MBP-特异性T细胞的生物学性状分析

目的：在C57BL／6小鼠建立MBP－特异性T细胞系,并探讨其生物学特性。方法：取MBP免疫的C57BL／6小鼠腹股间淋巴结的淋巴细胞在体外培养,用MBP及同系小鼠的脾细胞反复刺激,建立了MBP－特异性T淋巴细胞。以流式细胞仪检测其细胞表面标志,以ELISA双抗体夹心法检测MBP－特异性T细胞产生的IFN－γ及IL－4水平。结果：CD4^ T细胞占90％以上。MBP－特异性T细胞主要产生IFN－γ。结论：该T细胞系为CD4^ 、Th1类淋巴细胞;在C57BL／6小鼠体内存在能识别MBP的自身反应性T细胞。     

小鼠对天花粉蛋白体内及体外免疫应答的基本特点

C 57 BL/6 J小鼠在应用弗氏全佐剂或铝矾为佐剂结合天花粉蛋白免疫后都能引起抗原特异的IgE类抗体的反应以及其它Ig类抗体的反应;IgE的滴度和总的抗天花粉蛋白抗体的滴度的动态变化趋势基本一致,但并不完全同步。IgE类上升得较IgG等类抗体为慢,但上升的速度要快。脾和肠系膜淋巴结细胞分泌抗体的动态变化也和血清并不完全一致。天花粉蛋白在一定浓度下能抑制小鼠T淋巴细胞在体外的抗原特异的增殖反应和ConA反应。这抑制并不限于增殖过程的启动。补充外源性的IL-2也不能消除这抑制作用。天花粉蛋白加热变性后丧失了对小鼠淋巴细胞的毒性,并能引起经未变性天花粉蛋白体内致敏的小鼠的T淋巴细胞在体外的明显增殖。应用微量的天花粉蛋白为抗原,以及少量的无凝集素的conA条件培液等能在体外诱发致敏的B淋巴细胞产生二次抗体应答。     

PVAX-MAGE-1基因疫苗延缓小鼠肝癌细胞H22腹水瘤和实体瘤的生长

为观察重组基因疫苗PVAX-MAGE-1的抑瘤效应,构建黑色素瘤抗原-1(melanoma antigen-1,MAGE-1)真核基因表达载体--PVAX-MAGE-1.以重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,ELISA法检测表明,与对照鼠(PVAX-1和生理盐水注射小鼠)比较,免疫小鼠脾淋巴细胞上清液中的细胞因子IL-2和IFN-γ明显升高(P0.05);淋巴细胞-肿瘤细胞混合培养证明,免疫小鼠外周血CD8+T细胞对靶细胞的特异性杀伤作用明显增强(P0.05).体内实验证明,PVAX-MAGE-1免疫C57BL/6小鼠,可显著延缓移植性H22腹水瘤及实体瘤在小鼠体内的生长.实验结果提示,重组基因疫苗PVAX-MAGE-1有明显的延缓肿瘤生长的作用,其抑瘤作用与提高T淋巴细胞IL和IFN表达,增强对肿瘤杀伤作用直接相关.     

H-2Db四聚体的制备及其在检测LCMV特异性CD8+ T细胞中的应用

MHC四聚体技术是研究抗原特异性淋巴细胞应答的关键技术之一。为研究H-2Db基因型(如C57BL/6)小鼠的特异性CD8+ T细胞免疫应答, 需要建立H-2Db四聚体制备技术平台。首先以RT-PCR方法克隆H-2Db重链基因的cDNA, 进而构建H-2Db胞外域与生物素化酶BirA底物肽(BSP)融合蛋白的表达载体, 并在大肠杆菌中获得表达。在LCMV GP33-41抗原肽(KAVYNFATC, KAV)和人β2-微球蛋白存在时, 通过稀释法复性获得H-2Db/KAV单体。该单体经生物素化并纯化后与PE-链亲和素按4: 1的比例混合, 即形成四聚体。通过流式细胞术检测经KAV肽免疫的C57BL/6小鼠体内的LCMV特异性CD8+ T细胞的频率, 结果表明在外周血、引流淋巴结和脾脏中均可检测到一定频率的LCMV特异性CD8+ T细胞, 其中以对外周血标本染色的效果最佳。成功建立了小鼠H-2Db四聚体制备技术平台, 为监测及分析基于H-2Db基因型小鼠的实验性免疫治疗创造了条件。     

