p38MAPK介导的胶质细胞iNOS的转录激活机制

丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)酶级联反应系统参与胶质细胞中iNOS的合成.通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶,MAPK激酶3(MKK3)和MAPK激酶6 (MKK6 )表达质粒,进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节iNOS基因在胶质细胞中的转录激活机制.MKK3或MKK6表达质粒与接有荧光素酶(luciferase ,Luc)的大鼠iNOS启动基因质粒(iNOS Luc)联合转染C6星形胶质细胞株引起iNOS Luc的激活,并且使细胞因子诱导的iNOSmRNA的表达增强.这两种效应都能够被p38MAPK抑制剂SB2 0 35 80所抑制.MKK3 6也可以诱导核因子κB(NFκB Luc)依赖的转录活性.这些分子水平的研究结果为p38MAPK信号级联传导途径在调节大鼠胶质细胞中iNOS基因转录激活中的重要作用,包括转录因子NFκB的作用提供了证据.通过阻断iNOS表达或NO的生成,抑制细胞炎症发生,为防治神经细胞炎症反应性疾病提供实验依据.     

H2S对大鼠心肌肥大与miRNA-133a和Ca2+/CaN/NFATc4信号通路的影响

目的：研究硫化氢（H₂S）对心肌细胞肥大的负性调控作用与miRNA-133a介导Ca²⁺/CaN/NFATc4信号通路的关系。方法：异丙肾上腺素（ISO）诱导体外培养的大鼠心肌细胞肥大模型;Leica图像分析软件测量心肌细胞表面积;qRT-PCR检测脑钠尿肽（BNP）、β-肌球蛋白重链（β-MHC）、H₂S合酶（CSE）、miRNA-133a和钙调神经磷酸酶（CaN） mRNA表达;Western blot检测CaN、活化T细胞核因子c4（NFATc4）蛋白表达;Elisa方法检测心肌细胞H₂S含量;激光共聚焦显微镜检测心肌细胞钙离子浓度;细胞免疫荧光检测NFATc4核转位变化。结果：①心肌细胞肥大时,CSE/H₂S水平、miRNA-133a mRNA表达均显著下降。应用NaHS预处理,能上调心肌细胞CSE/H₂S水平,增加H₂S含量和miRNA-133a mRNA表达,并明显抑制心肌细胞肥大。②心肌细胞肥大时,细胞内钙离子浓度明显增加,CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位明显增强;应用NaHS预处理能明显抑制ISO诱导的上述效应。③应用antagomir-133a能逆转H₂S抑制心肌细胞肥大的作用,使心肌细胞内钙离子浓度、CaN表达和NFATc4胞核蛋白表达增加,NFATc4核转位增强。结论：H₂S通过负性调控作用抑制心肌细胞肥大,该作用可能与H₂S上调miRNA-133a的表达,抑制其下游的Ca²⁺/CaN/NFATc4信号通路的激活有关。     

针灸联合逍遥散合半夏厚朴汤治疗肝郁脾虚型抑郁症患者伴胃肠功能紊乱的临床疗效

摘要 目的：探讨针灸联合逍遥散合半夏厚朴汤治疗肝郁脾虚型抑郁症患者伴胃肠功能紊乱的临床疗效。方法：选取我院2020年5月到2023年5月收治的80例抑郁症伴胃肠功能紊乱患者作为研究对象,中医证型均为肝郁脾虚型,分为观察组与对照组,40例。对照组患者采取逍遥散合半夏厚朴汤治疗,观察组在对照组基础上增加针灸治疗,对比两组患者临床疗效,分别在治疗前后应用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）、负性认知加工偏向问卷（NCPBQ）评价抑郁症状和负性认知情况,并对比治疗前后肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-6（IL-6）表达水平和胃动素（motilin,MTL）、生长抑素（SS）、胃泌素（GAS）相关血清肠胃激素表达水平,并采用世界卫生组织生活质量-100量表（WHOQOL-100）评估生活质量。结果：观察组治疗总有效率较对照组高（P＜0.05）;治疗前两组患者HAMD、NCPBQ评分对比无差异（P＞0.05）,治疗后两组患者均降低,且观察组较对照组低（P＜0.05）;治疗前两组患者TNF-α、CRP、IL-6相关炎症因子和MTL、SS、GAS相关胃肠激素水平对比无明显差异（P＞0.05）,治疗后两组患者TNF-α、CRP、IL-6、SS、GAS水平均降低,且观察组较对照组低,MTL水平升高,观察组较对照组高（P＜0.05）;两组患者治疗后生活质量相关评分均升高,且观察组较对照组高（P＜0.05）。结论：针灸联合逍遥散合半夏厚朴汤治疗肝郁脾虚型抑郁症伴胃肠功能紊乱疗效显著,可减轻患者抑郁情绪和负性认知,降低炎症反应,改善胃肠激素水平,提升患者生活质量。     

