疯牛病(TSE)检测的研究进展

近年来,对TSE检测的研究发展非常迅速,尽管朊病毒的分类本质尚不明确,但一些生物学特性已有研究,如传染性,抵抗力等,其检测技术包括;早期利用宿主动物牛或转基因小鼠的生物学方法;有多种免疫诊断方法可区分正常和异常的朊病毒蛋白,欧盟验证了三种免疫诊断方法,瑞士Prionics公司的免疫印迹法,爱尔兰Enfer Scientific公司的ELISA法和法国CEA和英国Bio-Rad公司开发的夹心免疫法,三种检测方法准确性为100%,因此,欧盟授权这三种检测方法用于欧洲检测疯牛病,此外,基于免疫荧光方法和毛细行之有效免疫电泳的方法也有应用;研究人员还尝试通过对TSE感染过程中出现的相关蛋白,朊病毒的形态变化的检测来诊断TSE,也有针对TSE发病过程中,异常朊病毒蛋白在脑部出现聚集,采用不同手段用以诊断;在体外模拟感染性PrP(Sc)引起正常细胞表面蛋白PrP构象改变的过程也应用于TSE的检测,对潜伏期的诊断试剂研究正在进行中,但目前并未取得满意的发出高敏感性,高特异性和使用方便的TSE诊断方法。     

艾滋病疫苗的研究动向

<正>艾滋病是一种致死性传染病。针对其病原体HIV的疫苗研究工作一直是全球最为关注的课题之一。尽管HIV原型疫苗在动物模型上的试验结果没有达到人们预期的目标,然而随着有关方面研究的进展,许多人相信研制有效的HIV疫苗还是有可能的。主要取得进展的有以下两个方面:(1)HIV保护性免疫抗原决定簇的研究。(2)慢病毒的原型疫苗在动物模型上的研究。     

人T细胞白血病病毒I型的研究现状

人T细胞白血病病毒I型(HTLV-I）是一类在人体可引起严重疾病的逆转录病毒。有数据表明国内局部地区存在小的流行,本文从病原学、流行病学、监床表现、实验室诊断等方面对其作一综述。     

风疹病毒及其感染的诊断研究进展

风疹病毒因其在优生优育方面的重要作用,一直受到人胶的广泛重视,迄今,许多国家已将风疹疫苗纳入国家免疫规划,继而列入消灭麻疹后的又一个战略目标,并对风疹感染进行监测。风疹病毒感染的诊断是关系到上述行动的重要方面。本文综述了风疹病毒及其感染诊断方面的研究进展,特别是重组病毒抗原原在诊断中的应用。     

乙型脑炎病毒减毒中间株SA14-12-1-7基因组全序列的测定

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14-12-1-7-12 -1-7株进行全序列测定和分析,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制.根据 已发表的SA14-12-1-7株及SA14-12-1-7株的序列,设计6对重叠引物,涵括整个乙脑病 毒的基因组,通过RT-PCR扩增出SA14-12-1-7-12-1-7株的各cDNA片段,分别克隆到pGEM -T载体,转化至TG1受体菌中,挑取阳性克隆进行鉴定后测序.结果表明SA14-12-1-7-12- 1-7株基因组全序列长10976个核苷酸,从96到10394为一个长开放读码框,编码3432个氨基 酸.与野毒株SA14-12-1-7和疫苗株SA14-12-1-7的核苷酸序列和氨基酸序列相比,同 源性均在99%以上,突变位点分散于各个区域,E区有5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关.此 外,NS3、NS5和3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关.综上所述,乙脑病毒减毒中 间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性.全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理具有重要意义.     

