中国脊髓灰质炎病毒中Ⅱ_（17）和中Ⅲ＿2疫苗株部份基因序列的分析

对中国脊髓灰质炎Ⅱ型减毒活疫苗株──中Ⅱ１７和Ⅲ型减毒活疫苗株──中Ⅲ２的ＶＰ１段部份核酸片段进行序列分析,并分别与相应的Ｓａｂｉｎ２和Ｓａｂｉｎ３株有关片段的核苷酸序列进行比较。在４１６个核苷酸序列中,中Ⅱ１７与Ｓａｂｉｎ２有９９．３％同源性,中Ⅲ２与Ｓａｂｉｎ３株完全一致。从我国服用国产活疫苗地区急性弛缓性麻痹病例中分离到的部份２型疫苗株,分别与中Ⅱ１７和Ｓａｂｉｎ２相比较,发现与中Ⅱ１７株更为近缘,海南、山东、湖南株分别只有０、１或２个核苷酸的改变。     

脊髓灰质炎病毒Sabin株减毒的遗传学基础的研究进展

用Ｓａｂｉｎ株生产的口服脊髓灰质炎减毒活疫苗（ＯＰＶ）由１、２、３型组成,疫苗株是由强毒株经连续传代突变而来,对每种疫苗株而言只有少数位点与减毒有关,特别是５′端非编码区的第５个茎 环结构。现已证实Ｓａｂｉｎ株病毒在人体中复制时由于病毒的回复突变或第２位点的抑制突变导致毒力回升,可能在疫苗接种者和接触者中引发脊髓灰质炎病例。用聚合酶链式反应和限制性内切酶酶切技术作突变分析（ＭＡＰＲＥＣ）对疫苗中的痕量回复突变进行定量分析已成为可能,正逐步用于从分子水平监测ＯＰＶ生产的连续性,成为评价３型ＯＰＶ质量的一个重要指标。     

中国脊髓灰质炎病毒疫苗株基因变异的分析

从急性弛缓性麻痹（ＡＦＰ）病例分离的３２株脊髓灰质炎（脊灰）病毒,在ＶＰ１编码区,经ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法鉴定,并经核酸测序进一步证实力疫苗株,其中５株为Ｉ型疫苗,１６株Ⅱ型疫苗株,１１株Ⅲ型疫苗株,以同样的分析方法检测这些毒株基因组的３Ｄ聚合酶编码区,发现２株Ｉ型疫苗株在３Ｄ区的４３１个核苷酸序列为野毒序列,即这２株Ｓａｂｉｎ１基因型（ＶＰ１）与野毒基因型（３Ｄ）重组株;其余３株Ｉ型疫苗株未发现基     

中国丙型肝炎患者中发现新的丙型肝炎病毒核苷酸序列

应用ＲＴ－ＰＣＲ和ＤＮＡ克隆重且技术从中国云南地区丙型肝炎患者血清中克隆到３个丙型肝炎病毒（ＨＶＣ）５?端非编码区（５’ＮＣＲ）核苷酸序列。这３个序列分别来自３个不同的再型肝炎患者。与国内外已发表的ＨＣＶ原型株同源序列比较研究发现,这３个ＨＣＶ５’ＮＣＲ序列中分别存在部分核苷酸序列的缺失或出现插入重复。在ＹＳ２２５－１ ５’ＮＣＲ序列－１５５￣－１７４位之间,有１８个核苷酸序列缺失;在ＹＳ２０３－     

对我国温州地区脊髓灰质炎病毒分离株抗原性差异的研究

对脊髓灰质炎（脊灰）病毒抗原性监测的结果表明,不同年份分离的毒株,其抗原性存在型内差异。对抗Ｓａｂｉｎ ｌ活疫苗血清中和脊灰病毒能力的实验研究发现：（２）要有效地中和流行野毒株,必需高价抗Ｓａｂｉｎ免疫血清;（２）对同一地区同一年份流行的野毒株,中和能力不尽相同;（３）对同一地区流行的野毒株,中和能力随毒株年份的迁延而呈下降趋势。这可能有助于部份解释近年来在脊灰流行中,全程活疫苗免疫者病例有所增中     