聚乙二醇作为乙型肝炎病毒DNA疫苗佐剂的体外试验

摘要：【目的】研究聚乙二醇作为佐剂是否能够增强HBV DNA疫苗体液和细胞免疫效果。【方法】我们将乙型肝炎病毒(HBV) DNA 疫苗（pVAX-S2）单独或PEG/pVAX-S2免疫C57BL/6小鼠,在最后一次免疫1 d检测抗-HBs IgG、T淋巴细胞增殖、细胞因子表达及体内细胞毒T淋巴细胞杀伤作用（CTL）等免疫学指标。【结果】结果表明,与仅免疫pVAX-S2比,PEG/ pVAX-S2能够增加免疫小鼠抗-HBs IgG水平; 混合免疫组的T淋巴细胞体外经乙肝表面抗原（HBsAg）刺激后,T淋巴细     

肿瘤细胞混合肽诱导特异性抗肿瘤免疫应答

采用细胞冻融、加热沉淀及酸处理等基本生化技术, 从肿瘤细胞中获取混合 肽; 将热休克蛋白70与肽体外结合, 观察热休克蛋白70-肽复合物对小鼠脾淋巴细胞的激活增殖作用以及增殖的淋巴细胞对瘤细胞的特异性杀伤作用, 并运用流式细胞仪分析增殖的淋巴细胞类型; 分别通过对腹腔和腿部肌肉接种了H22肝癌细胞的BALB/c小鼠进行热休克蛋白70-H22抗原肽复合物免疫注射, 观察小鼠肿瘤的抑制和荷瘤小鼠的生存期情况. 另外, 对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测. 结果显示, 获取的混合肽中含有肿瘤特异的抗原肽, 其经热休克蛋白提呈后, 体外可刺激淋巴细胞活化增殖, 增殖的淋巴细胞为T淋巴细胞, 对肿瘤细胞有特异性细胞毒效应, 体内对腹水型和实体瘤型肿瘤的生长均可产生显著抑制作用, 同时延长荷瘤小鼠的生存期, 并且这种体内免疫对小鼠肝肾功能不产生影响, 不会引发自身免疫反应.     

小鼠胸腺髓质上皮细胞系体内诱导胸腺细胞功能成熟

来源于BALB/c小鼠 (H-2^d)胸腺的髓质上皮细胞系MTEC1细胞表达H-2^d和I -A^d 分子 .为研究上皮细胞诱导胸腺细胞阳性选择及功能分化的能力 ,首先用γ 线照射C5 7BL/6J小鼠(H-2^d) ,再经静脉注射 (H-2^b×d)F1代骨髓细胞 ,制备 H-2^b×d→H-2^b)嵌合体 ,然后将MTEC1细胞注射到嵌合体胸腺内 .注射后 2个月 ,经HE染色显示 ,MTEC1细胞在嵌合体小鼠胸腺被膜下皮质区成簇存在 ,体外免疫学试验发现 ,嵌合体小鼠脾细胞含有抗原特异性H-2^d识别限制的杀伤T细胞 (CTL) ,IL -2产生T细胞及增殖应答T细胞 .在MLR试验中 ,嵌合体小鼠脾细胞显示对H-2^d 同种异型抗原的明显耐受 .从而证明MTEC1髓质上皮细胞能在胸腺微环境内诱导H-2^d识别限制的对特异抗原应答的T细胞发育及功能成熟 .由此提出在胸腺髓质区进行“2次胸腺选择”的假说 ,并讨论了其意义 .     

