琼脂糖平板制备聚焦电泳

在现有的各种蛋白质、多肽的分析方法中,等电聚焦的高分辨率是十分突出的。但以聚焦电泳来进行制备分离的却并不多,主要原因是缺乏比较实用的方法。我们在对胸腺素组分五做进一步提纯的研究中,建立了琼脂糖平板制备聚焦电泳。据我们的经验,这种方法切实可行,效果良好。一、材料、装置和方法 1、琼脂糖平板的制作将一张面积略大于所要制备的琼脂糖平板的亲水性聚酯膜平放在水平玻璃板上,另外从     

琼脂糖电内渗对电泳的影响

用电内渗不同(0、0.03、0.08、0.20mr)的琼脂糖制成凝胶或电极缓冲液凝胶条,观察对电泳行为的影响.结果表明等电聚焦电泳必须使用无电内渗琼脂糖.不同电内渗的琼脂糖制成的电极缓冲液凝胶条对SDS电泳无显著影响,但对常规聚丙烯酰胺凝胶电泳有不同程度的影响,电内渗越高,越不利于电泳的进行.     

琼脂糖平板制备聚焦电泳法进一步提纯胸腺素组分五

用琼脂糖平板等电聚焦电泳法,由胸腺素组分五中分离出三种在聚焦电泳谱上是单一谱线的多肽成份——CP1、CP2和CP3,等电点分别为4.3、4.9和5.6。测定了这些多肽对脐带血中淋巴细胞形成羊红细胞玫瑰花的影响。与对照相比,CP1(2微克/0.6毫升),和CP3(0.2-2微克/毫升)分别在统计学上呈显著和非常显著差异。在相同测定条件下,这三种多肽成份的活性均高于化学合成的胸腺多肽——胸腺素α_1。     

一种改进的超薄聚丙烯酰胺等电聚焦电泳实验

目的:介绍一种自制、简易、高效的平板微型聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳方法。方法:将载玻片黏合作为制胶模具,剪滤纸制成上样芯子进行等电聚焦电泳。结果:电泳条带清楚,样品容量大,电泳时间短,操作性强。结论:此方法简单、有效、实用,所需凝胶量少,节约成本,值得推广。     

可同时作10块聚丙烯酰胺凝胶平板电泳的潜水式电泳槽

用凝胶平板电泳分析多个样品时,必须保证各板电泳条件严格一致.因此,最好是在同一电泳槽中做许多块平板的同时电泳.Anderson等的多重平板电泳装置较好地解决了这一问题,但要使用大量铂丝,而且结构复杂. 我们结合自己的条件,设计制作了一台大型潜水式电泳槽,结构比Anderson等人所制做的装置简单得多,成本也低,而效果令人满意. 电泳槽结构见图1.电极板是将电解用高     

箭毒木种子蛋白质样品制备及双向电泳改良方法

建立箭毒木（Antiaris toxicaria）种子总蛋白的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行分析的双向电泳条件。通过各种条件的优化与组合,建立了以TCA-丙酮为基础的Tris—HCl提取法提取总蛋白,第1向电泳为固相pH梯度等电聚焦,第2向电泳为垂直平板SDS-PAGE的双向电泳体系。通过对样品制备、样品溶解、等电聚焦电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳以及染色方法等关键步骤进行分析,获得了满意的双向电泳图谱。在探索适合箭毒木种子蛋白质组学研究双向电泳方法中,比较了三氯乙酸-丙酮沉淀法、和Tris—HCl法,以及对双向电泳过程中的关键步骤的改良,认为Tris—HCl法为最适方法,所得图谱背景清晰,蛋白质信息量最大,为箭毒木属植物的差异蛋白质组学的后续研究打下了坚实的基础。     

高纯度T4DNA连接酶的简便快速纯化

我们采用简便、快速、重复性好的肝素-琼脂糖和蓝色葡聚糖-琼脂糖柱两次亲和层析方法,纯化得到了高纯度的T4-DNA连接酶。纯化了近690倍,比活高达5900单位/毫克蛋白。没有检测到脱氧核糖核酸酶的污染。聚丙烯酰胺-S.D.S.电泳显示清晰的一条蛋白带。     

高纯度T4DNA连接酶的简便快速纯化

我们采用简便、快速、重复性好的肝素-琼脂糖和蓝色葡聚糖-琼脂糖柱两次亲和层析方法,纯化得到了高纯度的T4-DNA 连接酶。纯化了近690倍,比活高达5900单位/毫克蛋白。没有检测到脱氧核糖核酸酶的污染。聚丙烯酰胺-S.D.S.电泳显示清晰的一条蛋白带。     