Ⅲ型中国株HCVE2/NS1基因与已知分离株的同源性比较

利用逆转录套式ＰＣＲ扩增Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因片段,将其克隆到ｐｃＤＮＡ３载体上．采用双脱氧链终止法测定插入片段的核苷酸序列．并与已知分离株的相应区域进行同源性比较．首次克隆出Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因（ＨＣ－Ｗ１４）,其核苷酸序列与Ⅲ型日本株ＨＣＶ（ＨＣ－Ｊ６）该区域同源性为８８．３７％,其推定的氨基酸同源性为８９．２９％．而与已知的非Ⅲ型株ＨＣＶ该区域相比,核苷酸及氨基酸的同源性均相对较低．Ⅲ型中国株ＨＣＶ与Ⅱ型中国株ＨＣＶ在Ｅ２／ＮＳ１区域有较大的变异,揭示研制我国的ＨＣＶ疫苗应该考虑这种基因型之间的变异性．     

北京等四地区呼吸道合胞病毒分离株G蛋白基因的比较分析

为了解我国不同地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）感染特征是否与基因变异有关,对北京、广州、长春和河北四个地区不同流行特征中分离的ＲＳＶ毒株的Ｇ蛋白基因进行了序列分析。结果表明,该Ｇ蛋白基因同国外Ａ型亚原型株（Ａ２株）间存在显著差异,Ａ２株同分离株间的核苷酸同源性为９２．７－９３．６％,氨基酸同源性只有８８．３－８９．９％。分离株间的核苷酸同湃性为９６．０－９８．９％,氨基酸同源性９２．６－９７．７％。氨     

流行性乙型脑炎减毒株的研究进展

本文介绍了流行性乙型脑炎病毒株的研究简史,并着重阐述了现用减毒活疫苗株ＳＡ_（１４）－１４－２的生物学特点、分子生物学、免疫效果及其机理。     

蜱传脑炎病毒东北株E蛋白的核酸和氨基酸序列

从我国东北林区死者脑组织中,分离到蜱传脑炎病毒ＨＬＪ－１株,测定了它的Ｅ蛋白基因序列和推导的氨基酸序列,以及Ｅ蛋白抗原位点反应图谱。将该株与远东亚型Ｓｏｆｙｎ株和中欧亚型Ｎｅｕｄｅｒｆｌ株做了同源性比较,ＨＬＪ－１株与Ｓｏｆｙｎ株Ｅ蛋白基因的核苷酸及氨基酸的同源性分别为９４．３％和９８．８％;与Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌ的核苷酸和氨基酸的同源性分别为８３．７％和９６％。在Ｅ蛋白的核苷酸序列中,ＨＬＪ－１和     

乙型脑炎病毒减毒中间株SA14—12—1—7基因组全序列的测定

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14 12 1 7株进行全序列测定和分析 ,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制。根据已发表的SA14 14 2株及SA14 株的序列 ,设计 6对重叠引物 ,涵括整个乙脑病毒的基因组 ,通过RT PCR扩增出SA14 12 1 7株的各cDNA片段 ,分别克隆到pGEM T载体 ,转化至TG1受体菌中 ,挑取阳性克隆进行鉴定后测序。结果表明SA14 12 1 7株基因组全序列长 10 976个核苷酸 ,从 96到 10 394为一个长开放读码框 ,编码 3432个氨基酸。与野毒株SA14 和疫苗株SA14 14 2的核苷酸序列和氨基酸序列相比 ,同源性均在 99%以上 ,突变位点分散于各个区域 ,E区有 5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同 ,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关。此外 ,NS3、NS5和 3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关。综上所述 ,乙脑病毒减毒中间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列 ,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性。全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理具有重要意义     

两株中国腮腺炎野毒SH基因cDNA直接测序和克隆测序

对来源于兰州和上海两市的两株腮腺炎病毒野毒的小疏水蛋白（ＳＨ）基因及其旁侧区ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物,分别进行直接测序和克隆测序。用直接测序法测定２株腮腺炎野毒３７８个核苷酸序列,在此范围内存在１６个核苷酸（４．２％）差异,其中１１个（２．９％）位于编码区序列中,所推导的ＳＨ蛋白序列有６个氨基酸（１０．５％）差异。克隆测序法测定的这两株腮腺炎野毒的核苷酸序列相当于直接法的７８－３７８位核苷酸。两处     

猪伪狂犬病毒蛋白激酶基因的序列测定与分析

对伪狂犬病毒湖北株（ＰＲＶ ＨＢ株）蛋白激酶（ＰＫ）基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与ＰＲＶＮＩＡ－３株、Ｋａ株以及ＨＳＶ－１、ＶＺＶ ＰＫ基因的同源性。结果显示,在测定全长１３１２ｂｐ的ＤＮＡ序列中,包括着一个１００２核苷酸的开放读框,可编码３３４个氨基酸组成的多肽。ＰＲＶ－ＨＢ株ＰＫ与ＰＲＶ－ＮＩＡ３、ＰＲＶ－Ｋａ、ＨＳＶ－１、ＶＺＶ ＰＫ基因比较,核苷酸的同源性分别为９８．７％、９     

