相应抗原在移行粘膜,轻、中、重度非腺瘤异型增生,大肠癌的阳性率分别为３７．６％、６３．２％、８６．７％、９０．９％及８６．８％,阳性率呈递增趋势;ＣＬ－４相应抗原的阳性率依次是３９．１％、５７．９％、７３．３％、８１．８％及７７．６％;４０例正常大肠粘膜均阴性。结果表明,ＣＬ－２、ＣＬ－４都是对大肠癌阳性率较高的标记物,但用来鉴别癌与异型增生意义不大;一部分大肠癌可能来源于非腺瘤途径;移行粘膜不同程度的肿瘤相关抗原的表达,反映了其潜在的恶性性质,但其程度低于异型增生,文中,对其临床意义进行了讨论。     

L-赖氨酸产生菌FH128菌株的研究(Ⅰ)FH128菌株的选育及摇瓶发酵

以赖氨酸产生菌Ａ１１１（ＨＳ－、ＡＥＣｒ）为出发株,经化学诱变剂ＭＮＮＧ（Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍）及单氟醋酸处理获得单氟醋酸抗性突变株Ｆ７９,摇瓶发酵产Ｌ－赖氨酸盐酸盐７．０％～７．５％,对糖转化率３８％～４０％,分别比Ａ１１１株提高约２５％及２０％。然后,再以Ｆ７９菌为亲株经ＭＮＮＧ及噻唑丙氨酸处理获得噻唑丙氨酸抗性突变株ＦＨ１２８,在适宜的培养条件下,摇瓶发酵产Ｌ－赖氨酸盐酸盐８．５％～９．５％,最高产酸率１１％,对糖转化率４５％～５０％。在１６Ｌ自控发酵罐发酵,产Ｌ－赖氨酸盐酸盐１２％～１４％,对糖转化率４０％～４５％;在２０～１００ｍ３发酵罐发酵,产酸率为８．５％～９．５％,对糖转化率４０％～４２％,提取总收率８０％～８５％,成品（饲料级Ｌ－赖氨酸盐酸盐）质量符合国家标准（ＧＢ８２４５－８７）。ＦＨ１２８菌株遗传性能稳定,营养要求粗放,工艺较简单,便于工业化,二年前已应用于工业生产。     

L－异亮氨酸产生菌选育的研究

以黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６７为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）、紫外线（ＵＶ）和亚硝基胍（ＮＴＧ）逐级诱变处理,α－氨基－β－羟基戊酸（ＡＨＶ）、Ｓ－２－氨基乙基－Ｌ－半胱氨酸（ＡＥＣ）、磺胺胍（ＳＧ）、乙硫氨酸（Ｅｔｈ）、α－氨基丁酸（α－ＡＢ）、异亮氨酸氧肟酸（ＩｌｅＨｘ）等氨基酸结构类似物及琥珀酸为碳源平板定向筛选,获得一株Ｌ－异亮氨酸高产菌ＺＱ－４（ＡＨＶ~γ、ＡＥＣ~γ、ＳＡＭ~γ、ＳＧ~γ、Ｅｔｈ~γ、α－ＡＢ~γ、ＩｌｅＨｘ~γ）在含１３．５％葡萄糖培养基中,摇瓶发酵７２ｈ、Ｌ－异亮氨酸积累可达２．８－３．０％。     

L－异亮氨酸产生菌选育的研究

以黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６７为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）、紫外线（ＵＶ）和亚硝基胍（ＮＴＧ）逐级诱变处理,α－氨基－β－羟基戊酸（ＡＨＶ）、Ｓ－２－氨基乙基－Ｌ－半胱氨酸（ＡＥＣ）、磺胺胍（ＳＧ）、乙硫氨酸（Ｅｔｈ）、α－氨基丁酸（α－ＡＢ）、异亮氨酸氧肟酸（ＩｌｅＨｘ）等氨基酸结构类似物及琥珀酸为碳源平板定向筛选,获得一株Ｌ－异亮氨酸高产菌ＺＱ－４（ＡＨＶ~γ、ＡＥＣ~γ、ＳＡＭ~γ、ＳＧ~γ、Ｅｔｈ~γ、α－ＡＢ~γ、ＩｌｅＨｘ~γ）在含１３．５％葡萄糖培养基中,摇瓶发酵７２ｈ、Ｌ－异亮氨酸积累可达２．８－３．０％。     

