IL-7和胸腺基质细胞系(MTEC5)诱导胸腺CD3- CD4- CD8- 细胞分化

胸腺细胞发育是细胞因子及胸腺细胞与胸腺基质细胞相互作用的结果.观察了IL-7及小鼠胸腺基质上皮细胞系MTEC5对成年小鼠CD3^- CD4^- CD8^- 胸腺细胞发育的影响.IL-7能促进TN细胞增殖.TN细胞经在IL-7条件下培养后表达CD3-TCR分子,其中20％～40％为TCRγδ⁺,60％～80％为TCRαβ⁺,但保持CD4^- CD8^- .该细胞获得对 Con A、抗CD3mAb及抗TCRmAb进行增殖应答的能力,抗CD28mAb能促进这种增殖应答,证明表达的CD3-TCR分子功能成熟.当在该系统中加入MTEC5,部分TN细胞转变为CD3⁺TCRβ⁺CD4⁺CD8^- 和CD3⁺TCRβ⁺CD4^- CD8⁺SP细胞,表明MTEC5可诱导TN细胞分化为表现型成熟的胸腺细胞.     

胸腺树突状细胞对胸腺细胞凋亡的促进作用

小鼠胸腺细胞在体外培养一定时间后自发出现凋亡,在与小鼠胸腺树突状细胞(MTSC4)共育后,其凋亡过程可被明显加速;与此相反,小鼠胸腺上皮细胞(MTECI)有抑制凋亡的作用.与MTSC4共育后的胸腺细胞中不仅CD4⁺CD8⁺双阳性细胞明显减小,而且CD4⁺CD8⁺单阳性细胞也减少.提示胸腺基质细胞可通过其对细胞凋亡的促进作用参与胸腺内的阴性选择,并提示阴性选择可能在胸腺髓质区仍在进行.     

胸腺T细胞由双阳到单阳分化发育的非线性模型

根据指令与随机相结合模型的理论,建立非线性数学模型,从理论上描述了胸腺内T细胞从双阳到单阳细胞的分化发育过程.发现随着胸腺基质细胞（TSCs）上MHCⅠ位点的增加,CD4⁺8⁺双阳胸腺细胞数量减少,CD4^-8⁺单阳胸腺细胞数增加;随着CD4⁺8⁺细胞与TSCs亲和力的增加,更多的双阳细胞进一步分化为单阳细胞,描述了胸腺基质细胞如何介导胸腺细胞从双阳向单阳分化发育的过程.     

戊肝病毒Th表位肽免疫可增强其载体蛋白的体液免疫应答

戊型肝炎病毒衣壳蛋白内包含一个强H-2^d限制性Th表位P34。以该表位肽免疫BALB/c鼠,其脾细胞能够在体外识别重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白,剔除实验表明应答细胞几乎完全是CD4⁺ T细胞,证明P34表位肽能有效诱导产生特异性Th细胞。以P34肽初免小鼠,再以包含该表位的重组戊型肝炎病毒抗原（E2）免疫,结果表明,10μg、 20μg E2免疫组在免疫后第1周即有部分小鼠产生抗体,到第3周所有小鼠均能够产生抗体;而对照肽P18初免的小鼠,以20μg E2加强免疫亦无法诱导小鼠产生抗体。这表明,Th表位肽P34初免诱导产生的Th细胞能够有效促进小鼠对携带该表位的载体蛋白的体液免疫应答。     

IL-1诱导小鼠胸腺上皮细胞(MTEC1)克隆分泌化学趋化因子

通过将本室所建小鼠胸腺上皮细胞系MTEC1进行克隆,获得由单一细胞来源的12个MTEC1-DW细胞克隆,检测各克隆分泌IL-1,IL-6及CF活性,分析诱导MTECl-DW细胞克隆分泌CF的因素.选择不分泌IL-1及CF的MTEC1-DW克隆,于细胞培养中加入外源IL-1或/及IL-6,分析其细胞培养液中CF活性;选择分泌高活性IL-1及CF的MTEC1-DW克隆,于细胞培养中加入抗IL-1mAb,阻断IL-1活性,分析其细胞培养液中CF活性.结果显示IL-1能诱导MTEC1-DW细胞克隆分泌CF,IL-6的这种作用则很微弱.     