中国河南株丁型肝炎病毒全基因组的cDNA克隆和序列分析

从我国河南－抗丁型肝炎病毒抗原（ａｎｔｉ－ＨＤＡｇ）及丁型肝炎病毒（ＨＤｖ）ＲＮＡ双阳性的ＨＢｓＡｇ携带者血清中提取ＲＮＡ,采用人工合成的引物进行逆转录和聚合酶链反应（ＰＣＲ）,获得了贯穿ＨＤＶ全基因组的６个相互重叠的ｃＤＮＡ片段。经双脱氧末端终止法进行核苷酸序列分析,得到了长度为１６７４ｂｐ的我国人河南株ＨＤＶｃＤＮＡ全序列。计算机分析表明,该株与我国台湾株（ＨＤＶＩＡ型）、美国－１株（ＨＤＶＩＢ型）、日本－１株（ＨＤＶⅡ型）和秘鲁－１株（ＨＤＶⅢ型）的核苷酸同源性分别为的９４．３％、８６．８％、７５．４％和６６．３％,氨基酸序列的同源性分别为８９．７％、８５．１％、７１．９％和６４．６％,并在核苷酸和推导的ＨＤＡｇ氨基酸序列中分别发现了５个和２个集中保守的区域。这些区域均与ＨＤＶ的某些重要功能密切相关。     

小麦—黑麦—中间偃麦草三属杂种F1及其花粉植株的细胞遗传学研究

２个小麦－黑麦－中间偃麦草三属杂种Ｆ１的减数分裂行为复杂,中期Ｉ染色体平均每细胞构型为１９．５３Ｉ＋１３．４７ＩＩ＋０．７０ＩＩＩ＋０．０６１Ⅴ和１９．９９Ｉ＋１３．４２ＩＩ＋０．６５ＩＩＩ和０．０４１Ⅴ＋０．０１Ⅴ,后期Ｉ染色体分配不平衡,单价体并不一定排列在赤道板上,产生各种类型的异常四分体。１８株花粉植株染色体组成类型多样,在２个花粉植株中分别观察到端体和等臂染色体。单倍体花粉植株中期Ｉ染色     

中国猪瘟兔化弱毒兔脾毒NS2-3基因的序列分析

根据已发表的猪瘟病毒序列,设计并合成了覆盖有ＮＳ２－３全基因的４上物,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术从接种了猪瘟兔化弱毒（ｈｏｇ ｃｈｏｌｅｒａ ｖｉｒｕｓ ｌａｐｉｎｉｚｅｄ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｓｔｒａｉｎ,ＨＣＬＶ）的兔脾组织中,成功地扩增了ＮＳ２－３基因,将其克隆到Ｔ载体后,测定了其核苷酸序列。结果显示,所克隆的ＮＳ２－３基因长２９６４个核苷酸,编码９８８年氨基酸。用ＤＮＡＳＩＳ和ＰＲＯＳＩＳ软件分析表     

传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析

以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株,Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板,用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段,分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ４４４ｂｐ） 上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ○Ｒ － Ｔ 载体上,测定了其核苷酸顺序,在长为３ １０１ ｂｐ 中含有两个阅读框ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ ,分别编码１ ０１２ 个氨基酸的前体蛋白（ＶＰ２ － ４ －３） 和１４５ 个氨基酸的ＶＰ５,ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的ＩＢＤＶ 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较,结果表明：Ｈ 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间,在核苷酸水平上存在２５ｂｐ － ２６７ｂｐ 的差异;在氨基酸水平上存在１７ ～４０ 个氨基酸的差异。在ＶＰ２ － ４ － ３ 内比较显示,Ｈ 毒株与Ｐ２ 、Ｃｕ－ １ 之间氨基酸的差异最小为１ ．７％ ,Ｈ 毒株与ＵＫ６６１ 之间氨基酸的差异最大为３ ．９ ％ 。变异主要发生在ＶＰ２ 的可变区（２０６ － ３５０ 位氨基酸） ,在Ｈ 毒株所特有的１２ 个氨基酸当中,该区就占５ 个,代表１ ．７６ ％ 的变异。ＶＰ４、ＶＰ３ 和ＶＰ５区各有     

乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2全基因组序列测定及基因遗传稳定性

目的对乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株进行全基因组序列测定和分析,并观察该生产株在疫苗制备过程中的基因遗传稳定性。方法根据DNA序列数据库(Gen Bank)公布的SA14-14-2株的序列,设计合成7对引物,提取疫苗生产株SA14-14-2及其工作种子批生产的3批原液、3批成品疫苗的病毒RNA,通过RT-PCR方法扩增SA14-14-2株的cDNA片段,分别克隆到pGEM-T载体,转化至大肠埃希菌DH5α中,挑取阳性菌落克隆、鉴定后测定全序列并对序列进行比较分析,观察毒株在传代的过程中病毒滴度的稳定性。结果乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2株基因组全长10 976 bp,编码3 433个氨基酸。3批原液和3批成品疫苗的基因组全长为10 977 bp,比较分析发现,在3'端非编码区10 701处多一个G核苷酸的插入。与DNA序列数据库(Genbank)登录号为D90195的全长序列同源性分别是99.9%、99.9%、99.9%、99.9%、99.8%、99.9%、99.8%,其中E蛋白的同源性均为100%。SA14-14-2生产株的病毒滴度为7.22 lg PFU/mL,原液和成品疫苗的滴度分别为7.32、7.23、7.32、6.86、6.92、6.70 lg PFU/mL。结论乙型脑炎减毒活疫苗生产株SA14-14-2基因稳定,具有良好的一致性,为乙型脑炎减毒活疫苗的质量的稳定性提供了可靠依据。     

戊型肝炎病毒中国XT—179株全基因组Cdna克隆及其核苷酸和氨基酸序列分析

本文报道对中国新疆东部一起戊型肝炎流行高峰期间,由ＨＥ患者烘便中分离到的型肝炎病毒中国ＸＴ－１７９株进行全基因ｃＤＮＡ克隆、核苷酸和氨基酸序列测定及分析结果。所阐明的ＨＥＶ－ＸＴ－１７９株基因组全序列由７１９４个核苷酸和３＇端的多聚腺嘌呤核苷酸尾组成。四种核苷酸的含量腺嘌呤（Ａ）为１７．０％,胞嘧啶（Ｃ）为３１．９％,鸟嘌呤（Ｇ）为２６．０,尿嘧啶（Ｕ）为２５．１％。Ｇ＋Ｃ含量为５７．９％。全基因     

黄瓜花叶病毒山东株(CMV-SD)RNA2全长cDNA克隆的构建及全序列分析

分别利用５’ＲＡＣＥ和３’ＲＡＣＥ确定了ＣＭＶＳＤＲＮＡ２的５’和３’末端序列,在此基础上,利用ＲＴＰＣＲ得到了ＲＮＡ２的５’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２５和３’端一半的ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２３,并通过拼接构建了ＲＮＡ２全长ｃＤＮＡ克隆ｐＣ２Ｆ。通过对ｐＣ２５和ｐＣ２３进行序列测定,得到了ＲＮＡ２的全序列。序列分析结果表明ＣＭＶＳＤＲＮＡ２由３０４８ｎｔ组成,其中存在２个部分重叠的阅读框ＯＲＦ１（７９～２６５２ｎｔ）和ＯＲＦ２（２４１４～２７４６ｎｔ）,分别编码８５８ａａ的２ａ蛋白和１１１ａａ的２ｂ蛋白,并在２ａ蛋白的序列中发现了动植物病毒复制酶所特有的两个保守序列。该株系ＲＮＡ２核苷酸序列与分属ＣＭＶＩ亚组的Ｆｎｙ株系和ＩＩ亚组的Ｑ株系ＲＮＡ２的核苷酸序列同源性分别为９１７％和７５６％;２ａ蛋白的氨基酸序列同源性分别为９３８％和６７７％,２ｂ蛋白的氨基酸序列同源性分别为８３０％和５１３％。同源性比较的结果表明ＳＤ株系属于ＣＭＶＩ亚组。     

乙型脑炎病毒减毒中间株SA14-12-1-7基因组全序列的测定

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14-12-1-7-12 -1-7株进行全序列测定和分析,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制.根据 已发表的SA14-12-1-7株及SA14-12-1-7株的序列,设计6对重叠引物,涵括整个乙脑病 毒的基因组,通过RT-PCR扩增出SA14-12-1-7-12-1-7株的各cDNA片段,分别克隆到pGEM -T载体,转化至TG1受体菌中,挑取阳性克隆进行鉴定后测序.结果表明SA14-12-1-7-12- 1-7株基因组全序列长10976个核苷酸,从96到10394为一个长开放读码框,编码3432个氨基 酸.与野毒株SA14-12-1-7和疫苗株SA14-12-1-7的核苷酸序列和氨基酸序列相比,同 源性均在99%以上,突变位点分散于各个区域,E区有5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关.此 外,NS3、NS5和3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关.综上所述,乙脑病毒减毒中 间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性.全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理具有重要意义.