一种用于PCR模板制备的电泳产物简易回收方法

为了探索一种简便、有效而且能从琼脂糖凝胶中大量回收用于第2次PCR扩增的DNA电泳条带的方法,采用刀片切胶法和牙签插胶法从琼脂糖中回收DNA,并进行了两种方法的比较．结果显示牙签插胶法回收的DNA用作第2次PCR的模板,获得了清晰、稳定的PCR产物电泳条带,用该法成功地制备了一批DNA微阵列探针．由此可见牙签插胶法是一种简便、快速、有效的用于PCR模板的DNA琼脂糖凝胶回收法．     

利用机油提高琼脂糖凝胶中DNA片段的回收率

目的:发展一种简单快速经济的回收琼脂糖凝胶中DNA的方法.方法:将切的琼脂糖凝胶胶块放入嵌套Eppendorf管中捣碎,加入50μL机油,室温下12 000r/min离心5min,取大Eppendorf管中收集的液体跑胶检验,凝皎上包括代表100bp～2000bp不同大小DNA分子回收率的分子量标准DL2000.结果:DNA回收率可由加机油前的约35%提高为加机油后的45%-90%,回收效率的波动主要取决于DNA片段的大小、切下的含有DNA的胶块的大小及操作者的熟练程度.结论:该方法快速、简便、经济,具有良好的重复性与特异性,比许多国产的试剂盒更可靠.     

实验2 回收DNA限制性酶切片段

一、琼脂糖凝胶电泳洗脱回收 1.DNA经限制性内切酶消化后,琼脂糖凝胶电泳。在紫外灯下检测确定需要回收的DNA条带,用刀片将含此条带的凝胶切下。 2.透析袋里装满电泳缓冲液,将切下的凝胶条块装入透析袋,挤出多余的缓冲液,袋里只留下少量缓冲液且无气泡。 3.让透析袋里的凝胶切断面同电流方向垂直。透     

从琼脂糖凝胶中高效回收DNA技术的探讨

用两只离心管制成的凝胶过滤装置,从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简易方法。它依次包括以下步骤：凝胶过滤装置的制作、凝胶切割、凝胶低温冷冻、低温高速离心、ddH20洗胶、DNA纯化和回收效果检测等。用此方法回收的DNA片段产率高、质量纯,可直接用于分子生物学实验的后续操作,如载体连接、PCR模板获得、DNA探针制备、基因测序等。其优点是：DNA片段的回收率高（90％以上）,质量好;操作简便,耗时短;回收装置简单,成本低廉,可进行商品化开发。     

PCR-DGGE研究微生物种群中多条带产生原因分析

鸡肠道微生物菌群经PCR-DGGE分析,回收PCR-DGGE分析胶上的一条DNA片段,回收的DNA片段再重复进行2次PCR-DGGE分析,以及分别用PCR反复循环扩增和PCR高保真酶扩增后再进行DGGE分析等方法研究PCR-DGGE分析中多条带产生原因。结果显示PCR-DGGE分析中多条带产生原因可能是作PCR扩增模板的DNA混杂有少量其他DNA片段,多条带现象不易被消除。DGGE分析胶上的DNA片段测序时,将该DNA片段回收、PCR扩增后克隆,提取多个阳性克隆菌的质粒DNA片段,分别与其原目的DNA片段进行DGGE分析,在DGGE分析胶上选取与原目的DNA片段处于同一电泳位置的质粒DNA测序,提高测序的准确性。     

碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中DNA的探讨

采用碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中的DNA,达到分离纯化目的,回收后的DNA可用于重组、PCR等研究。首先将含有目的DNA的琼脂糖凝胶用Nal溶液融解,然后加入cacl2,和NaHCO3,生成CaCO3,沉淀,DNA与cac03形成复合物,通过离心分离出沉淀复合物,利用稀酸溶解沉淀,再用无水乙醇沉降,即可回收目标DNA。利用该方法回收了质粒、毛白杨和转基因羊基因组DNA,同收率为20％～50％,0D260／OD280,为1．7～19,最大回收了21kb片段,最小回收250bp片段,回收后的DNA样品进行了PCR扩增和限制性内切酶反应,PCR可以扩增出目的片段,同时限制性内切酶可以将回收后的DNA切开,表明DNA质量良好。利用碳酸钙沉淀法可以回收琼脂糖凝胶中的DNA,此法简单、易行,较为有效。     