抗腺苷酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

克隆了6株稳定分泌抗腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并鉴定或测定了其中3株细胞所分泌抗体的亚型和分子量.通过测定抗体和固相及均相抗原的结合能力,发现McAb3D3与固定化及溶液中腺苷酸激酶的亲和常数分别为8.4×10⁸和7.0×10~4(mol·L^-1)^-1,而McAb4D8与固定化及溶液中腺苷酸激酶的亲和常数分别为9.6×10⁸和3.9×10⁶(mol·L.¹)^-1McAb3D3和McAb4D8与不同存在形式抗原之间亲和常数如此大的差别,说明这2个抗体更适合与固定化腺苷酸激酶的结合.由于蛋白质分子常因吸附在酶标板上而发生部分变性,所以用间接ELISA方法筛选出的单克隆抗体McAb3D3和McAb4D8可能是针对部分变性腺苷酸激酶分子的.这2种抗腺苷酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定为我们进一步将其用于蛋白质折叠机制的研究奠定了基础.     

用脉冲辐解法研究海胆苷对DNA碱基损伤的修复作用

利用脉冲辐解技术研究了从中草药皱褶马先蒿(Pedicularis plicata Max-im)中提取的海胆苷(echinocoside)对胸腺嘧啶阴离子自由基的修复作用.海胆苷属于苯丙素苷的多酚类化合物.根据瞬态吸收谱分析,发现海胆苷能快速有效地对胸腺嘧啶阴离子自由基进行修复,其机理为电子自胸腺嘧啶阴离子自由基向海胆苷快速转移.通过详细的动力学计算,得出电子转移反应速率达1.45×10⁹dm³.·mol^-1·S^-1     

胸腺髓质上皮细胞干细胞对胸腺发育的影响

来源于胸腺双能祖细胞的胸腺髓质上皮细胞干细胞(medullary thymic epithelial cell stem cells, mTECSCs),在胸腺发育过程中的胚胎早期阶段既可能发生分化,又可能在胎儿出生后维持胸腺髓质上皮细胞(medullary thymic epithelial cells, mTECs)的再生,充分发挥组织干细胞的功能,确保终身外周血中央型记忆T细胞自身耐受。mTECSCs对胸腺的发育起着重要的作用和影响,得到很多学者的关注。现就mTECSCs对胸腺功能、生理性退化及胸腺衰老和免疫稳态等发育过程中的作用和影响作一概述,并探讨其在胸腺相关疾病治疗方面的潜在价值。     

Enhanced Ginsenoside Productivity by Combination of Ethephon and Methyl Jasmoante in Ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) Adventitious Root Cultures

Ethephon at 50 μM enhanced both root growth and ginsenoside accumulation in ginseng (Panax ginseng C.A. Meyer) adventitious root cultures, but at 100 μM it inhibited only ginsenoside accumulation. Ginsenoside productivity with 50 μM ethephon was the highest at 1.7 mg l⁻¹ d⁻¹ after 8 days of elicitation. However, elicitation with 50 μM ethephon and 100 μM methyl jasmonate (MJ) improved productivity (6.3 mg l⁻¹ d⁻¹) whereas elicitation with 100 μM MJ alone gave only 2.9 mg l⁻¹ d⁻¹.     

HIV-1复合多表位-p24嵌合基因重组鸡痘病毒疫苗的构建及小鼠免疫原性

将HIV-1 p24基因插入至人工设计的复合多表位基因MEG中, 获得嵌合基因MEGp24; 将MEGp24插入到转移载体pUTA2复合启动子ATI-P7.5×20下游, 构建出鸡痘病毒重组转移质粒; 经转染和BrdU加压筛选, 以基因组PCR和Western blot法筛选出重组病毒; 将重组病毒大量制备并纯化后, 分别于0, 14, 42天肌肉注射免疫BALB/c小鼠; 第3次免疫后一周, 采集小鼠全血与脾脏, 分离血清并无菌制备脾淋巴细胞, ELISA法检测小鼠血清HIV-1抗体、脾细胞培养上清中Th1类细胞因子IFN-α和IL-2的含量, 流式细胞仪测定CD4⁺, CD8⁺ T淋巴细胞亚类数量, 乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾特异性CTL杀伤活性. 结果表明, 重组病毒刺激小鼠产生HIV-1特异性抗体, 出现T细胞亚类数量增加, 产生针对HIV-1 H-2^d限制性CTL表位的特异性靶细胞杀伤作用, 同时免疫小鼠脾细胞在HIV-1抗原肽的刺激下分泌Th1类细胞因子的水平大幅增加. 研究提示多表位嵌合基因重组FPV疫苗具有良好的免疫原性, 可诱导小鼠产生HIV-1特异性细胞和体液免疫应答.     