CCK－8和NDAP对大鼠脑和脊髓组织c－fos表达的影响

为探讨八肽胆囊收缩素（ＣＣｋ－８）和阿片肽相互作用的分子机理,利用抗体免疫沉淀技术研究了ＣＣＫ－８与ＮＤＡＰ（ｋ阿片受体激动剂）对大鼠脑（去皮层和小脑）和脊髓背柱组织Ｆｏｓ蛋白的影响。结果表明,０．１μｍｏｌ／ＬＣＣＫ－８可显著刺激脑和脊髓组织中Ｆｏｓ蛋白增加（分别是对照组的３．８倍和３．６倍）。相同浓度的ＮＤＡＰ对Ｆｏｓ蛋白的生成亦有一定的诱导作用,分别是对照组的２．７倍和２．６倍。ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ共同处理组织,Ｆｏｓ蛋白生成水平相似（脑）或高于（脊髓）ＣＣＫ~－８单独诱导的水平。结果表明,ＣＣＫ－８和ＮＤＡＰ均可直接诱导大鼠脑和脊髓组织ｃ－ｆｏｓ的表达,它们对ｃ－ｆｏｓ表达的相互作用在脑和脊髓中呈现不同的模式。     

温度适应范围大的谷氨酸生产菌GMH—908选育,发酵及应用效果

以谷氨酸生产菌天津短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｉｅｎｔｓｉｎｅｎｓ）Ｔ６－１３为出发菌株,经菌体或原生质体紫外线（ＵＶ）、氯化锂、香豆素等多因子诱变和高温驯化,选育出琥珀酸、生物素营养缺陷型,耐高糖、耐高谷氨酸又不利用谷氨酸,且温度适应范围大（既可在常温３２－３８℃发酵,又可在高温３６－４２℃发酵）的突变株ＧＭＨ－９０８。以淀粉糖为碳源,生物素亚适量,摇瓶常温发酵产酸９５ｇ／Ｌ以上,高温发酵产酸７４．９ｇ／Ｌ,比出发菌株Ｔ６－１３分别提高２６．６７％和２２．９９％;工业生产常温发酵月平均产酸８５－８８ｇ／Ｌ,转化率５２－５４ｇ％,单罐最高产酸１０８ｇ／Ｌ,转化率５８％;高温发酵产酸达７６．５ｇ／Ｌ,转化率４９．５％。     

优化mRNA翻译起始区提高人粒－巨噬细胞集落刺激因子在E．coli中的表达

人粒－巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）是一种重要的造血生长因子．利用基因重组技术构建两个ｈＧＭ－ＣＳＦ的Ｅ．ｃｏｌｉ表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对ｍＲＮＡ翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ））,另一个为未突变的对照（ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ））．经酶切电泳、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的１４．６ｋＤｈＧＭ－ＣＳＦ,但ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｍ）的表达水平较ｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｎ）提高了１．２６倍,占菌体总蛋白的１６．９％．ｍＲＮＡ翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔＧ从原来的－１０．２提高至－９．４Ｋｃａｌ,ＡＵＧ从部分配对状态变为非配对状态．     

耐碱性真菌纤维素酶生产菌的筛选及酶学性质的初步研究

从造纸厂碱性土样中分离到２４株能够产生纤维素酶的真菌,经过摇瓶昨筛,选出一株耐碱性纤维素酶产生菌Ｓ６０７。经过鉴定。该菌株为黑色葡萄装穗霉（Ｓｔａｃｈｙ－ｂｏｔｒｙｓ ａｔｒａ）。通过对其粗酶液的性质进行测定,该菌所产纤维素酶粗酶液中的ＦＰＡ、ＣＭＣａｓｅ和β－葡萄糖苷酶的最适ｐＨ分别为６．０,６．０和６．５,其中内切酶在ｐＨ９．０时仍能保持最高酶活力的５０％以上,实验表明该菌株所产纤维素酶具有较     

灵芝菌诱变育种与深层培养的研究

采用紫外线对灵芝菌进行了诱变处理,选育到一株高产菌株ＵＶ－６０Ｓ,其菌体干重达１３．１ｇ／Ｌ,粗多糖含量为６４０ｍｇ／Ｌ,分别比原菌株提高了２１．３％和３０．６％;并研究了培养基组成和培养条件对菌体生长的影响,优化了深层培养的工艺条件,使菌体产量与胞外多糖含量比优化前分别提高了１５．３％和１８．８％。     