新型冠状病毒T细胞表位多肽不同免疫途径及佐剂对免疫应答的影响及长效免疫研究

很多研究表明T细胞免疫在抗新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染和预防重症死亡中起到关键作用。T细胞识别由抗原递呈细胞（Antigen-Presenting Cell,APC）递呈的与主要组织相容性复合体（Major Histocompatibility Complex,MHC）结合的短肽,因此新冠T细胞多肽疫苗成为研究重点之一。本研究利用三条C57BL/6J小鼠MHC II类分子限制性的新冠T细胞表位多肽分别结合目前已经在临床上市使用的佐剂：铝佐剂,5’cytosine-phosphateguanine 3’oligonucleotide(CpG-OND,以下简称CpG)佐剂以及铝加CpG佐剂制备成小鼠新冠T细胞多肽疫苗,通过皮下、肌肉、滴鼻（CpG佐剂组别）三种给药方式两次免疫C57BL/6J小鼠,在二免后14 d和6个月（CpG佐剂组别）后利用荧光免疫斑点实验（FluoroSpot）评价疫苗刺激小鼠脾脏淋巴细胞产生的辅助型T细胞1(T helper 1 cell,Th1)应答细胞因子—干扰素γ(Interferon-γ, IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosi...     

Hepal-6 RNA脉冲BMDCs瘤苗抗小鼠HCC免疫效应的研究

目的观察Hepal-6RNA脉冲BMDCs瘤苗能否激发有效的机体抗肿瘤免疫反应。方法用Hepal-6RNA脉冲骨髓分离培养5d的BMDCs,瘤苗的抗肿瘤效应通过C57BL/6J小鼠肝细胞癌(HCC)模型验证,即C57BL/6J小鼠皮下接种Hepal-6细胞8d后,成瘤小鼠分为2组:对照组(注射无血清RPMI-1640)和实验组(足垫部注射Hepal-6RNA脉冲BMDCs瘤苗),30d后处死小鼠并取淋巴结、脾和瘤体冰冻切片,进行CD4、CD8、CD25和Foxp3免疫组织化学染色。结果免疫组织化学检测显示,淋巴结、脾、肿瘤内有大量CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD25+T细胞和Foxp3+Tregs细胞浸润。与对照组小鼠比较,足垫部注射Hepal-6RNA脉冲BMDCs瘤苗的实验组小鼠淋巴结、脾、瘤内CD4+T细胞和CD8+T细胞浸润显著增加,CD25+T细胞和Foxp3+Tregs浸润明显减少。结论 Hepal-6RNA脉冲BMDCs瘤苗能下调小鼠HCC瘤内CD25+T细胞和Foxp3+Tregs浸润,促进CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖和活化,增强D4+T细胞、CD8+T细胞归巢至淋巴结和脾,具有抗瘤免疫效应。     

HIV结构蛋白与痘苗病毒共表达产物的免疫原性研究

目的 将艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,观察小鼠的免疫功能状态和细胞免疫应答.方法 将IFNα-2b基因片段插入到env基因的下游,经脂质体转染,筛选重组痘苗病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.用重组病毒vJ1 6env/IFNα-2b免疫小鼠,以生理盐水和野生型痘苗病毒作为对照,检测小鼠脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性;用流式细胞仪测定小鼠脾淋巴细胞CD4 、CD8T细胞计数与CTL.结果 与对照组比较,实验组脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性显著增高(P＜0.05);CD4T淋巴细胞计数和CTL活性也显著增高(P＜0.05);CD8T淋巴细胞计数呈增高趋势,但未达到显著意义的程度.结论 重组痘苗病毒v J16env/IFNα-2b能增强小鼠的免疫功能和诱导细胞免疫.     