醒脑开窍针法联合颞三针治疗急性脑梗死的疗效及对患者生活质量、血流动力学的影响

摘要 目的：评价醒脑开窍针法联合颞三针治疗急性脑梗死（ACI）的疗效及对患者生活质量、血流动力学的影响。方法：选入2022年1月~2022年12月我院收治的ACI患者70例,根据治疗方法不同分为常规组（常规治疗）和联合组（常规治疗+醒脑开窍针+颞三针）,各35例。评价并比较两组的临床疗效、生活质量及血流动力学等指标。结果：联合组治疗总有效率94.29 %,显著高于常规组的74.29 %（P＜0.05）;与治疗前相比,两组治疗后NIHSS评分明显降低、BI和SS-QOL评分显著升高（P＜0.05）,而联合组降低/升高幅度更大,与常规组差异显著（P＜0.05）;两组治疗前脑血流动力学指标无明显差异（P＞0.05）,而治疗后,联合组大脑中动脉Vs、Vd、Vm明显高于常规组（P＜0.05）。结论：在常规治疗基础上应用醒脑开窍针联合颞三针,可有效提高ACI的临床疗效,增加大脑局部血流量,改善神经功能缺损症状,提高日常生活能力及生活质量。     

HIV结构蛋白与痘苗病毒共表达产物的免疫原性研究

目的 将艾滋病病毒外膜蛋白(env)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,观察小鼠的免疫功能状态和细胞免疫应答.方法 将IFNα-2b基因片段插入到env基因的下游,经脂质体转染,筛选重组痘苗病毒,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.用重组病毒vJ1 6env/IFNα-2b免疫小鼠,以生理盐水和野生型痘苗病毒作为对照,检测小鼠脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性;用流式细胞仪测定小鼠脾淋巴细胞CD4 、CD8T细胞计数与CTL.结果 与对照组比较,实验组脾淋巴细胞对ConA、LPS及IgG的反应性显著增高(P＜0.05);CD4T淋巴细胞计数和CTL活性也显著增高(P＜0.05);CD8T淋巴细胞计数呈增高趋势,但未达到显著意义的程度.结论 重组痘苗病毒v J16env/IFNα-2b能增强小鼠的免疫功能和诱导细胞免疫.     

离体大鼠心肌内质网应激模型构建条件的优化

目的探讨构建体外心肌内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）模型的方法及实验条件。方法应用Langendorff灌流装置制作大鼠心脏离体缺血/再灌注模型,采用PowerLab系统持续监测血流动力学参数,Western blot检测缺血（停止灌流）不同时间/再灌注120 min后心肌ERS标志性分子糖调节蛋白（GRP）78的表达,并检测C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测二者mRNA的表达;体外孵育心肌组织切片,分别应用不同浓度的衣霉素（tunicamycin,Tm）和二硫苏糖醇（dithiothreitol,DTT）处理3 h和6 h,Western-blot检测心肌GRP78及CHOP的表达。结果与对照组相比,离体灌注心脏缺血40 min/再灌注120 min时,心肌GRP78表达最高（P〈0.01）,CHOP蛋白、GRP78 mRNA及CHOP mRNA表达均明显升高（P〈0.01,P〈0.05和P〈0.05）,同时,各项血流动力学参数受损（均P〈0.01）;Tm 10μg/mL和DTT 2 mmol/L孵育心肌组织切片3 h时,GRP78表达较对照组显著升高（均P〈0.001）,CHOP表达亦均明显升高（P〈0.05和P〈0.01）。结论使用离体大鼠心脏缺血/再灌注和孵育心肌组织切片的方法,均可成功构建体外心肌ERS模型。     

多菌克牌止痒消炎剂抑菌效果观察

显著,并获得辽卫消证字[2009]第0004号(NO.Y.05-1).     

MicroRNA-1在心肌肥大中对L-型钙通道β2亚基的负性调控作用

目的:研究微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)在心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)的负性调控作用及机制。方法:应用异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;采用HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用数据库microCosm预测miR-1的靶基因;构建含Cavβ23’UTR报告基因质粒和miR-1瞬时共转染HEK293细胞,验证Cavβ2为miR-1靶基因;应用qRT-PCR或Western blot方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、miR-1和Cavβ2mRNA和蛋白表达水平;转染miR-1模拟物上调miR-1或应用Cavβ2RNAi干扰Cavβ2蛋白的表达,观察对心肌细胞肥大的影响。结果:①在ISO诱导的心肌细胞肥大中,miR-1表达显著下降;应用miR-1 mimic转染心肌细胞使miR-1表达上调,心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达均显著低于ISO组(P<0.05)。②网络数据库预测显示Cavβ2为miR-1的潜在靶点;将miR-1和含Cavβ23’UTR报告基因质粒共转染HEK293细胞,其萤光值显著降低(P<0.01)。转染miR-1 mimic使心肌细胞miR-1表达上调,可以明显抑制Cavβ2蛋白的表达。③在ISO诱导心肌细胞肥大中Cavβ2表达较对照组显著增加;应用RNAi技术下调Cavβ2表达可明显抑制心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加。结论:预测并验证L-型钙通道β2亚基为miR-1的靶基因。miR-1可能通过抑制其靶基因Cavβ2蛋白的表达,降低细胞内钙离子浓度,抑制心肌细胞肥大。