慢性丙肝患者外周CTL对HCV抗原位点的特异性识别及受HLA的限制

丙型肝炎是一种危害性很高的疾病,有慢性化倾向,并与肝细胞癌有密切关系。了解其发病机理及病理过程对于HCV感染的治疗和预防有重要意义。免疫应答被认为在HCV感染中起重要作用,细胞毒性T淋巴细胞(CTL)被认为是抵抗病毒感染的主要因素,而且参与了病理过程,虽然对HCV的分子研究已较广泛,但对CTL在HCV感染后的反应的报道则很少,因此,我们对9例慢性丙肝患者外周CTL对HCV核壳蛋白(NP)的反应进行了研究,发现     

基因检测技术 探针在诊断中的应用

在过去几十年来,世界上用分子水平分析的方法来研究人的基因失调已有许多报告,增加了很多新的知识,这些知识是由于生化的重组基因技术而来,用在单独的分析特异的基因、基因产物以及核酸结构分析编码,基因表达的规律,从而用以检测某些疾病,例如早期妊娠时测定血清或羊水中的基因紊乱,可以及时治疗或预防。     

鸭克隆探针制备和应用研究

自从1980年Mason等报告了在北京鸭血清中检出鸭乙型肝炎病毒(DHBV)颗粒以来,国内外已有数篇文章报告DHBV分子生物学方面的研究,随着人乙型肝炎研究的进展,迫切需要建立乙型肝炎动物模型     

用PCR分析HCV－RNA NS5部分序列变异

用ＰＣＲ分析ＨＣＶ－ＲＮＡＮＳ５部分序列变异魏来,王宇,陈红松,陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所,北京１０００４４）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ｃＤＮＡ的序列分析是验证ＨＣＶ基因分型,确定新的型与亚型的基础￣［１］．经典的序列分析方法需经繁琐的分子...     

HCV非结构蛋白(NS2/NS3)基因表达载体的构建及其一级结构分析

应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,从ＨＣＶ感染者血清中扩增编码ＨＣＶ病毒蛋白酶的ＮＳ２－ＮＳ３ｃＤＮＡ片段,在其５′和３′端分别引入ＥｃｏＲⅠ和ＸｂａⅠ限制性内切酶位点,定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,构建重组载体ｐｃＤＮＡ－ＮＳ２３,重组表达载体经限制性内切酶消化鉴定．用ＳＰ６和Ｔ７通用引物对目的基因片断进行序列分析．序列同源性分析结果表明,与ＨＣＶ－Ｊ、ＨＣ－Ｃ２有高度的同源性,与ＨＣＶ－１、ＨＣＶ－Ｊ６、ＨＣＶ－Ｊ８同源性差,提示所克隆的基因属ＨＣＶⅡ型．该区内重要的功能位点如Ｚｎ２＋依赖性金属蛋白酶催化中心、丝氨酸蛋白酶催化中心等均高度保守     

用改良酸酚法从大肠杆菌中大量分离纯化质粒DNA

在进行DNA重组和大量制备’2p标记的 DNA分子探针过程中,我们参照Clewell等〔41清 亮裂解液方法和Zasloff等fsl的酸酚法,综合发 展了一种大量分离纯化质粒DNA的清亮裂解 液一酸酚法此方法操作简便、重复性好、产量高, 其纯度和生物活性可满足DNA重组与制备32p 标记DNA探针的要求,既省去了昂贵费时的 氯化艳一澳化乙咤密度梯度超离心,又避免了细 菌裂解液直接酚提时溶液过于粘稠、不易操作、 收率低的缺点。并证实了经酸酚处理后的质粒 DNA可用于DNA重组。     

近年HBV(乙型肝炎病毒)基因工程研究情况

作者资料来源Burrell研究结果Nature。279:43一47Galibert 1979Valenzuela 1979Sninsky 1979Galibert 1979Pasek1979入ature。281:646一650Nature.280:815一817Nature。279:346一348Nueleie Aeids。researeh 7(2):335Nature.282:575一579把HBeAg的DNA elone到Eeoli中,产生HBeAgHBv DNA HasAg序列分析HBsAg的基因密码核普酸序列分析报告HBv基因组的克隆化和pHBVI基因图HBv nNA序#IJ分析 Marion Edman1980)。Virol.33(2):95 80619....     

“双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒NS_5基因

 “双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒ＮＳ_５基因李庆生,郭建平,陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所,北京１０００４４）我们在扩增丙型肝炎病毒ＮＳ５基因中,探讨了退火温度与扩增产物特异性之间的关系,发现“双退火温度”多聚酶链反应可很好地解决目?..     

光标生物素HBV-DNA探针及其临床应用

本文报告了应用生物素交联光敏补骨酯素(Bp,Biotin-Psoralen)标记HBV DNA探针的动力学研究和临床应用结果。表明化学合成Bp经366nm光照与DNA发生加成反应。能标记dsDNA,也能标记ssDNA。加热可使Bp-dsDNA变性,强碱则不能使Bp-dsDNA变性。临床DNA检测结果表明,应用Bp-HBV探针杂交,DNA检出率与HBeAg符合率达99.08％,与~(32)P-HBV符合率达98.8％,提示光标记Bp-HBV探针灵敏度接近同位素探针。