荧光晕法在细胞染色质结构状态检测中的应用

荧光晕法是近年来发展起来的定量检测细胞染色质结构状态的方法,由于其简易、直观、灵敏、快速,已被广泛用于放射生物学及肿瘤细胞生物学研究中。我们依据文献报道建立了此法,并对其进行了改良,进一步优化了操作步骤。并用该法检测了两种相同来源(具有相似遗传背景)、具不同辐射敏感性的细胞株的染色质结构状态,发现辐射敏感株SX-9具有更松散的染色质结构,可能与两者的辐射敏感性差异有关,为研究染色质结构状态与辐射敏感性的关系提供了佐证。     

口服醋酸棉酚前后人精子体外受精能力及精核转变的细胞学观察

本文报道口服醋酸棉酚对人精子体外受精能力、原核及染色体形成的影响。结果表明,在口服醋酸棉酚前的9名男性精子对金黄地鼠卵的穿透率平均为62%。每日口服20mg醋酸棉酚15天后,精子对卵的穿透率下降至47%,30天后下降至24%,50天后下降至8%。即口服醋酸棉酚50天后达到了不再具有生殖能力的精子穿透率阈值(10%)以下。原核及染色体形成的观察表明,即使口服醋酸棉酚50天后,仍可见有完整原核的形成,并未见有明显的染色体畸变。综述上列结果,似乎表明口服醋酸棉酚虽可影响人精子对去除透明带金黄地鼠卵的穿透率,而进入卵内的精子仍可形成原核及染色体。因此,仅从成熟精子的生理功能而论,口服醋酸棉酚期间它似乎并不产生可察觉的致畸效应,这与醋酸棉酚对体细胞并无致畸作用的报道相一致。     

维生素C对视网膜色素上皮蓝光损伤保护作用的研究(简报)

维生素C为6碳多羟化合物,在化学反应中易失去电子,依次生成半脱氧抗坏血酸和脱氧抗坏血酸。因此,维生素C可作为自由基清除剂,能迅速与超氧阴离子、氢化氧基、过氧化氢、羟自由基反应,生成抗坏血酸自由基。蓝光作为一种短波长,靠近紫外线频段的光,具有能量高的特点,是自然界中导致视网膜色素上皮细胞损伤甚至凋亡的主要光线。本实验通过观察蓝光照射视网膜色素上皮,对其DNA的损伤产生光损伤作用,并比较加入维生素C后对这种光损伤的保护作用,以期探讨维生素C在     

大鼠肝脏细胞核糖皮质激素受体的测定

低浓度25nM以下的[~3H]皮质酮和大鼠肝脏细胞核的特异结台位点具有低容量、高亲和力,和甾体激素结合的特异性等特点,其特异结合量和由胞浆转位到核内的糖皮质激素——受体复合物的量平行,证明该结合位点是具有生理意义的糖皮质激素核受体。实验表明,用20nM的[~3H]皮质酮作一点分析是测定大鼠肝脏细胞核糖皮质激素受体的简便方法。用此法测定了13只成年雌性大鼠肝脏细胞核内的糖皮质激素受体,结果为34.5±4.5fmol/mg DNA。     

一些因子对七星瓢虫咽侧体活性的影响(英文)

七星瓢虫(Coccmella septimpunctata)为了适应环境的变化,通过咽侧体产生保幼激素的活动调节其生殖作用。为了探索内外因素对咽侧体活动的影响,应用放射化学法及免疫电泳测定了食物、卵巢发育、脑神经肽、保幼激素类似物对卵黄发生期成虫保幼激素生物合成及血淋巴中卵黄原蛋白含量的影响。结果表明咽侧体活性受上述各种因子的影响。咽侧体活性与卵黄原蛋白含量及卵母细胞生长密切相关,说明有反馈作用。食物的质与量影响着咽侧体活性的变化。低剂量外源保幼激素类似物处理成虫则可促使咽侧体活性的变化。脑分泌的神经肽(allatotropin)可活化咽侧体。这些结果表明雌瓢虫保幼激素的生产主要是受起源于脑的促咽侧体信号的调节作用。     

