呼吸道合胞病毒F蛋白研究进展

人类呼吸道合胞病毒(RSV)融合蛋白(F蛋白)为病毒表面结构蛋白,可以刺激机体产生保护性抗体。因此对F蛋白的深入研究将有助于了解病毒感染的机理,从而为诊断试剂和亚单位疫苗的研制提供帮助。本文就F蛋白结构及结构与功能关系的研究进展进行简要综述。     

人巨细胞病毒IgM抗体国家参考品的研制

目的为了对人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)IgM抗体检测试剂进行统一评价,研制HCMVIgM抗体国家参考品,用于控制试剂盒的质量。方法收集正常人与感染者的标本,采用多实验室联合标定的方法确认参考品的试验结果,并经一系列的破坏条件进行稳定性和均匀性考核。结果考核的敏感性和准确性符合国家参考品的要求。结论该参考品能用于临床检测试剂的质量控制。     

乙型脑炎病毒减毒中间株SA14-12-1-7基因组全序列的测定

本研究通过对乙型脑炎活疫苗减毒过程中间株SA14-12-1-7-12 -1-7株进行全序列测定和分析,进一步了解乙脑活疫苗减毒及其稳定性的分子机制.根据 已发表的SA14-12-1-7株及SA14-12-1-7株的序列,设计6对重叠引物,涵括整个乙脑病 毒的基因组,通过RT-PCR扩增出SA14-12-1-7-12-1-7株的各cDNA片段,分别克隆到pGEM -T载体,转化至TG1受体菌中,挑取阳性克隆进行鉴定后测序.结果表明SA14-12-1-7-12- 1-7株基因组全序列长10976个核苷酸,从96到10394为一个长开放读码框,编码3432个氨基 酸.与野毒株SA14-12-1-7和疫苗株SA14-12-1-7的核苷酸序列和氨基酸序列相比,同 源性均在99%以上,突变位点分散于各个区域,E区有5个位点与疫苗株一致而与野毒株不同 ,3个位点与野毒株一致而与疫苗株不同,推测与其容易产生回复突变、恢复毒力有关.此 外,NS3、NS5和3′NTR的几个位点可能与病毒毒力稳定性相关.综上所述,乙脑病毒减毒中 间株的基因组全序列基本类似于已发表的序列,若干突变位点影响病毒的弱毒性及毒力的稳定性.全序列的测定对于研究疫苗株的减毒机理具有重要意义.     

人巨细胞病毒结构蛋白p150、p38的原核表达纯化及免疫性鉴定

应用聚合酶链式反应(PCR)扩增HCMV结构蛋白p150aa595~aa614/aa1006~aa1048和p38aa117~aa373基因片段,将其分别克隆于表达载体pGEX-4T-1和pET30 a-SetB中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,重组质粒经酶切鉴定及DNA测序证实pGEX-4T-1/p150aa595~aa614/aa1006~aa1048和pET30 a-SetB/p38aa117~aa373构建正确;通过优化表达和纯化,分别获得分子量约为35kD和43kD纯化的表达产物。经亲和层析纯化以免疫印迹实验对纯化的重组蛋白进行免疫反应性检测,证实重组蛋白p150aa595~aa614/aa1006~aa1048、p38aa117~aa373能够与抗HCMV IgM阳性血清反应,说明表达的重组蛋白p150aa595~aa614/aa1006~aa1048、p38aa117~aa373具有良好的免疫性,对HCMV的原发感染具有潜在的应用价值。     

应用复合增强剂扩增人巨细胞病毒pp65全基因

在PCR过程中 ,模板GC含量过高是一个不利因素。如果设计扩增片段较长 ,则进一步增加了PCR扩增的难度。解决这一问题对于以PCR成功获取富含GC的长基因有非常重要的意义。以人巨细胞病毒pp65全基因 (约 1 95 0bp ,GC %为 67%)为例 ,在PCR系统中测试不同添加剂(甘油、乙醇、DMSO、甜菜碱等 )及各种组合 ,摸索扩增目的基因的最佳条件。结果发现 :无或单一的添加剂都不能获得目的基因片段 ,只有当同时使用DMSO和甜菜碱 ,并在适当浓度时才能够获得特异产物。在PCR系统中包含复合增强剂能有助于高GC %、长基因片段的扩增 ,为解决此类问题提供了一种有效的途径。     