小鼠胸腺上皮细胞系MTEC1产生30kD的MCP-1类趋化因子

髓质型小鼠胸腺上皮细胞系MTEC1自发分泌趋化因子(Chemokines),细胞培养上清先经CPG珠(Controlled-pore glass beads)初步浓缩纯化,再依次经肝素-Sepharose柱亲和层析、阳离子交换FPLC及RP-HPLC分离纯化,得到了一个30kD的蛋白质分子,对淋巴细胞和单核巨噬细胞均有趋化活性。此蛋白分子N端封闭,因而先经甲酸水解得到蛋白片段,分析了其中24个氨基酸的序列,发现其与小鼠MCP-1/JE(Monocyte Chemoattractant Pro-tein-1)完全相同。以上结果说明,MTEC1产生的是mMCP-1/JE类趋化因子。     

小鼠胸腺基质细胞系分泌的趋化因子的分析

利用Boyden小室法和FACS分析法,我们分析了五株小鼠胸腺基质细胞系(MTSC)培养上清液对中性粒细胞,单核巨噬细胞和淋巴细胞的化学趋化因子(Chemokines)活性,及定向迁移的淋巴细胞中B细胞、CD 4~ CD 8~-和CD4~-CD8~ T细胞的比例。结果显示,五株MTSC的培养上清液对上述靶细胞均有不同程度的趋化作用.MTSC细胞分泌趋化因子的情况可分为三类:1.MTEC 1和MTEC 2产生的Chemokine(s)对中性粒细胞和淋巴细胞的趋化作用相对较强;2.MTDC 4分泌的Chemokine(s)主要作用于单核巨噬细胞;3.MTEC 3和MTEC 5分泌的Chemokine(s)对多种类型的靶细胞,包括中性粒细胞、单核巨噬细胞和淋巴细胞,表现的趋化作用没有明显的强弱之分。MTSC-SN对B细胞的趋化活性普遍高于对T细胞的趋化活性,对CD 4~-CK 8~ T细胞的趋化活性高于对CD 4~ CD 8~-T细胞的趋化活性。MTSC-SN中趋化因子的分析,有利于新型chemokines的发现及其生物功能的阐明,并可进一步研究Chemok-ine(s)在T细胞发育中的作用。     

人胎胸腺基质细胞的免疫组织化学观察

用免疫组织化学法观察了六种单克隆抗体在１４例２１～３８周胎儿胸腺基质细胞中的反应。结果表明,三种ＭＨＣ－Ⅱ类抗原的表达有差异。ＨＬＡ－ＤＲ＋和ＨＬＡ－ＤＱ＋细胞多,主要分布于髓质,皮质中较少。ＨＬＡ－ＤＰ＋细胞少,几乎只见于髓质。抗表皮角蛋白抗体阳性的上皮细胞见于部分髓质与少数皮质上皮细胞,被膜及小叶间隔下上皮细胞和胸腺小体。Ｓ－１００＋的交错突细胞主要分布于髓质,皮质中较少。ＭＯ＋２的巨噬细胞见于整个胸腺实质,皮质深层最多。     

Soil N and C trace gas fluxes and microbial soil N turnover in a sessile oak (Quercus petraea (Matt.) Liebl.) forest in Hungary

During two intensive field campaigns in summer and autumn 2004 nitrogen (N₂O, NO/NO₂) and carbon (CO₂, CH₄) trace gas exchange between soil and the atmosphere was measured in a sessile oak (Quercus petraea (Matt.) Liebl.) forest in Hungary. The climate can be described as continental temperate. Fluxes were measured with a fully automatic measuring system allowing for high temporal resolution. Mean N₂O emission rates were 1.5 μg N m⁻² h⁻¹ in summer and 3.4 μg N m⁻² h⁻¹ in autumn, respectively. Also mean NO emission rates were higher in autumn (8.4 μg N m⁻² h⁻¹) as compared to summer (6.0 μg N m⁻² h⁻¹). However, as NO₂ deposition rates continuously exceeded NO emission rates (−9.7 μg N m⁻² h⁻¹ in summer and −18.3 μg N m⁻² h⁻¹ in autumn), the forest soil always acted as a net NO _x sink. The mean value of CO₂ fluxes showed only little seasonal differences between summer (81.1 mg C m⁻² h⁻¹) and autumn (74.2 mg C m⁻² h⁻¹) measurements, likewise CH₄uptake (summer: −52.6 μg C m⁻² h⁻¹; autumn: −56.5 μg C m⁻² h⁻¹). In addition, the microbial soil processes net/gross N mineralization, net/gross nitrification and heterotrophic soil respiration as well as inorganic soil nitrogen concentrations and N₂O/CH₄ soil air concentrations in different soil depths were determined. The respiratory quotient (ΔCO_{2 resp} ΔO_{2 resp}⁻¹) for the uppermost mineral soil, which is needed for the calculation of gross nitrification via the Barometric Process Separation (BaPS) technique, was 0.8978 ± 0.008. The mean value of gross nitrification rates showed only little seasonal differences between summer (0.99 μg N kg⁻¹ SDW d⁻¹) and autumn measurements (0.89 μg N kg⁻¹ SDW d⁻¹). Gross rates of N mineralization were highest in the organic layer (20.1–137.9 μg N kg⁻¹ SDW d⁻¹) and significantly lower in the uppermost mineral layer (1.3–2.9 μg N kg⁻¹ SDW d⁻¹). Only for the organic layer seasonality in gross N mineralization rates could be demonstrated, with highest mean values in autumn, most likely caused by fresh litter decomposition. Gross mineralization rates of the organic layer were positively correlated with N₂O emissions and negatively correlated with CH₄ uptake, whereas soil CO₂ emissions were positively correlated with heterotrophic respiration in the uppermost mineral soil layer. The most important abiotic factor influencing C and N trace gas fluxes was soil moisture, while the influence of soil temperature on trace gas exchange rates was high only in autumn.     

