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60Co-γ射线诱变钝顶螺旋藻的研究 总被引:14,自引:1,他引:13
用不同剂量的^60Co-γ射线诱变钝顶螺旋藻Spirulina platensis出发株(Sp)IS-90010,筛选获得两株抗高光抑制突变株(Sp)AIp-90010和(Sp)AIp-90011,然后比较出发株和突变株的一般形态和生理生化特性。出发株和突变株的一般形态有较大的差异,与出发株相比,两个突变株藻丝体显著主烃短,螺旋数目大大减小。出发株是对高光敏感的品系,而突变株表现明显的抗高光抑制, 相似文献
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二酰甘油-蛋白激酶C信使系统在LA90细胞转化中的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
以LA90细胞(RSV温度敏感突变株LA90转化的小鼠成纤维细胞〕为模型,研究了二酰甘油(DG)-蛋白激酶C(PKC)信使系统在细胞转化中的作用。通过免疫沉淀法观察到LA90细胞在允许温度(33℃)时具有很高的pp60v-src激酶活性,远高于非允许温度(39℃),当从39℃转至33℃10分钟,激酶活性就已显著升高。同时运用3H-甘油掺入并结合板层析分离方法和酶活性测定,发现LA90细胞中DG含量和PKC活性在33℃条件下高于39℃,当由39℃转至33℃10分钟,细胞内DG含量和PKC活性均明显增加。我们进一步探讨了PKC活性与癌基因v-ser、p53基因表达的相关性,实验表明,PKC的激活剂TPA可刺激39℃条件下的LA90细胞中v-sre和p53基因表达,PKC选择性抑制剂H7可抑制33℃条件下LA90细胞中v-erc和p53基因表达。看来,pp60v-src可通过刺激磷脂酰肌醇(PI)代谢激活DG-PKC(diacylglycerol-proteinkinaseC)信使系统,后者通过某种途径调控v-src和p53等癌基因之表达。因此DG-PKC信使系统可能是pp60v-src转化细胞及被转化细胞维持转 相似文献
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猪脑组织提取液经SephadexG-50分子筛层析,S-SepharoseFastFlow阳离子交换柱层析及两次HPLC分离得到一分子量为12000,等电点PI7.1的多肽,并测定了其氨基酸组成和N末端部分序列:N-Phe-Lys-Gly-Phe-Pro-Asp-Asp/(Lys)-Lys/(Asp)-Asp-Tyr,给昆明小鼠脑室注射或尾静脉注射肽均能抑制吗啡引起的镇痛作用,其作用随着注射剂量的 相似文献
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本文利用pAmy413质粒通过定点诱变技术,在α-淀粉酶基因的287和291位分别引入1个G和C,代替原来的T和G,构建成质粒pAmy413B,使成熟的α-淀粉酶N-端(7)Leu(8)Met变为(7)Arg(8)Ile。pAmy413Lα-淀粉酶信号序列因引入1个多酶切点接头而比pAmy413的29个氨基酸增加了13个氨基酸,创造了1个新的信号肽酶I识别窗口Ala-Gln-Ala↓Ser,利用计算机对该信号肽进行了二级结构分析。这两株突变株产酶能力分别为野生株(pAmy413)的3%和36%;胞外α-淀粉酶的分子量同于野生株;末端分析显示,成熟酶第一个氨基酸为Ala,表明信号肽酶I在野生型识别窗口Ala-Ala-Ala↓Ala处切割。结果还表明,B.licheniformisα-淀粉酶在B.subtilis中分泌作用属共翻译转移模型 相似文献
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一种新型人肿瘤坏死因子突变体在大肠杆菌中的高效表达 总被引:10,自引:2,他引:8
采用多位点突变引物和PCR方法对合成的人肿瘤坏死因子进行了突变,通过这一突变,人肿瘤坏死因子的第二位精氨酸的密码子CGT被变为赖氨酸密码子AAA,将突变后的基因插入表达载体pSB-92的PL启动子下游得到重组质粒pSB-TNF-K2,并在大肠杆菌中进行表达。突变体[Lys2]hTNF-α的表达产率达到菌体内总蛋白质的60%以上,且为一可溶性蛋白质并易于纯化。同野生型hTNF-α相比,[Lys2]hTNF-α具有稍低的毒性,但对于某些人肿瘤细胞株表现出高于数十到数百倍的抑制活性. 相似文献
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为寻找新型有效的AⅡ拮抗剂,本实验应用细胞计数、 ̄3H-TdR掺入、逆转录─聚合酶链反应及放射免疫实验方法,研究了中药单体764-3对卒中易感型自发性高血压大鼠(SHRsp)及其对照(WKY大鼠)主动脉平滑肌细胞(AsMC)增殖的影响及其作用机制。结果表明:764-3可显著抑制ASMC增殖,并有剂量依赖性。20mg/L的764-3可极显著地抑制ASMC上AⅡ受体(AT_1)的mKNA表达(SHRsp下降76.3%,WKY大鼠下降61.6%),并可降低SHRspASMC内AⅡ含量(下降20%)。推测764-3对ASMC增殖的抑制作用可能部分地是由于降低了AT_1受体的基固表达引起。比较其对两种大鼠ASMC的抑制效率,发现它对SHRsp的ASMC的作用更强。 相似文献
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高温胁迫对根瘤菌Tn5在土壤中的存活及其表型表达的影响 总被引:4,自引:3,他引:1