一种简便经济的薄层凝胶电泳保存方法——滤纸转移自干法

在分析性聚丙烯酰胺凝胶电泳特别是平板等电聚焦电泳中,薄层凝胶越来越被广泛采用,它有节省试剂、加样量少、电泳时间短、分辨率高及冷却效果好等优点。分析者都希望能将电泳染色后的凝胶理想地保存下来,目前所采用的方法均是直接将凝胶干燥在玻璃板或凝胶支持膜上(由于凝胶太薄不能转移),或者使用专用的透明保存膜,有时还要用真空干燥器干燥。     

一种经济实用的目标DNA片段回收法

介绍了一种经济、实用 ,不需任何特殊设备和试剂的从普通琼脂糖胶中回收目标DNA的新方法。首先用普通琼脂糖电泳使PCR产物分离 ,在长波长紫外灯下切割目标带胶块 ,然后制备一块新胶 ,插上两把相同的大齿梳子 ,形成“加样孔”和“回收孔”。将胶块置于“加样孔”后 ,进行二次电泳 ,并在紫外下时时监测 ,待目标带进入“回收孔”时 ,吸出DNA溶液 ,经无水乙醇沉淀后 ,可用于PCR扩增、探针制备等研究     

哺乳类基因工程的一些实验操作 实验4 琼脂糖凝胶电泳

一、琼脂箱凝胶的制备 1．电泳槽与点样孔梳的选择进行琼脂糖凝胶 电泳的电泳槽通常有水平板型和垂直板型两种。这里 我们选择较简便，应用最广的平板型电泳槽。点样孔 杭可根据样品数目、点样量等作出选择。对于一定量 的样品来说．，宽而薄的梳子可产生较细而平直的带，适 合于酶切图谱的分析等，较狭的梳子可增加待测样品 检出的灵敏度，适合于印迹杂交检测哺乳类基因组中 单拷贝基因或DNA样品的量较少等情况。点样孔梳 选定后，再根据凝胶的厚度，就可算出每一点样孔中可 以加入的样品体积。     

回收凝胶中蛋白样品的电泳方法

近年来聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄电点聚焦电泳已成为分析和纯化蛋白质的主要手段之一.从凝胶中回收蛋白样品的方法很多,我们参考了其中Otto和Strabfors等人的方法并加以改进,经过了一些摸索,建立了一种从凝胶中回收蛋白样品的电泳方法.此法稳定可靠,简易快速,回收率高,值得推广. 材料与方法 1.圆盘电泳玻管(10cm×0.5cm),胶浓     

应用电泳滴定曲线预测离子交换层析法的最佳pH条件

电泳滴定曲线(Electrophoretic TitrationCurve,ETC)是近年引人注目的一项新技术.它组合等电聚焦-电泳技术进行制备,即在含有两性电解质的聚丙烯酰胺(PAA)胶板上,经预聚焦形成pH梯度后,胶板转90度再经一次电泳,使样品蛋白质按其表面电荷的性质和密度在pH梯度中迁移泳动形成ETC. ETC的分辨力高,可用于蛋白质的纯度检测,包括单一氨基酸或蛋白质突变体;用于蛋白质表面电荷特性和等电点的检测;用于选择各     

核酸染料Genefinder使用方法的比较

目的:使用核酸染料Genefinder检测琼脂糖凝胶中的核酸,通过比较预染样品法、胶内染色法和后染法三种染色方法的染色效果,了解该染料的染色特性,以期找到性能稳定,染色效果好的染色方法.方法:在琼脂糖凝胶电泳中,以不同的染色方法使用核酸染料Genefinder进行染色,对染色结果进行比较分析.结果:使用电泳后染色方法染色效果较好,胶内染色法次之,预染样品法效果最差.结论:核酸染料Genefinder会干扰DNA的迁移效率,因此,使用Genefinder进行电泳后染色是一种较好的染色方法.     

双水相电泳分离蛋白质的研究

近几年来,随着生物技术的迅速发展,制备型电泳技术的研究得到了重视。然而由于技术上的原因,大规模的制备型电泳技术的研究还未能取得突破。阻碍电泳放大的一个主要问题是由于电加热作用而导致的热对流对电泳分离的破坏。为解决这一问题,人们提出了许多方法。例如,在太空的微重力环境下进行电泳,应力稳定自由流动电泳,循环等电聚焦和区带电泳,色谱电泳和等电膜等电聚焦等。这些方法在电泳放大上都取得了一定的进展,但各有其局限性。最近,Clark提出利用双水相的液液界面阻止热对流的设想,为开发大规模的制备型电泳技术开辟了一条新途径、Raghava Rao等在两种双水相体系上施加电场后成倍地缩短了分相时间。Levine和Bier采用U型管电泳装置研究了双水相体系中血红蛋白的电泳迁移率,观测到界面有阻滞作用。Clark在柱型电泳装置中进行了一组双水相萃取肌红蛋白的简单实验。在10mA的恒电流下电泳40min之后,肌红蛋白的分配系数为7.5,而当电场反向后,分配系数变为0.04,界面阻力并不显著,两者结论并不一致。     

蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的条件优化

目的:建立一种以琼脂糖修饰的玻片为载体的蛋白质微阵列制备的优化方法,比较琼脂糖修饰玻片和醛基修饰玻片及氨基修饰玻片对蛋白质固定效率的优劣。方法:将羊IgG固定在载体表面,经过洗涤、封闭,再加入Cy3标记的兔抗羊IgG,孵育,洗涤后用共聚焦激光扫描仪获取图像,检测各点的荧光强度,根据荧光强度确定最佳琼脂糖浓度,最佳NaIO4浓度,最佳固定时间以及封闭时间等实验条件。结果:琼脂糖浓度为1.2％、NaIO4浓度为20mmol／L、固定时间为1h、孵育时间为45min时,蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高。在固定的抗体浓度相同的情况下,琼脂糖修饰玻片荧光强度是醛基修饰玻片的2.6倍,是氨基修饰玻片的9倍。结论:确立了蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的优化条件,用该优化条件制备的琼脂糖玻片更适合用于蛋白质微阵列载体。     

琼脂糖凝胶电泳

Ⅰ琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶电泳是在卧式电泳装置上进行的,因为:(1)它为低浓度的琼脂糖凝胶提供了较好的支持体系,(2)在电泳过程中较少发生扭曲,(3)所得的DNA带比较直。最容易操作的凝胶体系,是将琼脂糖凝胶完全浸没在电泳缓冲液之下约1毫米     

用凝胶电泳发现肝素与染料之间的相互作用

目的:观察肝素与23种染料之间的相互作用.方法:利用淀粉琼脂糖凝胶电泳及聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察染料加肝素后电泳行为的变化.结果:淀粉琼脂糖凝胶电泳中染料加肝素后多数结果是泳速变慢,有一些留在原点,也有前移、后退者.二氯荧光素、荧光红、荧光素、甲酚红、苯胺蓝、溴酚蓝、茜素红S、胭脂红、亮绿、氨基黑10B、丽春红G、曙红、苯胺黑、氯酚红加肝素后泳速变慢.亚甲蓝、灿烂甲酚蓝、甲基紫加肝素后电泳留在原点.刚果红、洋红加肝素后电泳变化不明显.四氯荧光素、氯化硝基四氮唑蓝加肝素后电泳荧光看不清.聚丙烯酰胺凝胶电泳中溴酚蓝加入肝素后泳速明显变慢,随着肝素量增加溴酚兰的泳速加快.与淀粉琼脂糖凝胶电泳结果一致,但它的电泳结果更明显.结论:本次所研究的23种染料,几乎都能与肝素发生相互作用,给它们的进一步深入研究打下基础.     

用琼脂糖凝胶制备电泳——冻融法纯化质粒DNA

随着基因工程研究的不断发展,DNA做为一种实验材料要求纯化方法更加简便,质量更高。目前关于质粒DNA的纯化方法已有许多报道。国外多采用氯化铯密度梯度离心法,国内则限于条件,很少应用此法。我们建立了琼脂糖制备电泳——冻融法,以纯化质粒DNA及DNA的酶切片段。方法简便易行,而且效果良好。     

卷柏总蛋白质提取方法及双向电泳条件的建立

目的:建立复苏植物——卷柏总蛋白质的提取方法,以及可以对其蛋白质组进行阵列分离的双向电泳条件。方法:通过多种条件的组合与优化,建立了以物理和化学2种方法充分裂解植物组织细胞,并采用低温操作、加入PVP等去除植物组织中大量的酚类物质,最后离心去除不溶性杂质的卷柏蛋白质组双向电泳(2-DE)样品制备方法。第1向电泳为固相pH梯度等电聚焦,第2向电泳为垂直平板SDS-PAGE。结果:通过对样品制备、蛋白定量、第1向和第2向电泳、染色方法等各实验环节进行控制和优化,凝胶经考马斯亮蓝染色后,可分辨蛋白质斑点数约600个。结论:建立了卷柏总蛋白质的提取方法及蛋白质组双向电泳技术,为后续研究卷柏在干旱胁迫下的差异表达奠定了基础。