伪狂犬病病毒糖蛋白G基因的结构分析及其原核表达

利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分别为 98%、84.1%。 32 0～ 380位之间的氨基酸序列存在较大差异。根据序列分析结果 ,选取 gG基因长短不同的两个片段分别克隆到原核表达载体 pET2 8a( )进行表达。经SDS PAGE和Dot ELISA分析证实 ,表达出分子量大小分别约为 5 5kD和 6 3kD的特异性gG多肽 ,这为深入阐明PRV gG基因结构与功能及研制 gG ELISA诊断试剂盒奠定了基础     

饮用水水源与自来水中病毒和指示细菌存在水平的比较研究

自来水中人肠道病毒的存在已引起人们极大的关切和忧虑。本文报道了武汉东湖水和以东湖为水源的自来水中病毒和指示细菌的存在水平。水源水经过预加氯消毒、絮凝沉淀、砂滤和最后加氯消毒处理而成的自来水中细菌总数检测范围是41—500/升,总大肠菌是2—13/升、粪大肠菌为0—4/升、大肠菌噬菌体是0—13.6PFU/升,平均2.48PFU/升,肠道病毒为0—78PFU/升,平均为6.7PFU/升。水源水经制水工艺处理去除指示细菌、大肠菌噬菌体和肠道病毒的效率分别为97.95—99.99％,90.63％和53.18％。这种结果说明自来水制水工艺能有效地降低指示细菌,大肠菌噬菌体,而去除肠道病毒效率较低,揭示肠道病毒对环境压专的耐受性明显地比指示细菌强。     

正链RNA病毒起始RNA合成分子机制的研究进展

正链RNA病毒大多是人类和动植物的重要病原体,如脊髓灰质炎病毒(PV)、口蹄疫病毒(FMDV)、丙型肝炎病毒(HCV)、登革热病毒(DEV)、西尼罗河病毒(WNV)以及严重急性呼吸综合症病毒(SARS)等,都给人类的健康以及动植物的生长带来严重危害,造成巨大的经济损失。病毒基因组RNA的复制是病毒生命周期中一个重要环节,目前在临床上应用的许多药物都是针对病毒基因组RNA的复制而设计的,     

NS3蛋白在黄病毒科病毒生命活动中的作用

黄病毒科病毒包括三个属,即黄病毒属(Flavivirus),瘟病毒属(Pestivirus)和丙型肝炎病毒属(Hepacivirus).这些病毒均能引起人和动物患严重疾病.黄病毒属黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)、登革病毒(Dengue virus,DEN)能引起发烧、出血,患者死亡率极高,瘟病毒属牛腹泻病毒(Bovine viral diarrhea petivirus, BVDV)、猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)等能引起其各自宿主家畜患严重疾病.近年来,又发现丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)与人类原发性肝癌和肝硬化密切相关.然而,目前仍没有对各种黄病毒科病毒有效的治疗方法.尤其是近年来干扰素对丙型肝炎治疗的疗效低,反复率高,使得研究更为有效的抗病毒药物成为各种病毒疾病治疗中亟待解决的问题之一.在BVDV的研究中发现,当非结构蛋白NS3蛋白与NS2蛋白一起以复合物的形式存在时,病毒对其寄主是非致病性的;而当NS3蛋白独立地存在时,病毒颗粒是致病性的[1].这提示NS3蛋白很可能与病毒的致病性密切相关.而且,序列分析表明非结构蛋白NS3(nonstructure protein 3)是黄病毒科病毒中最为保守的非结构蛋白.后来许多研究证明NS3蛋白参与蛋白质水解加工,以及病毒的复制,对病毒的生命循环是必需的.因此,NS3蛋白成为了人们研究的一个热点.     

