rNM23-H1/NDPK-A中试纯化工艺研究

为比较3种DEAE填料对rNM23-H1/NDPK-A的纯化效果,利用同一批中试发酵样品在相同的条件下进行离子交换层析,分别收集P0．2和P1．0两个洗脱峰。通过对洗脱峰中蛋白质含量、目标蛋白相对含量以及酶比活的测定,计算得出Matrex Cellufine A-200,DEAE Sephadex A-25,Macro-Prep DEAE Support三种填料相对应的NDPK－A得率及纯化倍数分别为74．5％、40．8％、92．6％、2．4、1．9、3．1倍。综合分析表明Macro-Prep DEAE Support填料对rNM23-H1/NDPK-A的纯化效果最好。     

灵芝EIM-40漆酶的分离纯化及酶学性质

采用冻干浓缩、（NH4）2S04盐析、HiTrapphenyl（FF）疏水层析和QSepharose FastFlow离子交换层析对灵芝EIM-40发酵液进行分离纯化,获得纯化漆酶,纯化倍数为14．6,回收率为5．3％。SDS-PAGE银染的结果为单一条带,相对分子质量约为6．53×104。以愈创木酚和2,2-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐（ABTS）为催化底物进行酶学性质研究,最适pH分别为4．8和4．5,最适温度分别为55和50℃,2种底物在pH4．0。5．0范围内,温度低于50℃时,酶的稳定性都很好。以愈创木酚为底物,Km=645．0umol／L;以ABTS为底物,Km=22．2txmol／L。Cu2＋对该酶起激活作用,Fe2＋、Ca2＋、Ba2＋则完全抑制酶的活性。     

短小芽孢杆菌2080碱性蛋白酶的纯化与性质

短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）2080碱性蛋白酶的发酵液经超滤、硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析得到了纯化的组分。SDS-PAGE电泳分析显示其分子量约为61kDa。酶学性质研究表明,该纯化酶的最适pH为10．5,最适温度为50℃。     

β—葡聚糖酶的分离纯化和特性研究

对里木霉所产β－葡聚糖酶粗酶液通过饱和硫酸铵沉淀、Sephadex G-100柱层析和DEAE－Sephadex A-50柱层析进行纯化,比活提高14．60倍,活力回收6．62％。酶特性研究表明,最适温度和pH分别为60℃和5．0,在pH低于5．0时酶较稳定,酶的热稳定性在60℃以下。Cu^2 、Mn^2 、Mg^2 、Fe^3 和K^ 对酶有抑制作用,Zn^2 、Ca^2 、Co^2 和Fe^2 有激活作用。     

海洋扩展青霉（Penicillium expansum）果胶酶的纯化及酶学性质研究

通过超滤、DEAE Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,对一株来自海洋的扩展青霉(Penicillium expansum)所产果胶酶进行分离纯化,得到电泳纯的果胶酶,经SDS-PAGE电泳显示单一条带,且果胶酶亚基的分子质量约为63.96 ku,纯化倍数为24.13,回收率为36.32%。酶学性质研究结果表明,该果胶酶的最适反应温度为50℃,最适p H值5.4,在p H值4.6~6.2比较稳定,Mg2+、Ca2+对果胶酶活力有明显激活作用,Cu2+有明显抑制作用,以果胶粉为底物的Vmax为393.56μg/(min·m L),Km为3.34 mg/m L。     

嗜热毛壳菌内切β-葡聚糖酶的分离纯化及特性

探讨了液体发酵嗜热毛壳菌（Chaetomium thermophile)产生的内切β－葡聚糖酶的分离纯化及特性。粗酶液经硫酸铵分级沉淀,DEAE－Seplharose Fast Flow阴离子层析,Pheny1-Sepha-rose疏水层析,Sephacry1 S-100分子筛层析等步骤便可获得凝胶电泳均一的内切β－葡聚糖酶,经12．5％SDS－PAGE和凝胶过滤层析法分离纯化酶蛋白的分子量约为67．8kD的69．8kD。该酶反应的最适温度和pH分别为60℃和4．0－4．5在pH5.0条件下,该酶在60℃下稳定：70℃保温1h后,仍保留30％的活性;在80摄氏度的半衰期为25min,金属离子内切β－葡聚糖酶的活性影响较大,其中Na^ 对酶有激活作用;Fe^2 ,Ag^ ,Cu^2 ,Ba^2 ,Zn^2 等对酶有抑制作用。该酶对结晶纤维素有没水解能力。     