甲胎蛋白在体外对人肝癌细胞生长的影响

本文用MTT比色法观察了甲胎蛋白(AFP)在体外对人肝癌细胞生长的影响。结果表明,AFP能促进SMMC-7721人肝癌细胞的生长。当AFP与AFP抗体合用时,AFP抗体能减弱AFP对SMMC-7721细胞生长的促进作用;AFP抗体单用对此种细胞的生长亦有抑制作用。另一方面,在相同的实验条件下,AFP和AFP抗体对HL-60人白血病细胞的生长无明显影响;提示AFP的促生长作用具有一定的肿瘤细胞特异性,并非一种蛋白质对培养细胞的非特异性营养作用。此外,AFP亦能促进MCF-7人乳腺癌细胞的生长,AFP抗体对此种细胞的生长有抑制作用。由于MCF-7细胞存在功能性AFP受体,也能合成和分泌AFP。这就提示,人肝癌细胞中的AFP很可能与其受体特异性结合,产生促生长效应。确切机制尚待进一步阐明。     

预测鼻咽癌放射敏感性的CB微核法

本文介绍一种预测鼻咽癌放射敏感性的方法——CB微核法。以该法评介了鼻咽癌细胞株及20例鼻咽癌患者活检标本的放射敏感性,随着剂量增加,微核率也明显增加。CB微核的剂量-效应与克隆法的剂量效应呈高度负相关(r=-0.970)。活检标本微核实验表明,20例中8例反应较高,7例中等,5例反应偏 低;随访表明,反应偏低者中已有2例有复发倾向。由于CB微核法具有简便、快速、正确性较高等优点,适于临床应用。     

MEASUREMENTS OF PHYTOPLANKTON-PROTEIN CONTENT WITH THE HEATED BIURET-FOL1N ASSAY1,2

The heated biuret-Folin method for determining protein consistently measures 90% of the total nitrogen of filtered algae samples as protein-N without the need of mechanical disruption as long as the heating period in biuret is 100 min at 100 C. Data indicate this protein assay measures total protein on all species tried and for naturally occurring mixtures of species plus detritus. Dilute algal suspensions with as little as 0.05 μg-atom particulate protein N.liter ^-1 can he concentrated by fltration on glass fiber filters to 1.0 μg-atom particulate protein-N per filter, the optimal amount of sample for a 5 ml volume of biuret. The filtered algae samples can be stored for several weeks frozen before assaying, if necessary.     

紫云英根瘤菌结瘤因子的初步研究

最近的研究结果表明,豆科植物与根瘤菌的共生识别是一种双向的信号物质交换过程.首先是豆科植物的根或种子分泌类黄酮物质,诱导根瘤菌的结瘤基因(nod genes)产生结瘤因子(nod factors),分泌到胞外,为植物所接受,从而引发植物某些基因表达,细胞分化,细胞壁形成,最终导致根毛变形等一系列变化.已经测定了几种苜蓿根瘤菌(Rhizobium meliloti)和豌豆根瘤菌(R.leguminosarum bv.viciae)结瘤因子的分子结构式,它们均属于寡糖胺类物质,在没有根瘤菌存在的条件下,结瘤因子能独立地促使根毛发生变形,这是检测结瘤因子是否存在的重要手段,即根毛变形试验(Root hairdeformation assay,简称Had试验).高浓度的结瘤因子甚至能诱导植物产生空瘤,其组织结构与典型的根瘤相同.     

组建昆虫系统生物学的目的性和可行性探索

通过作在昆虫生物学方面近五十年研究工作的体会．提出了组建昆虫系统生物学的目的性和可行性探索．拟以昆虫分类序列目、科、属、种为单元,将一些已知种类的有关生物学环节．一一列叙．编成《中国农林昆虫系统生物学手册》．再以目、科、属、种为主体,探求彼此间在生物学各环节间的共性和个性,分别加以比较、归纳和分析．作为这—分支学科的蘸本。