用透析膜从琼脂糖胶中回收DNA片段

分离与回收DNA片段是基因操作的重要环节之一。本文介绍了一个用透析膜从琼脂糖胶中回收 DNA 片段的改进方法。利用本法回收DNA片段洗脱容易、节约时间、回收率在80％ 左右。回收的 DNA片段可用于酶切反应、连接反应和用缺口位移反应制备32p标记DNA探针。     

用普通琼脂糖代替低熔点胶回收DNA片段

为了建立一种直接从普通琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简便实用的方法,采用聚合酶链式反应扩增人P53基因外显子7、8和其间的内含子7序列,用普通琼脂糖凝胶电泳,直接从凝胶中切下产物带,用加热熔化法回收DNA;紫外比色法测定回收率;用测序法鉴定回收产物质量。并用QIAquick Spin纯化柱对照。结果表明,本法回收的产物质量明显优于用QIAquick Spin柱回收,本法回收的产物用于测序效果极佳,回收率达80％,用QIAquick Spin柱回收率不到20％,差异非常显著（P<0.01）。证明这种方法回收PCR产物质量可靠,能代替低熔点胶回收DNA,有较大的实用价值。 Abstract： In order to find a simple and efficient method to isolate single or double?strand DNA fragment amplified by polymerase chain reaction (PCR),we used PCR method to amplify exon 7,exon 8 and intron 7 of human P53 gene, electrophoresis to identify products,fusion and phenol-chlorofom extraction (FPC) to isolate specific DNA from agarose gel,ultraviolet colorimetry to deteminate collected rate,and direct sequencing to identify the quality of recollected DNA. A control test was also made by using QIAquick Spin Colum．The results showed that the quality of PCR products recollected by using FPC method was very good．When the recollected DNA was used in sequencing,no matter what was single or double-strand DNA,the sequence data was clear and even,with low noise．The recollected rate of using FPC,which was over 80 per cent, was higher than that of using colum (lessthan 20 per cent), there were statistical significances (P<0.01).In the control test, it had a little non-specific DNA in the collected products,and the sequencing experiment of using double-strand products was failure．All above mentioned suggested that general agarose gelis efficient in place of low melting-temperature for isolating DNA fragment．     

适合于胞质基因组扩增的红麻成熟叶片DNA提取改良方法

为了从成熟红麻叶片中提取高质量、高产量的基因组DNA,针对红麻成熟叶片中多糖、多酚含量较高的特性,利用改良CTAB法及改良SDS法分别提取红麻品种福红952成熟叶基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计测定进行DNA质量检测。结果表明:改良CTAB法提取的基因组DNA电泳时点样孔干净,条带整齐无拖带,OD260/OD280为1.9左右,产率可达1.84μg/g,其质量、产量都高于改良SDS法,所提取的DNA可用于红麻RAPD分子标记、线粒体DNA、叶绿体DNA通用引物PCR扩增。改良CTAB法是提取成熟红麻叶片DNA的有效方法,并且可用于红麻分子标记及胞质基因组学研究。     

酶切法鉴定质粒的亚型

商品化质粒小量抽提试剂盒制备的质粒DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测可见2条亮带,分别回收2条亮带,使用限制性内切酶分别消化,再用琼脂糖凝胶电泳检测,依据质粒的亚型(超螺旋、线性、开环)在以琼脂糖凝胶为介质的电场中的移动速度不同,鉴定出制备的质粒DNA电泳图中的2条亮带分别是超螺旋质粒和开环质粒。