广西眼镜蛇蛇毒磷脂酶A_2的分离纯化及其对HSC-T6细胞的作用

目的对广西眼镜蛇毒中磷脂酶A2(PLA2)进行分离纯化,测定其对肝星状细胞HSC-T6的增殖抑制作用。方法采用Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱结合的方法分离广西眼镜蛇粗毒,经平板法测定各峰的PLA2活性;经SDS-PAGE电泳鉴定终产物纯度并测定分子量,NanoLC-ESI-MS/MS鉴定其组分;CCK-8法测定PLA2对肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用,确定其凋亡的最小毒性浓度。结果 Sephadex G-50凝胶层析柱、CM-Sepharose CL-6B离子交换柱、Macro-prep High S预装柱层析法,得到第Ⅲ峰具PLA2活性,且达到电泳纯,经NanoLCESI-MS/MS鉴定其为PLA2,分子量约为14.06kD;PLA2在0~1μg/ml的浓度下对HSC-T6细胞具有一定的促增殖作用,2μg/ml时细胞数达到最大值,4~16μg/ml时对细胞生长有抑制作用,且随浓度增大细胞数降低。结论采用Sephadex G-50、CM-Sepharose CL-6B、Macro-prep High S预装柱结合的方法对广西眼镜蛇毒进行分离纯化,得到电泳纯且具PLA2活性的磷脂酶A2;广西眼镜蛇毒PLA2对肝星状细胞HSC-T6增殖有抑制作用,PLA2对HSC-T6细胞的最小毒性浓度为2μg/ml。     

应用电泳滴定曲线预测离子交换层析法的最佳pH条件

电泳滴定曲线(Electrophoretic TitrationCurve,ETC)是近年引人注目的一项新技术.它组合等电聚焦-电泳技术进行制备,即在含有两性电解质的聚丙烯酰胺(PAA)胶板上,经预聚焦形成pH梯度后,胶板转90度再经一次电泳,使样品蛋白质按其表面电荷的性质和密度在pH梯度中迁移泳动形成ETC. ETC的分辨力高,可用于蛋白质的纯度检测,包括单一氨基酸或蛋白质突变体;用于蛋白质表面电荷特性和等电点的检测;用于选择各     

五步蛇毒对小鼠免疫功能的影响

目的探索五步蛇毒对正常小鼠免疫功能的影响。方法将KM小鼠随机分为5组,分别为空白组、五步蛇毒安全范围内低剂量组(30 mg/kg)、五步蛇毒安全范围内中剂量组(60 mg/kg)、五步蛇毒安全范围内高剂量组(120 mg/kg)(以下简称五步蛇毒低、中、高剂量组)以及西洋参组(30 mg/kg),每组10只。各组小鼠每日定时灌胃1次,连续14天。观察小鼠的呼吸、精神状态等生命体征。取小鼠脾脏和胸腺组织称重后,计算小鼠脾脏、胸腺指数;制备脾细胞悬液,采用CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖率,碳粒廓清法检测小鼠吞噬系数α,中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率;同时采用二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应,检测小鼠耳廓肿胀度。结果小鼠的吞噬系数α在五步蛇毒高剂量组最高(5.56±0.46),高于其余四组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率(%)在五步蛇毒中剂量组和西洋参组中较高,分别为(119.07±19.31)%、(124.79±24.93)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。小鼠的B淋巴细胞增殖率(%)在五步蛇毒中剂量组和西洋参组中较高,分别为(105.95±14.59)%、(108.14±10.58)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。小鼠的T淋巴细胞增殖率(%)在五步蛇毒中、高剂量组中较高,分别为(119.30±20.07)%、(110.85±23.13)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。与空白组比较,五步蛇毒中、高剂量组和西洋参组均能显著提高小鼠的耳廓肿胀度,差异有统计学意义(均P<0.05)。与空白组比较,五步蛇毒各剂量组和西洋参组均能显著提高小鼠脾脏指数(均P<0.05)。与空白组比较,各实验组胸腺指数均无明显差异(均P>0.05)。结论口服低于120 mg/kg的五步蛇毒对正常小鼠的免疫功能具有一定的增强作用。     

广西眼镜蛇毒细胞毒素-2的分离纯化及其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的作用

目的通过层析法从广西眼镜蛇毒中分离得到电泳纯的细胞毒素-2(CTX-2),探索CTX-2对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖抑制作用。方法采用DEAE-Sepharose CL-6B阴离子交换层析、Spehadex G-50凝胶层析和Macro-prep High S阳离子交换层析结合的方法分离眼镜蛇毒粗毒;经SDS-PAGE电泳鉴定蛋白纯度;NanoLC-ESI-MS/MS质谱方法鉴定其组分并测定分子量;CCK-8法检测CTX-2对HSC-T6的增殖抑制作用,确定其最小有效浓度。结果眼镜蛇毒粗毒经分离纯化获得电泳纯的CTX-2,其分子量约为9.548 kD;不同浓度CTX-2作用于HSC-T6细胞24 h后,其增殖抑制作用随浓度增加而增大,呈量效关系,抑制增殖的最小有效浓度为8 mg/L,IC_(50)为11.52 mg/L。结论广西眼镜蛇毒粗毒经三步分离法得到电泳纯且具有高生物活性的CTX-2;广西眼镜蛇毒CTX-2可抑制HSC-T6细胞增殖,抑制作用呈量效关系。     

应用电泳滴定曲线预测离子交换层析法的最佳pH条件

电泳滴定曲线(Electrophoretic Titration Curve,ETC)是近年引人注目的一项新技术。它组合等电聚焦-电泳技术进行制备,即在含有两性电解质的聚丙烯酰胺(PAA)胶板上,经预聚焦形成pH梯度后,胶板转90度再经一次电泳,使样品蛋白质按其表面电荷的性质和密度在pH梯度中迁移泳动形成ETC。 ETC的分辨力高,可用于蛋白质的纯度检测,包括单一氨基酸或蛋白质突变体;用于蛋白质表面电荷特性和等电点的检测;用于选择各     

蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞分化超微结构的观察

目的观察蛇毒神经生长因子（Nerve growth factor,NGF）诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系（Pheo—chromocytoma cells。PC12）细胞分化后,细胞超微结构的改变。方法取对数生长期PC12细胞接种24孔板,设200ng／ml NGF实验组和对照组。培养72h,离心,分别收集细胞制成电镜标本,镜下观察各组细胞超微结构的改变。结果与对照组细胞相比,实验组细胞长出大量突起．并且胞质的细胞器逐渐消失．出现较多的脂滴。结论广西眼镜蛇毒神经生长因子可以促进PC12细胞增殖．并诱导其向神经样细胞分化,长出突触。