PERV在猪外周血白细胞DNA和组织mRNA中的表达及其差异性分析

为了解我国家猪猪内源性逆转录病毒(PERV)生物学的基本特征,为评价应用猪器官、组织、细胞进行猪一人间跨种移植的生物安全性提供理论基础。本文采用PCR方法调查12个家猪品系外周血白细胞DNA基因组PERV的生物学特征,并应用SS-SSCP、RFLP-PCR方法分析PERV基因片段的差异性及采用RT-PCR方法和半定量方法分析2个品系小型猪13种组织PERV表达的差异。结果表明12个品系猪外周血白细胞DNA基因组普遍存在PERV-A、-B基因序列,未发现单链构象多态性;部分品系猪PER Venv基因序列片段存在限制性片段长度多态性。分析2个品系13种组织均表达PERV-A、-B、-C,肾、淋巴结、肝为高表达器官,胰腺和脑组织为低表达器官,PERV-C mRNA丰度明显低于PERV-A、-B mRNA。PERV env存在限制性片段长度多态性、PERV-A存在碱基缺失和错配的现象,有可能在猪异种移植中构成PERV感染的潜在危险性,这是在猪异种移植过程中值得高度关注的问题。     

PERV在猪外周血白细胞DNA和组织mRNA中的表达及其差异性分析

为了解我国家猪猪内源性逆转录病毒(PERV)生物学的基本特征,为评价应用猪器官、组织、细胞进行猪-人间跨种移植的生物安全性提供理论基础.本文采用PCR方法调查12个家猪品系外周血白细胞DNA基因组PERV的生物学特征,并应用SS-SSCP、RFLP-PCR方法分析PERV基因片段的差异性及采用RT-PCR方法和半定量方法分析2个品系小型猪13种组织PERV表达的差异.结果表明12个品系猪外周血白细胞DNA基因组普遍存在PERV-A、-B基因序列,未发现单链构象多态性;部分品系猪PERV env基因序列片段存在限制性片段长度多态性.分析2个品系13种组织均表达PERV-A、-B、-C,肾、淋巴结、肝为高表达器官,胰腺和脑组织为低表达器官,PERV-C mRNA丰度明显低于PERV-A、-B mRNA.PERV env存在限制性片段长度多态性、PERVA存在碱基缺失和错配的现象,有可能在猪异种移植中构成PERV感染的潜在危险性,这是在猪异种移植过程中值得高度关注的问题.     

Bcl-2在去甲二氢愈创木酸诱导恶性胶质瘤细胞凋亡中的变化

观察bcl-2在去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞凋亡中的变化。利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况。用免疫组织化学,原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2基因mRNA和蛋白的表达水平。结果显示：（1）一定浓度的NDGA处理SHG-44细胞12-96h,均可诱导SHG-44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;（2）免疫组织化学方法结果显示,NDGA处理细胞后,出现SHG-44细胞bcl-2蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞凋亡的发生密切相关;（3）原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG-44细胞bcl-2基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组织化学方法检测结果一致,上述结果表明,NDGA诱导SHG-44细胞凋亡过程中,bcl-2基因的表达降低,但其确切机制有待进一步深入研究。     

10个品系小鼠的RAPD 分析

小鼠是应用最为广泛的实验动物,预先了解品系或近交系的遗传纯度或系间遗传距离,对于试验材料的选取和实验结果分析都有很大帮助.传统的实验动物遗传监测多限于基因表型的检测,检测位点在整个基因组中所占比例小,分布不均.由于RAPD方法的优势,用一系列引物可检测出覆盖整个基因组的遗传改变,在动、植物品系鉴定和遗传监测方面已取得大量成果(陈洪等,1994;沈曦等,1999),但对多品系小鼠的研究报道较少.因此,本研究选用10个常用小鼠品系,筛选较好的多态标记,建立各品系的RAPD图谱,以区分不同品系的小鼠,为今后的质量监测工作提供参照标准;同时根据RAPD扩增结果计算出各品系间的相对遗传距离,在DNA水平探讨不同品系小鼠间的亲缘关系.     

猪皮肤成纤维细胞PERV体外和体内感染性的研究

为了解猪皮肤成纤维细胞PERV在体外和体内的感染性,通过建立猪皮肤成纤维细胞系,将所建细胞系与人胚胎肾293细胞体外共培养,并移植于严重联合免疫缺陷鼠(SCID鼠)皮下进行猪皮肤成纤维细胞PERV的体外和体内感染性实验。结果表明,猪皮肤成纤维细胞与人胚胎肾细胞共培养过程中,猪内源性逆转录病毒感染人胚胎肾细胞,进一步证实和拓宽了猪细胞PERV感染人细胞的范畴;猪皮肤成纤维细胞移植SCID鼠皮下后,导致SCID鼠发生猪细胞微嵌合(78．57％)和PERV在体内感染(85．71％)并且波及远离移植部位的多种组织或器官,但是并未检测出SCID鼠组织中表达PERV env RNA。这就证实了猪皮肤成纤维细胞PERV的体外感染性和在小鼠体内的感染性,但未能找到PERV在体内活跃复制的明显证据。因而,在猪异种移植过程中PERV传播的潜在危险仍然是必须高度重视的生物安全性问题。     

应用单克隆抗体CL－2、CL－4对大肠癌、癌旁病变的免疫组化研究

应用抗人结肠癌单克隆抗体ＣＬ－２,ＣＬ－４,对２０５例大肠癌及癌旁病变进行了免疫组化研究。ＣＬ－２相应抗原在移行粘膜,轻、中、重度非腺瘤异型增生,大肠癌的阳性率分别为３７．６％、６３．２％、８６．７％、９０．９％及８６．８％,阳性率呈递增趋势;ＣＬ－４相应抗原的阳性率依次是３９．１％、５７．９％、７３．３％、８１．８％及７７．６％;４０例正常大肠粘膜均阴性。结果表明,ＣＬ－２、ＣＬ－４都是对大肠癌阳性率较高的标记物,但用来鉴别癌与异型增生意义不大;一部分大肠癌可能来源于非腺瘤途径;移行粘膜不同程度的肿瘤相关抗原的表达,反映了其潜在的恶性性质,但其程度低于异型增生,文中,对其临床意义进行了讨论。     

裸鼠体内高转移人肺癌模型的筛选

将人肺巨细胞癌ＰＬＡ－８０１Ｄ裸鼠皮下移植瘤作为瘤源,建立了ＰＬＡ－８０１Ｄ－ＡＳ裸鼠腹水鼠模型,其转移率及转移程度明显增高;以ＰＬＡ－８０１Ｄ－ＡＳ腹水瘤模型的肺转移灶细胞进行裸鼠皮下连续传代,建立了肺转移率及程度高于ＰＬＡ－８０１Ｄ的ＰＬＡ－８０１ＤＬ皮下移植瘤株。本文从肿瘤的异质性以及肿瘤与宿主相互作用的角度讨论了其肺转移提高的原因。