流行性乙型脑炎减毒活疫苗SA14-14-2E基因的稳定性

分别对SA14-14-2(PHK8代)疫苗株及其原野毒株SA14和另2个疫苗传代株[SA14-14-2(PHK17代)和SA14-14-2(鼠脑1代)]的E区基因进行了序列测定.结果表明,乙脑病毒减毒活疫苗SA14-14-2在PHK细胞上连传至17代时,发现2个氨基酸突变(E-331、E-398),但不是回复突变.虽然在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传1代后发生E-107个氨基酸回复,但与野毒株毒力相比仍然相差很大,无毒力返祖现象.在疫苗的实际质控工作中,对上述与毒力相关的基因进行监测,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段.     

甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒的质量评价

目的 对5种国产甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒进行质量评估.方法 应用甲型H1N1流感病毒核酸国家参考品,按照各自试剂盒说明书的方法进行检测.结果 5种试剂盒在特异性、最低检出限及精密度方面均符合国家标准,不同厂家及同一厂家不同批次试剂盒之间在最低检出限及精密度方面都存在差异.结论 5种国产甲型H1N1流感病毒核酸检测试剂盒性能可靠,为此类试剂的生产研究以及临床评价提供依据.     

乙型脑炎病毒野毒株及其不同株减毒株E蛋白基因序列比较

为了解乙脑减毒活疫苗株SA14-12-1-7的神经毒力减毒机 制,用RT-PCR方法分别扩增不同减毒程度毒株的E基因,克隆、测序,继而对各毒株序列进 行比较.结果表明SA14-12-1-7强毒株与SA14-12-1-7-12-1-7株间只有3个氨基酸发生改变( E-107,E-176,E-439),SA14-12-1-7-12-1-7与SA14-12-1-7-9-7和SA14-12-1-7-5-3 株间有另3个氨基酸发生改变(E-138,E-279,E-315).SA14-12-1-7-9-7株与SA14-12-1-7-5-3株只有一个核苷酸NT -405不同,但未引起氨基酸改变.SA14-12-1-7疫苗株除保留SA14-12-1-7-12-1-7和SA14-12-1-7-9-7所改变的6个氨基酸外,另有2个氨基酸发生了改 变(E-177,E-264),共计在E区共发生8个氨基酸的替代.SA14-12-1-7-12-1-7株的 低神经毒力很不稳定而其余各株的弱毒特征很稳定.因此,E-176(Ile→Val),E-439(Lys→Arg)和 E-107(Leu→Phe)可能与神经外和神经内毒力减弱有关.E-138(Gul→Lys),E-315(Ala→Val)和 E-279(Lys→Met)的突变可能与神经毒力的减弱和稳定性相关.     

流感病毒诊断方法及试剂研究进展

流感病毒流行广泛、种类繁多、变异迅速,是人类最主要的健康威胁之一。在流感预防控制的不同环节,对流感病毒诊断试剂的灵敏度、特异性、简便性和使用成本有不同的要求。患者标本类型和采样质量对流感病毒诊断的准确性有较大影响。本文就当前国内外流感病毒诊断技术的研究现状和发展趋势进行了综述。     

EB病毒诊断学意义及其方法学进展

EB病毒可以导致多种疾病,其与鼻咽癌的关系已得到确认。近年来发现EB病毒在人体内感染情况对于鼻咽癌的诊断、临床分期、预后判断和监测放疗后转移复发等均具有重要意义。各种EB病毒检测方法应运而生。本文就EB病毒诊断方法进展及其意义作一综述。