M-26碱性木聚糖酶的分离纯化及酶学性质研究

从Bacillus pumilus M-26发酵液中分离纯化碱性木聚糖酶,进行酶学性质研究,同时制备工业用碱性木聚糖酶制剂。首先将M-26发酵液进行硫酸铵盐析,制备工业用碱性木聚糖酶干品;然后进行sephadexG-25层析脱盐和cellulose DE-52层析得以纯化。硫酸铵的饱和度50%,酶制剂的酶活可达9 000 IU/g,收率为85%;分离纯化使酶的比活为126.32 IU/mg蛋白,纯化倍数为19.89,酶的回收率12.83%;分子量约为20 ku;M-26碱性木聚糖酶的最适温度和pH分别是55℃和pH 8.0,具有一定的耐碱性;该酶无纤维素酶活性,Fe2＋对其有激活作用;Mn2＋、Zn2＋、Fe3＋、Cu2＋对其具有抑制作用。短小芽胞杆菌M-26碱性木聚糖酶具有纸浆生物漂白应用前景。     

无花果沙雷氏菌CH0203壳聚糖酶的纯化及生化性质研究

目的：得到纯化的无花果沙雷氏菌CH02503的壳聚糖酶,并研究其生化性质。方法：将发酵粗酶液先后通过硫酸铵分级沉淀,superdex75凝胶柱和羧甲基纤维素离子交换柱层析,壳聚糖酶得到纯化。结果：经测定,该酶为内切酶,其相对分子质量为29kDa,等电点9．4,在45℃和pH4．0—7．5之间稳定,最适温度是45％,最适pH3．6,Mn^2＋、Co^2＋能够激活,Pb^2＋、Cu^2＋、Ni^2＋、Cr^3＋能够抑制该酶的活性,该酶最适底物是脱乙酰度85％的壳聚糖,对脱乙酰度低于45％的壳聚糖不能作用,对羧甲基甲壳素和羧甲基纤维素不能作用,以完全脱乙酰的壳聚糖为底物时,最终水解产物是单糖、二糖、三糖,反应的米氏常数为0．44mg／ml。     

毛栓菌漆酶的分离纯化及酶学性质研究

对毛栓菌产漆酶的分离、纯化及酶学性质进行研究。粗酶液经硫酸铵盐析、透析、DEAE-Sepharose柱层析,得到2种漆酶同工酶LacA和LacB。LacA和LacB回收率分别为17.1%和2.74%。SDS-PAGE电泳测得2漆酶的分子量分别为54.6 ku和7.7 ku;LacA和LacB最适作用温度分别为50℃和60℃;最适反应pH值分别为4.5和4.0;Cu2＋、Mg2＋对LacA有激活作用,对LacB影响不大;Ag＋对LacA和LacB表现为完全抑制;Fe3＋对LacA和LacB有一定的抑制作用;Ca2＋、Mn2＋、K＋、Na＋、Zn2＋对LacA和LacB影响不大。DTT、EDTA、DMSO、SDS对酶均有不同程度的抑制作用,且随其浓度的升高抑制作用增强。     

烟管菌漆酶的分离纯化及部分酶学性质研究

烟管菌Bjerkandera adusta WZFF．W-Y11漆酶粗酶液经过丙酮分级沉淀、DEAE-Cellulose离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤,得到了三种电泳纯的漆酶同工酶,总酶活回收率达到65．5％,其中LacA平均纯化了29．2倍,LacB纯化了5．1倍,LacC纯化了18．5倍;三种同工酶的分子量分别为LacA：68．7kDa、LacB：80．2kDa、LacC：77．2kDa。LacA、LacC氧化愈创木酚的Km,大于氧化ABTS的Km,最适作用温度在45．70℃,最适反应pH3．0-5．5,65℃时LacC比LacA稳定,LacC在pH3．5—6．0稳定,LacA在pH5．0-9．0稳定,A1^3对LacA、LacC的酶活有促进作用,C1、Fe^3＋、Hg^2＋抑制LacA、LacC的酶活,Cu^2＋抑制LacC的酶活,而对LacA的活性没有明显影响。     