高碳酸抑制兔离体基底动脉缺氧性收缩

在离休兔基底动脉观察了ＣＯ＿２浓度、ｐＨ值对血管缺氧反应的影响。在以５－羟色胺（５－ＨＴ,１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ）预收缩后,缺氧使血管张力升高（Ｔ＿Ｈ）１１４．８７±４０．７５ｍｇ,其占总张力变化的百分数Ｔ（％）为４８．６２±１２．１１（ｎ＝５１）。去内皮对缺氧性收缩无影响。随浴槽液中ＣＯ＿２浓度增加,缺氧性收缩幅度减弱,在Ｐｃｏ＿２为８．００、９．３３和１０．６７ｋＰ８时,Ｔ（％）仅分别为３８．３０±５．３６（ｎ＝１１）、３２．２５±７．７６（ｎ＝１３）和２９．９０±９．２６（ｎ＝１１）,较对照值（Ｐｃｏ＿２＝５．３３ｋＰａ时）均有显著差异（Ｐ＜０．０１）。ｐＨ７．２－７．７时血管缺氧反应无显著变化。一氧化氮合成酶抑制剂Ｌ－ＮＮＡ（１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ可抑制血管的缺氧收缩反应,也抑制了不同ＣＯ＿２浓度对缺氧反应的影响。结果提示ＣＯ＿２可能经促血管分泌一氧化氮的功能而抑制了缺氧性收缩。     

革兰阴性杆菌产超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性

目的 了解本院最近的革兰阴性杆菌中产超广谱β－内酰胺酶（ＣＳＢＬ）菌株的民生北及其耐药性情况。方法 双纸片法筛选,然后用头孢噻肟／棒酸,头孢他啶／棒权进行确证。结果 １７４株革兰阴性杆菌中有４６株是ＥＳＢＬ菌株,包括大肠埃希菌２７株,肺炎克雷伯菌１３株,阴沟肠杆菌４株,铜绿假单胞菌１侏,枸橼酸杆菌１株。本院ＥＳＢＬ株以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌多见,名占该种菌中的３３％、４２％。ＥＳＢＬ菌株对亚胺培     

一株高效脱酚菌麦芽糖假丝酵母10－4的研究

从炼油厂严重污染的污水和土壤中分离筛选到１２株假丝酵母及丝孢酵母,能以苯酚为唯一碳源生长,２８．４０ｈ内降解苯酚可达１２００ｍｇ／Ｌ以上。其中１０－４号菌株降解苯酚浓度最高可达１７００ｍｇ／Ｌ。在含５００ｍｇ／ｌ苯酚及２０ｍｇ／ＬＣＮ－（５０ｍｇ／ＬＫＣＮ）的培养液中,降解苯酚的同时能降解１３．７ｍｇ／Ｌ的ＣＮ^－。鉴定为麦芽糖假丝酵母（Ｃｏｎｄｉｄａｍａｌｔｏｓａ）。其生长的最适ｐＨ范围为６－９,降解苯酚的最适ｐＨ范围为４－９,生长的最适温度为２５－３２℃,降解苯酚的最     

~（60）Co－γ射线诱变钝顶螺旋藻的研究

用不同剂量的６０Ｃｏ－γ射线诱变钝顶螺旋藻Ｓｐｉｒｕｌｉｎａｐｌａｔｅｎｓｉｓ出发株（Ｓｐ）ＩＳ－９００１０,筛选获得两株抗高光抑制突变株（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０和（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著变短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制,１３０００ｌｘ光强下出发株和两个突变株的代时分别为２９．４、２０．８和２２．２ｈ。（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１的光合作用和呼吸作用与出发株相似,而（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０明显地表现出高光合、低呼吸作用。突变株和出发株都属于中温品系,最适温度为２８℃,具有较广的温度适应范围（２３～３５℃）以及相同的耐盐性,但突变株的生长速率比出发株快、代时短。此外三者的蛋白质含量、氨基酸组成差别不大：（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１１的可溶性多糖比出发株减少４０％。而在（Ｓｐ）ＡＩｐ－９００１０中其含量提高６０％。     