研究了3株弗氏中华根瘤菌(Rhizobiumfredii)Tns突变株于适宜温度和高温胁迫两种条件下在土壤中的存活和Tns表型的表达.在适宜温度(28℃)条件下的灭菌和未灭菌土壤中的存活研究表明生物因素抑制了突变株和野生型的生长.但野生型和突变株的存活种群密度之间无显著差异(P=0.01).在高温胁迫(40℃)条件下,土壤中野生型和突变株的种群密度迅速下降,其中部分ON-2和ON-3细胞丢失了Tns表型,说明部分细菌的Tn5表型在高温胁迫条件下不能表达. 相似文献
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凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用Kunkel突变法,将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂(scu-PA)cDNA基因中编码Pro155—Lys158的片段定点突变,并将此突变的scu-PA(tscu-PA)的cDNA克隆到表达载体pCM-β-neo中,与pCM-dhfr共转染CHO/DHFR-细胞.获得的稳定表达株在无血清培养基中24h的表达量为620IU/106细胞.经锌离子螯合Sepharose亲和层析得到tscu-PA纯品.SDS-PAGE显示tscu-PA分子量为53kD左右,与预期的结果相符.tscu-PA是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活,但激活后也能转变为双链分子(tcu-PA).tscu-PA仍保持了scu-PA的血纤维蛋白亲和性.酶动力学研究表明,激活后的tscu-PA水解S2444的Km和Kcat值与高分子量尿激酶(HUK)相似.体外溶栓实验结果表明,tscu-PA可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块,对贫凝血酶的血凝块作用不大 相似文献
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乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒(HBV)变异株,其HBsAg主蛋白aa126发生Ile(ATT)到Ser(AGT)的取代。已知adr/ayr亚型HBsAg126位为Ile,而adw/ayw亚型HBsAg126位为Thr,表明HBsAg126Ser是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体HBsAg126Ser主蛋白aa120-aa130区段的二级结构与野生型adrHBVHBsAg126Ile相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响a抗原决定簇(a124-aa147)的抗原性。为了证实这一点,构建了突变S基因表达质粒,在SV40早期启动子的控制下进行抗原表达。利用HBsAg9肽(Thr-Ile126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗i单克隆抗体和9肽(Thr-Thr126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗t单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ser126突变蛋白对抗i单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗t单克隆抗体的反应性则与HBsAg126Thr接近。但用三种抗-a单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白HBsAg126 相似文献
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梧宁霉素产生菌诱变选育的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
以不吸水链霉菌(Sireptomycesahygroselcns)NS—23为出发菌株。菌种斜面孢子萌动后采用紫外线(UV)、硫酸二乙酯(DES)、秋水仙素及加底物等物理化学因子进行诱变处理,经两代连续处理,从UV、DES的复合处理中选育出一株产素较高的突变株UDA257-C-24,产素效价比出发菌株提高了291.72% 相似文献
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聚球藻7942高效泌氨突变种的获得及其泌氨、谷氨酰胺合成酶活性、光合和生长 总被引:3,自引:0,他引:3
将含有Anabaenasp.PCC7120反义glnA基因片段的穿梭表达质粒pDC-ATGS转化单细胞蓝藻聚球藻Syne-chococcus sp.PCC7942,通过同源重组,外源DNA定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Synechococcus sp.7942突变种。将此突变种固定化在聚氨脂泡沫中后,定量测定其谷氨酰胺合成酶(GS)活性。结果表明,固定化后的突变藻培养9d后泌氨活性比自由生活的野生藻高156倍,GS活性降低73.6%;其生长速度与同条件下野生藻相近,77K荧光光谱表明突变种固定化后光系统Ⅱ活性提高44%。 相似文献
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地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及酶学性质 总被引:10,自引:1,他引:9