斜带石斑鱼胸腺的显微和超微结构

本文通过解剖及组织切片技术、光学显微镜、透射和扫描电子显微镜技术,对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)胸腺器官组织进行了观察研究。结果表明:斜带石斑鱼胸腺实质主要由胸腺细胞(淋巴细胞)和网状上皮细胞构成。鱼体从Ⅰ龄之后,其胸腺发生明显的变化,与幼鱼有所不同,主要是胸腺可明显区分为三个区域:胸腺外皮质区、内皮质区和髓质区。外皮质区主要由网状上皮细胞、黏液细胞、成纤维细胞和少量淋巴细胞构成,细胞排列疏松;内皮质区主要由密集的淋巴细胞和网状上皮细胞组成,以含有大量的淋巴细胞为特征;髓质区主要由淋巴细胞和较多的网状上皮细胞构成,总体特征是淋巴细胞数量比内皮质区的少,且细胞排列较疏松。外皮质区、内皮质区相当于高等脊椎动物的皮质;髓质区相当于高等脊椎动物的髓质。髓质区之下有结缔组织,在Ⅱ龄以上的成体出现胸腺小体(Hassall's corpuscles)或类似胸腺小体的结构,而且随着年龄的增加,胸腺外皮质区增厚,结缔组织增加,还表现在内皮质区和髓质区组织逐渐萎缩变薄,胸腺的细胞组成类型和淋巴细胞数量上有所变化等等。这些现象在Ⅱ龄鱼开始出现,即胸腺呈现退化迹象,在Ⅲ龄以上鱼体呈现明显的退化和萎缩。胸腺表面扫描电镜结果表明:其上皮细胞表面具有微嵴以及由微嵴组成的指纹状结构,有一些微孔分布。透射和断面扫描电镜的结果进一步表明:胸腺组织内的细胞成分复杂,除了淋巴细胞和网状上皮细胞外,还具有巨噬细胞、肥大细胞、肌样细胞、浆细胞、指状镶嵌细胞和纤维细胞等。     

不同光质与光周期对粗肋草生长、叶片色素和颜色的影响

为改良粗肋草叶色和优化粗肋草设施栽培体系,该研究以粗肋草品种‘吉利红''的水培苗为材料,设置6种光质(白光、R:B=1:1、R:B=1:2、R:B=2:1、R:B=1:3、R:B=3:1,其中R、B分别代表红光、蓝光)和2种光周期(8、12 h·d^-1)交叉培养,测定粗肋草的生长量、生物量、土壤和作物分析仪器开发(SPAD)值、花色素苷含量和叶片颜色参数(色相值a^*、色相值b^*、明度值L^*、色调角h^*),研究粗肋草对红蓝光质和光周期互作的响应。结果表明:(1)12 h·d^-1光周期更有利于粗肋草生物量的积累,其中LP11(R:B=1:3×12 h·d^-1)处理的粗肋草苗木干重、鲜重均为最高,最有利于植物生长及生物量积累; 其次是LP5(R:B=1:3×8 h·d^-1)处理。(2)相同光质条件下,8 h·d^-1光周期处理的粗肋草叶片SPAD值比12 h·d^-1光周期处理高,12 h·d^-1光周期处理的粗肋草叶片花色素苷含量高于8 h·d^-1光周期的处理,LP11处理叶片SPAD值最低,花色素苷含量最高。12 h·d^-1光周期培养的粗肋草叶片颜色参数a^*、b^*值比8 h·d^-1光周期高,h^*值比8 h·d^-1光周期低。(3)主成分分析结果表明,LP11处理在促进粗肋草生长及叶色改良方面效果最好。综上认为,12 h·d^-1光周期更有利于粗肋草的生长和叶片颜色变化,其中LP11处理为最佳光质和光周期组合。     