细胞培养用牛血清污染大肠杆菌噬菌体的检测

用大肠杆菌噬菌体增殖法检测２１６批细胞培养用牛血清,结果１４２批（６５．７％）显示阳性结果。由此提示牛血清在采集制备过程中的污染严重,应引起重视。     

丙型肝炎病毒免疫电镜的初步研究

采用组织匀浆免疫沉淀后负染、免疫组化块染后包埋、原位包埋等免疫电镜技术,研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）。组织匀浆、免疫沉定、负染后在电镜下观察到与ＨＣＶ相关的类病毒颗粒,形态与披膜病毒相似,大小多在５５～６５ｎｍ,圆形,有包膜,边缘略有突起或比较平滑,有胶体金结合在此种颗粒上及其周围。无关单抗阴性对照无类似颗粒及胶体金。免疫酶染电镜下还见到成堆可疑颗粒。此外,ＨＣＶ－Ｅ区抗原染色后原位包埋,尚发现胶体金大多结合于大小５０ｎｍ左右圆形结构的内部,表明Ｅ区单抗针对的特异性抗原位点位于这种结构的内侧。     

乙型脑炎病毒单克隆杂交瘤抗体细胞系的建立及其应用于抗原性比较

本文建立了13侏乙脑单克隆抗体杂交瘤细胞系,对其中6株进行了特性研究,结果表明该6株中3株为乙脑病毒种特异性抗体,3株为乙脑病毒亚组特异性抗体。以免疫荧光技术对12株国内外分离的乙脑病毒进行了抗原性比较,结果表明我国分离的大多数病毒株间无明显的抗原性差异,但个别近年来分离的病毒侏如云南的Y-M60,福建的NY,湖南的X8103株与1949年北京分离的P_3株即目前用于灭活疫苗生产的病毒株间有一定的差异。我国的大多数病毒株与日本的中山(NaK)株则有明显的差别。此外,并发现2株单克隆抗体对我国的全部野病毒株有高滴度的强荧光反应而对14-2减毒株仅有十分微弱反应,甚至无反应。以上结果提示乙脑不同病毒株间存在抗原性差异,但是否有免疫保护上的抗原性差异尚待进一步研究。     

乙型脑炎病毒野毒株及其不同株减毒株E蛋白基因序列比较

为了解乙脑减毒活疫苗株SA14-12-1-7的神经毒力减毒机 制,用RT-PCR方法分别扩增不同减毒程度毒株的E基因,克隆、测序,继而对各毒株序列进 行比较.结果表明SA14-12-1-7强毒株与SA14-12-1-7-12-1-7株间只有3个氨基酸发生改变( E-107,E-176,E-439),SA14-12-1-7-12-1-7与SA14-12-1-7-9-7和SA14-12-1-7-5-3 株间有另3个氨基酸发生改变(E-138,E-279,E-315).SA14-12-1-7-9-7株与SA14-12-1-7-5-3株只有一个核苷酸NT -405不同,但未引起氨基酸改变.SA14-12-1-7疫苗株除保留SA14-12-1-7-12-1-7和SA14-12-1-7-9-7所改变的6个氨基酸外,另有2个氨基酸发生了改 变(E-177,E-264),共计在E区共发生8个氨基酸的替代.SA14-12-1-7-12-1-7株的 低神经毒力很不稳定而其余各株的弱毒特征很稳定.因此,E-176(Ile→Val),E-439(Lys→Arg)和 E-107(Leu→Phe)可能与神经外和神经内毒力减弱有关.E-138(Gul→Lys),E-315(Ala→Val)和 E-279(Lys→Met)的突变可能与神经毒力的减弱和稳定性相关.     

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2E基因的稳定性

分别对SA14-14-2(PHK8代)疫苗株及其原野毒株SA14和另2个疫苗传代株[SA14-14-2(PHK17代)和SA14-14-2(鼠脑1代)]的E区基因进行了序列测定.结果表明,乙脑病毒减毒活疫苗SA14-14-2在PHK细胞上连传至17代时,发现2个氨基酸突变(E-331、E-398),但不是回复突变.虽然在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传1代后发生E-107个氨基酸回复,但与野毒株毒力相比仍然相差很大,无毒力返祖现象.在疫苗的实际质控工作中,对上述与毒力相关的基因进行监测,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段.