猪瘟病毒石门株NS2—3基因片段的序列测定及比较

根据猪瘟病毒Ｃ株的序列,以计算机辅助设计,化学合成１对引物（ＰＦ５６４８／ＰＲ６６０４）,应用ＲＴＰＣＲ技术从感染猪血中成功地扩增了我国猪瘟病毒强毒石门株ＮＳ２３基因片段,大小为９５７ｂｐ,位于ＮＳ３基因的中部ＮＴＰａｓｅ和Ｈｅｌｉｃａｓｅ活性区。克隆后测序,结果表明该段基因产物具有解旋酶超家族全部七个特征性保守序列,包括共同的ＮＴＰ结合基序Ａ位点（ＧＸＧＫＴ／Ｓ）和Ｂ位点（３ｈｙ,２ｘ）Ｄ。序列同源性比较表明,石门株与日本的ＡＬＤ和ＧＰＥ－株同源性最高,与其它３株猪瘟病毒（Ｃ株、Ｂｒｅｓｃｉａ株和Ａｌｆｏｒｔ株）的同源性也很高,并与２株牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）（ＮＡＤＬ株和ＳＤ１株）也有较高的同源性,尤其是由核苷酸序列推导的氨基酸序列,同源性均大于９０％,是瘟病毒属基因组中最保守的区段,这与该基因产物在病毒复制及聚蛋白前体加工过程中所具有的重要功能是一致的     

湖北猪场猪细小病毒的首次分离与鉴定

猪细小病毒是引起初产母猪繁殖障碍的主要病因之一,许多国家从初产母猪的流产、死产及木乃伊化胎儿中分离到猪细小病毒。我们从湖北省某猪场的初产母猪流产、死产及木乃伊化胎儿中分离到两株病毒。研究表明,它们可在PK15,Hela、BHK及Vero传代细胞系和胎猪肾、婴兔肾等原代细胞上产生特征性的细胞病变:对豚鼠红血球有血凝作用;对脂溶性溶剂不敏感,对热和酸有较强的抗性:对胰蛋白酶处理不受影响。对DNA合成抑制剂5—FVDR敏感。电镜观察发现这两株病毒大小为20nm左右,呈球形。两株病毒能被标准的细小病毒阳性血清中和。回感豚鼠,成功地从死产胎儿胎盘中收获到该病毒。按照国际病毒学分类原则,我们将这两株病毒鉴定为猪细小病毒,填补了湖北猪细小病毒的研究空白。     

肠道病毒在水环境中的分布及其行为

肠道病毒都是通过粪便排出体外的,因此它们很容易进入污水和各种天然水体中。从粪便排出的病毒有100多个型别。每克粪便中可含100多万个病毒颗粒,已经从污水,地表水,地下水和海水中检出了许多型别的肠道病毒,有些肠道病毒可在水环境中存活很长时间,已报道的病毒存活时间范围是:自来水2—168天;海水2—130天;河水2—168天;土壤25—125天;牡蛎6—90天,海水沉积物8—20天。水环境中的病毒存活受很多因素的影响,包括温度,日光,吸附作用和生物因素,在自然状态下,病毒存在有三种形式:单个病毒,病毒彼此聚集;吸附或埋入固体物中。病毒的存在形式对病毒存活有很大影响。由于人为的和自然的活动,使水环境中的病毒迁移和传播的途径较多,从而使病毒再次从自然界回到人体,保持平衡。     

NS3蛋白在黄病毒科病毒生命活动中的作用

黄病毒科病毒包括三个属,即黄病毒属(Flavivirus),瘟病毒属(Pestivirus)和丙型肝炎病毒属(Hepacivirus)。这些病毒均能引起人和动物患严重疾病。黄病毒属黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)、登革病毒(Dengue virus,DEN)能引起发烧、出血,患者死亡率极高,瘟病毒属牛腹泻病     

隐马尔可夫模型-改进的预测蛋白质二级结构方法

引入蛋白质二级结构预测的新方法：隐马尔可夫模型,其中将蛋白质的二级结构分成三类：H(指α-螺旋),E(β-折叠)及O(包括转角,卷曲及其结构)．该方法属于统计方法,但考虑了相邻氮基酸之间的相互作用(体现在状态传输概率)．通过模型的改进及参数的确定后,我们编制了程序HMMPS．用它来预测蛋白质二级结构,具有很高的准确度．其中关于H,F和O的准确率分别达到80．1％．72.0％和63．2％这表明．我们的方法是较为可靠的。