藻－菌生态系统代谢功能的生态学研究

在室内模拟条件下,研究了一些生态因子对藻－菌（Ａ＋Ｂ）生态系统代谢有机碳（Ｃ６Ｈ１２Ｏ６）、ＮＨ３－Ｎ和无机磷（ＩＰ）的影响．研究结果表明,当藻－菌生态系统中藻（Ａ）或菌（Ｂ）的起始数量一定时,其代谢Ｃ６Ｈ１２Ｏ６的速率,随与之组合的Ｂ或Ａ的起始数量增加（数量比则相应降低）而增加．在光照和黑暗条件下,Ａ＋Ｂ系统代谢上述３种营养物质的速率均有一定的差异．黑暗下Ｃ６Ｈ１２Ｏ６的平均代谢速率较光照下高１２．３％（Ｐ＜０．０５）,ＩＰ和ＮＨ３－Ｎ的平均代谢速率则分别较光照下低１４．４％（Ｐ＜０．０５）和１６．２％（Ｐ＜０．００１）．在Ａ＋Ｂ系统和Ａ、Ｂ单培养物中,３种营养物质的代谢速率均随有机负荷量增加而增加,而且Ａ＋Ｂ系统的代谢速率分别高于单培养的Ａ和Ｂ,其中ＮＨ３－Ｎ代谢尤为显著．文章还就生态系统结构与功能的关系问题进行了讨论．     

PGDH^L生化突变型谷氨酸生产菌株选育的生化模式

以Ｔｂｍ－３（ｉｃｌ＾－,异柠檬酸裂解酶活力的生化突变株）为出发菌株,经紫外一诱变,通过依据生人代谢所设计的选择培养基（Ｌ－阿拉伯糖平板与Ｄ－葡萄糖酸钠平板）对接的筛选方法,获得磷酸葡萄糖酸脱氢酶（ＰＧＤＨ,Ｅ．Ｃ．４．２．１．１２）忖突变型的生化突变型菌株Ｔｂｍ３．１８,该菌株经摇瓶发酵试验显示,比出发菌株Ｔｂｍ－３提高产酸率８．９％和转化率８．１％,表明ｐｇｄｈ或ｐｇｄｈ生在变型菌株的选育,对     

α，β－受体阻断剂对大鼠缺氧性脑血管扩张反应的影响

本实验采用堤式颅窗软脑膜微循环实验方法,利用去甲肾上腺素和α,β－受体阻断剂,研究了交感神经在缺氧性脑血管扩张反应（ＨＣＶ）中的作用。去甲肾上腺素（１０－７ｍｏｌ／Ｌ和１０－６ｍｏｌ／Ｌ）对软脑膜微动脉无明显作用。β－受体阻断剂普萘洛尔（局部用药,下同）对ＨＣＶ无明显影响,而用１０－６ｍｏｌ／Ｌ哌唑嗪阻断软脑膜微动脉α－受体可明显增强ＨＣＶ（由２１．５±９．８％增至３０．６±９．２％,Ｐ＜０．０１）。结果提示,正常情况下交感神经对脑血管影响较小,但在缺氧时,交感神经对脑血管有收缩作用。交感神经可能通过增加其末梢释放去甲肾上腺素,作用于α－受体,限制微劝脉扩张而在缺氧性脑血管扩张反应中起调节作用。     

L－赖氨酸快速发酵新菌种及工艺研究

以我室选育的赖氨酸生产菌Ｓ－２１－２４为出发菌株,经硫酸二乙酯（ＤＥＳ）和紫外线（Ｕ．Ｖ．）的复合处理,选育到一株代谢速率高,发酵周期短的新菌株ＦＴＳ－１。对该菌的发酵条件作了研究,选择了最佳培养条件,该菌在５Ｌ发酵罐中发酵４８小时产酸８０ｇ／Ｌ以上,７２小时产酸可达１１０ｇ／Ｌ。     

产谷氨酸棒杆菌B9和T6—13的原生质体融合

棒杆菌Ｂ９和Ｔ６—１３两菌株经ＵＶ变处理得到Ｂ９—２（ＳｍＲ）和Ｔ６—１３—３（ＲｉｆＲ）两菌株,以此两菌株做为出发菌株。将对数前期的培养细胞经青霉素予处理及酶解制备原生质体,用４０％ＰＥＧ６０００为助融剂,进行原生质体融合。用间接法检出具有Ｓｍ、Ｒｉｆ抗性的融合子。融合频率为６．５５×１０－６－１．６４×１０－５,融合子双抗性稳定,产谷氨酸,经摇瓶实验筛选出一株产谷氨酸明显高于亲本的融合子ｆｕ３６。