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)NK-27菌株发酵产生的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)经硫酸铵盐析沉淀,两次DEAE纤维素和Sephadex G-100离子交换柱层析以及制备PAGE等步骤,获得了凝胶电泳均一的样品。用SDS-凝胶电泳测得纯化后的β-甘露聚糖酶分子量为26kD,用凝胶聚焦电泳测得等电点P1为5.0。酶反应的最适pH为9.0,最适温度为60℃,稳 相似文献
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尿激酶原,即单链尿激酶(scu-PA)是双链尿激酶(tcu-PA)的前体,属于丝氨酸蛋白酶家族,但其内在酶活性高于一般的丝氨酸蛋白酶原。广泛存在于丝氨酸蛋白酶原家族中的Asp-His-Ser酶原三要素在尿激酶原中仅存Asp,为了恢复该结构,降低尿激酶原的内在酶活性,利用寡核苷酸介导的定点突变方法,将尿激酶原基因中的特定核苷酸改变,使Ala^175突变为Ser^175,同时Tyr^187突变为His 相似文献
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将大肠杆菌精氨酰tRNA合成酶(ArgRS)上Lys306用基因点突变的方法分别变为Ala和Arg的密码子;得到变种基因args306KA和args306KR。变种基因重组在pUC18上,转化到大肠杆菌TG1中,转化子中ArgRS及其变种ArgRS306KA和ArgRS306KR所表达的蛋白量至少为TG1表达ArgRS蛋白量的100倍。细胞粗抽提液中ArgRS的比活TG1、转化子pUC18-args、pUC18-args306KA和pUC18-args306KR分别为1.65、210、1.8和38单位/毫克。结果表明ArsRS的Lys306为Ala取代使活力完全丧失;若被Arg取代,则活力丧失80%以上。Lys306为ArgRS活力所必需。 相似文献
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枯草杆菌(Bacillus subtilis)产果胶酶的研究:Ⅰ.菌种选育,鉴定 … 总被引:7,自引:2,他引:5
分离到1株高产果胶酶菌株,经形态,生理以及生化指标鉴定,确认为枯草杆菌(Bacillus subtilis)并命名为枯草杆菌18。发酵液用90%硫酸铵沉淀,透析后的粗酶经CM-52柱层析,收集酶峰,再过ShephadexG-100得到部分纯化酶。该酶最适PH9.0,在PH9-11稳定,最适反应温度60℃,50℃加热50min保存60%酶活,60℃加热50min酶活则保存10%,酶的等电点(pI)4 相似文献
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经SephadexG-75凝胶过滤,QAE-SephadexA-50和CM-SephadexC-25离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮(Dienagkistrodonacutus)蛇毒中纯化出两个出血毒素(DaHT-1和DaHT-2).SDS-PAGE测得分子量均为23.5kD,IEF-PAGE测得等电点分别为5.6和5.2,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸(Asx,Glx)分别占23%和24%,DaHT-1和DaHT-2的最小出血剂量(MHD)分别为0.5μg和0.8μg。都具蛋白水解酶活性,无对TAME,BAEE的水解活性和PLA2酶活性.两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关.DaHT-1和DaHT-2的最适温度分别为35℃和40℃,最适pH为6-9,对热均不稳定,温度高于60℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含0.5mol的Zn,1mol的Ca,较多的Na、K、Mg,不含Co。 相似文献
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天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关. 相似文献
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溶菌酶通过降解细菌细胞壁的肽聚糖裂解细菌,利用此特性,构建温度敏感的内源裂解系统,达到高效释放和回收重组蛋白的目的。构建了温度敏感的T4溶菌酶基因表达质粒pSC-lys(pSC101复制子)和p15A-lys(p15A复制子),质粒与工程菌构成了新型内源裂解系统,系统可以与高拷贝复制子(如pMB1,ColE1)的重组蛋白表达擀粒兼容。结果表明,裂解系统的量适裂解条件由三个要素构成:pSC-lys- 相似文献
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将含有Anabaenasp.PC7120反义glnA基因片段的穿梭表达质粒pDC-ATGS转化单细胞蓝藻聚球藻Syne-chococcussp.PCC7942,通过同源重组,外源DNA定位整合到染色体上。经过抗菌素筛选,获得一种高效泌氨的Synechococcussp.7942突变种。 相似文献