天然型调节性T细胞发育分化的研究进展

CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)对维持自身免疫耐受及调控免疫应答水平发挥非常重要的作用．Treg的缺失或紊乱导致如多发性硬化症、1型糖尿病等自身免疫性疾病的发生．研究发现,Treg在肿瘤免疫、感染免疫和移植免疫耐受中也发挥关键作用．根据来源不同,可将Treg分为胸腺来源的天然型Treg(natural Treg)和外周诱导型Treg(induced Treg)两群．天然型Treg(nTreg)是由胸腺发育分化成熟的,nTreg存在于胸腺CD4单阳性细胞中,表达CD4、CD25及叉头转录因子Foxp3,主要通过细胞与细胞之间直接接触发挥免疫抑制功能．研究表明,nTreg在胸腺中发育分化受到十分复杂的细胞、分子网络调控．胸腺微环境、T细胞受体、共刺激分子、IL-2等信号都可影响nTreg的发育分化．本文将主要对胸腺nTreg的发育分化过程及分子调控等方面进行综述．     

携带HCV核心蛋白原核表达质粒与真核表达质粒的减毒伤寒沙门菌诱导小鼠免疫应答之比较

丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白是丙肝疫苗的重要候选抗原,然而,该蛋白因具有免疫调控作用而影响免疫应答的诱导。构建了HCV核心蛋白的两种表达质粒,一种是体内激活型原核表达质粒pZW-C,另一种是真核表达质粒pCI-C。将该两种质粒转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,得到重组菌SL7207/pZW-C和SL7207/pCI-C,分别将重组菌口服接种小鼠,检测小鼠的免疫应答,结果发现：① SL7207/pCI-C免疫鼠的CD3⁺CD4⁺ T细胞持续降低,而SL7207/pZW-C免疫鼠的CD3⁺CD4⁺ T细胞无明显改变;② SL7207/pCI-C免疫只诱导低水平抗HCV核心蛋白抗体,加强免疫对抗体阳转率及抗体水平无明显影响,而SL7207/pZW-C免疫组所有小鼠均产生较高水平的抗核心蛋白抗体。③ SL7207/pCI-C免疫鼠脾细胞的体外增殖活性、细胞毒性T细胞活性以及加强免疫对细胞免疫应答的增强作用均明显不及SL7207/pZW-C免疫鼠。结果提示：携带真核表达质粒pCI-C的沙门菌因在小鼠细胞内表达天然形式（结构以及磷酸化修饰）的HCV核心蛋白,可能通过对T细胞的免疫抑制作用而弱化免疫应答。而以携带原核表达质粒pZW-C的沙门菌免疫可避免这一问题,并具有接种方便,成本低廉等优点,从而可望作为基于HCV核心蛋白为靶抗原的HCV疫苗的候选免疫方式。     

Photoautotrophic micropropagation of Spathiphyllum

In order to maximize yield, Spathiphyllum, an ornamental plant, was cultured in vitro in novel culture vessels termed Vitron. The best growth was obtained by culturing plantlets on sugar-free liquid medium under CO₂ enrichment (3 000 μmol mol⁻¹ 24 h⁻¹ d⁻¹) at a low photon flux density (PPFD of 45 μmol m⁻² s⁻¹), suggesting that the novel Vitron culture system is suitable for the photoautotrophic micropropagation of Spathiphyllum.     

人胸腺内交错突细胞的免疫组织化学研究

本文用免疫组织化学方法检测胎儿期,儿童以及成人胸腺内交错突细胞的分布和ＨＬＡＤＲ抗原的表达．结果表明：Ｓ－１００抗体能够清楚显示胸腺内交错突细胞,这些细胞主要分布在皮,髓质交界处和髓质内,在皮质内的交错突细胞大都单个存在,偶而看到交错突细胞成团存在．交错突细胞的周围,常见有淋巴细胞形成玫瑰花结．出生后随年龄的增长,交错突细胞逐渐减少。ＨＬＡ－ＤＲ抗体能与胸腺内多种细胞反应,如皮,髓质内上皮细胞,巨噬细胞和交错突细胞,但它们染色强度不等．交错突细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗体的阳性反应位于质膜和突起部,染色强阳性,巨噬细胞反应不尽一致一般多为阳性,胞质内未见有吞噬淋巴细胞碎片．上皮细胞染色一般由弱阳性到阳性,核阴性,仅有质膜呈阳性反应,有关ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的可能意义进行了讨论．