β-葡聚糖酶的分离纯化和特性研究*

对里氏木霉所产β-葡聚糖酶粗酶液通过饱和硫酸铵沉淀、Sephadex G-100 柱层析和DEAE-Sephadex A-50 柱层析进行纯化,比活提高14.60倍,活力回收6.62%。酶特性研究表明,最适温度和pH分别为60℃和5.0,在pH低于5.0时酶较稳定,酶的热稳定性在60℃以下。 Cu～2+、 Mn～2+ 、Mg～2+ 、Fe～3+ 和K+对酶有抑制作用, Zn～2+、Ca～2+、 Co2+和 Fe～2+ 有激活作用。     

β-葡聚糖酶的分离纯化和特性研究

对里氏木霉所产β-葡聚糖酶粗酶液通过饱和硫酸铵沉淀、Sephadex G-100 柱层析和DEAE-Sephadex A-50 柱层析进行纯化,比活提高14.60倍,活力回收6.62%。酶特性研究表明,最适温度和pH分别为60℃和5.0,在pH低于5.0时酶较稳定,酶的热稳定性在60℃以下。 Cu～2+、 Mn～2+ 、Mg～2+ 、Fe～3+ 和K+对酶有抑制作用, Zn～2+、Ca～2+、 Co2+和 Fe～2+ 有激活作用。     

普鲁兰多糖高产菌株Y68葡萄糖基转移酶的纯化及特性研究

运用离子交换层析法和凝胶过滤层析法分离纯化普鲁兰多糖高产菌株Y68胞内葡萄糖基转移酶(简称GTF),并以SDS-PAGE、Native-PAGE对蛋白质进行量化、比较及特性鉴定,研究其酶学特性。结果表明短梗霉Y68中GTF被分离纯化,纯化酶在SDS-PAGE凝胶电泳上显示分子量50.8 ku单一条带,而在Native-PAGE凝胶电泳上显示分子量350 ku单一条带。纯化酶的最适酶反应pH和最适酶反应温度分别为6.0和40℃,酶对pH十分敏感,稳定性较差,对温度的稳定性则稍好。GTF为金属酶,Na+和K+对酶有激活作用,Ca2+、Mn2+、Mg2+、Ba2+、Cu2+、Fe2+、Hg2+、Co2+对酶活性有抑制作用,Hg2+对酶活性的抑制作用说明酶活性中心含有二锍键。EDTA、PMSF、SDS和碘乙酸对GTF活性有很大的抑制作用,而二硫苏糖醇(DTT)对酶活性有保护作用。     

蜗牛酶中一种β-葡萄糖苷酶的纯化及酶学性质的研究

通过DEAE-Sepharose离子交换层析和Sephadex G-100凝胶过滤层析的联用从中华白玉蜗牛消化酶中分离出1种具有人参皂苷Rb_1水解活性的β-葡萄糖苷酶.纯化后该酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带.反应最适pH为5.6,最适温度是80 ℃.pH稳定范围很广,在pH为4.0～11.0的溶液中和温度60 ℃以下保持长时间稳定状态,是一个耐碱和中等耐热的糖苷酶.Na~+、K~+、Li~+、Ca~(2+)、Mg~(2+)、EDTA、DTT和SDS不影响该酶活性,而Cu~(2+)、Ag~+和Fe~(3+)对该酶则具有明显的抑制作用.pNPG为底物的动力学参数Km和Vmax分别为0.182 mmol/L和0.189 μmol/(min·mg).     

酸性α-淀粉酶的分离纯化与酶学性质研究

纯化了枯草芽胞杆菌xm-1菌株酸性α-淀粉酶,并对其酶学性质进行了研究。通过硫酸铵沉淀和Sephadex G-75凝胶层析将酸性α-淀粉酶粗酶液纯化了32.5倍,活力回收率为10.0%。酶性质测定结果表明,该酸性α-淀粉酶分子量约为60kD,最适反应温度为45℃、最适作用pH5.0,该酶在pH3.4-6.0下稳定,高温耐受性差。Cu2+、Zn2+、EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Ca2+和Mn2+对酶具有较强的激活作用。     

1株高效降解纤维素的槲寄生内生真菌研究

利用刚果红-CMC平板染色法、DNS法从槲寄生内生真菌中筛选获得1株高效纤维素酶产生菌H-3-3,通过分析其菌落形态特征和18S rDNA序列的同源性,将菌株H-3-3鉴定为拟茎点霉属Phom opsissp.;对其酶学性质研究得到：槲寄生内生真菌H-3-3中CMC酶、β-葡糖苷酶、滤纸酶这3种组分酶最适温度均为50℃,β-葡糖苷酶活和滤纸酶活最适pH值均为4.8,CMC酶最适pH值为4.4;3种酶在30～45℃,pH4.0～8.0稳定性较强。金属离子Mn^2＋、Co^2＋、Mg^2＋和Ca^2＋对3组分酶都有不同程度的促进作用,其中以Co^2＋效果最佳;而Ba^2＋、Zn^2＋、Cu^2＋对3组分酶分均表现出明显的抑制作用。     

