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利用15肽随机肽库确定抗TNF单抗表位的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
利用抗TNF的T5单抗作为筛选配基,对经DNA碱基组成分析证明具有良好随机性的15肽库进行亲和筛选.经过三轮筛选后,以硝酸纤维素膜斑点印迹法观察到良好的富集效果.由第三轮挑选出的31个克隆进行DNA测序,结果推出的优势克隆的短肽为CYRRPAGGLPGICSA等,竞争性ELISA实验证明带有以上短肽的噬菌体与TNF能竞争性地与T5单抗结合.该多肽可能是T5单抗所识别的模拟表位 相似文献
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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)已广泛用于蛋白质样品组分分析。通常的方法染色后蛋白质和肽即固定在凝胶上,尽管凝胶用SDS平衡后可对蛋白质进行洗脱或转移,但由于回收率低、耗时,同时回收的蛋白只能保存其抗原性而生物活性丧失,因而限制了SDS-PAGE在蛋白质回收领域中的应用。最近 相似文献
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数种造血调控因子已被提纯,并有一部分成功地进行了分子克隆,这对从理论上探索血细胞生成和破坏这一动态平衡的调控和机理,以及制取有临床治疗效果的生化制剂都会有很大的促进。对造血细胞分化和增殖的研究已开始进入分子生物学的水平。 相似文献
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几种微量测定蛋白质新方法的比较 总被引:5,自引:1,他引:4
蛋白质的微量定量测定法至今最广为使用的是Lowry改进的Folin酚法。但是Lowry法的操作较为麻烦,灵敏度有时也达不到要求,因此在最近的十年,许多研究者仍在继续寻找更为合用的新方法。我们在参考国外文献的基础上,有选择地建立了几种微量测定蛋白的新方法,并对它们的优缺点和适用范围加以比较。现将主要结果介绍如下。材料和方法一、Lowry法配制含有下列成分的混合溶液。(A)Na_2Wo_4·2H_2O 100克、NaMo_4·2H_2O 25克,加 相似文献
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在现有的各种蛋白质、多肽的分析方法中,等电聚焦的高分辨率是十分突出的.但以聚焦电泳来进行制备分离的却并不多,主要原因是缺乏比较实用的方法. 我们在对胸腺素组分五做进一步提纯的研究中,建立了琼脂糖平板制备聚焦电泳.据我们的经验,这种方法切实可行,效果良好. 一、材料、装置和方法 1.琼脂糖平板的制作将一张面积略大于所要制备的琼脂糖平板韵亲水性聚酯膜平放在水平玻璃板上,另外从 相似文献
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利用噬菌体随机肽库筛选抗TNF单抗表位的研究中,就抗体的选择、肽库富集的检测、筛选得到的表位多肽的验证及如何提高筛选的成功率等,进行了一些初步探索. 实验结果表明,由识别线性抗原位点的抗体较容易筛选到噬菌体呈现表位,具有较强中和活性的抗体,因多识别空间构型抗原位点而增加筛选难度. NC膜斑点印迹、ELISA及DNA测序均可作为筛选富集的检测方法. 用与天然抗原同源比较的方法及竞争性ELISA分析,可以帮助确定噬菌体呈现多肽是否是抗体表位. 相似文献
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用随机6肽库筛选HGVE2抗原表位 总被引:6,自引:0,他引:6
利用抗 HGV E2区的 3株单克隆抗体 M6、M1 3、M30作为筛选配基 ,对随机 6肽库进行亲和筛选 . 3轮筛选的投入产出比逐轮升高至 3.5× 1 0 -3、假阳性率逐轮降低至 0 .4% ,提示具有良好的富集效果 .从第 3轮随机挑出 1 2个克隆进行功能鉴定 ,结果表明 8个克隆与 M6抗体有较强的特异性结合力并有较好的竞争抑制作用 ,测序发现它们的外源肽具有核心序列 :WA( W/Y) WXH,该序列与 HGV同源性低 ;用外源肽与核心序列相似的噬菌体克隆 P6GC9做竞争抑制试验 ,约 3×1 0 10个噬菌体即可较好地抑制 M6单抗与 HGV抗原结合 .该多肽可能是 HGV E2区识别 M6单抗并具有一定功能的模拟表位 . 相似文献
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