重组黄杆菌肝素酶Ⅲ的纯化、表征及培养条件对酶生产的影响

肝素酶Ⅲ是一种特异性地裂解乙酰肝素的酶,在大肠杆菌中表达时容易形成包涵体.为实现肝素酶Ⅲ的可溶性表达,利用谷胱甘肽-S-转移酶(GST)与肝素酶Ⅲ融合性能,通过构建相应的表达质粒pGEX-heparinaseⅢ,在大肠杆菌中实现了肝素酶Ⅲ的可溶性表达.粗酶通过一步亲和纯化其纯度可达95%以上.通过对LB培养基摇瓶培养Escherichia coli BL21的诱导时机,诱导剂用量、诱导时间等培养条件的优化,确定了该可溶性肝素酶Ⅲ融合蛋白的最适生产条件.通过对纯酶的最适反应温度、pH、Ca~(2+)浓度等一系列性质研究,确定了该酶的最适反应条件.     

绵毛嗜热丝孢菌木聚糖酶的纯化与性质

研究了绵毛嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus W205胞外木聚糖酶的纯化与性质。粗酶液经硫酸铵沉淀和Q-Sepharose FF离子交换层析即可得到电泳纯木聚糖酶,回收率为46.6%,比酶活为1396.9U/mg。该酶的最适pH和最适温度分别为pH7.0和75℃,pH稳定范围为5.5-10.8,70℃处理30min残存酶活在70%以上。薄层层析结果显示该酶水解桦木木聚糖的主要产物是木二糖和木三糖,并且能够通过转糖苷作用将木三糖转化为木二糖。该木聚糖酶易于纯化并且具有较宽的pH稳定性及良好的热稳定性,具有较大的潜在工业应用价值。     

脱枝酶产生菌的分离鉴定及酶学性质研究

目的：从中国高校工业微生物资源与信息中心（CICIM-CU）细菌库中分离具有产脱枝酶酶活的细菌并鉴定,进行酶学性质的研究。方法：通过碘显色平板法筛选产酶菌株,利用16S rDNA确定其属种。对每一株产脱枝酶的细菌进行初步的酶学性质研究。结果：从4005株细菌中筛选出45株产脱枝酶的细菌,建立了产脱枝酶细菌的细菌库。酶学性质表明CICIM B272、CICIMB1-30两株菌产生的脱枝酶,酶反应的最适温度分别为70℃6、0℃,最适pH分别为6.0、5.5,来源于上述两种不同属种的脱枝酶在30-70℃反应条件下,酶在pH 4.5-8.5范围内活性稳定,Li＋、Na＋、K＋、Mg2＋、Mn2＋对两者酶活均有显著的激活作用,而Cu2＋、Fe3＋及EDTA对两者均有显著的抑制作用,Mn2＋、Ca2＋分别对两者的热稳定性具有很好的提升作用。以支链淀粉为底物的动力学常数Km分别为352.883mg/mL、4.5814mg/mL,Vmax分别为30.03mg/min.mL、0.4575mg/min.mL。结论：不同属种的脱枝酶酶学性质差别显著。     

Apoplastic β-1, 3-Glucanases in Leaves of Tomato Systematically Infected by TMV

Apoplastic β-1, 3-glucanase was purified from leaves of tomato (Lycopersicon esculentum Mill. ) which were systematically infected by TMV (tobacco mosaic virus). The enzyme obtained through -20℃ acetone precipitation, CM-Sephadex C-25 ion exchange chromatography, DEAE-Sephadex A-25 ion exchange chromatography and Sephadex G-75 gel filtration, showed homogeneity in PAGE, and SDS-PAGE which had two isoenzymes of 27 kD and 36 kD. The enzyme hydrolysed laminarin at an optimum pH of 4.8--5.2 and was stable between pH 4--8 and at an optimum temperature between 30--40℃, and stable at 40℃ after 1 hour of incubation, It had a Km of 9. 2 mg/mL. SDS-PAGE profiles of the proteins in the tomato leaf intercellular fluid had the bands of 22 kD, 27 kD and 36 kD that were β-1, 3-glucanases.