白细胞介素－2分子α螺旋B中的活性相关区域

根据人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ａ螺旋Ｂ中氨基酸残基的空间分布选择性地突变了一些氨基酸残基,结果发现．５７Ｇｌｎ→Ｇｌｎ,６２Ｇｌｎ→Ｌｅｕ,６２Ｇｌｎ→Ａｒｇ和６５Ｐｒｏ→Ａｒｇ这些替换均使ＩＬ－２活性显著降低或丧失,而６３Ｌｅｕ→Ｓｅｒ或６４Ｌｙｓ→Ａｌａ对ＩＬ－２活性影响不大。从受体竞争抑制结合实验结果可知,上述不表现活性的突变体也同时丧失了与高亲和力受体的结合能力,这说明α螺旋Ｂ中这些位点对ＩＬ－２与受体结合有贡献,事实上,那些直接与受体β、γ亚基结合的残基所在螺旋为Ａ、Ｄ螺旋而非α螺旋Ｂ,由此我们认为α螺旋Ｂ虽不直接参与与受体β、γ亚基结合,但它在空间结构上对ＩＬ－２与受体β、γ亚基的结合产生了有利的影响,而５７Ｇｌｎ、６２Ｇｌｎ、６５Ｐｒｏ等残基则在此过程中发挥重要作用。     

白细胞介素－2中某些残基替换对活性的影响

用基因定点突变法研究了白细胞介素－２（ＩＬ－２）中某些氨基酸对生物活性的影响。将ＩＬ－２中３９Ｍｅｔ和４３Ｌｙｓ分别改为Ｐｒｏ,企图破坏此处α螺旋,突变体的ＣＤ图谱和生物活性均,不变,说明此处可能原来就不存在α螺旋．而将５２Ｇｌｕ．５３Ｌｅｕ,５４Ｌｙｓ分别改为Ｐｒｏ后,ＣＤ谱发生了变化,生物活性也显著下降。表明这些氨基酸处在α螺旋中,将它们改为Ｐｒｏ后,影响了ＩＬ－２的结构,并导致活性下降     

IL—2部分拮抗剂可用于IL—2突变体对受体亚基结合能…

用定点突变法分别得到了两个人白细胞介素－２（ＩＬ－２）的部分拮抗剂１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２以及一个为ＩＬ－２受体ａ亚基结合缺陷型的突变体６２Ｌｅｕ－ＩＬ－２,当将１５Ｖａｌ－ＩＬ－２或１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２与６２Ｌｅｕ－Ｉｌ－２共同保温时,６２Ｌｅｕ－ＩＬ－２的活性受到明显抑制,对此现象机理的分析表明１５Ｖａｌ－ＩＬ－２或１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２可用于ＩＬ－２受体亚基结合缺陷型突     

用定位突变方法对兔肌肉糖原磷酸化酶活性调控的研究

糖原磷酸化酶的活性可以通过酶分子中Ｓｅｒ１４的磷化及去磷酸化进行调控。Ｘ－射线衍射结构的结果已经推测在兔肌肉糖原磷酸化酶分子中Ａｒｇ６９对该酶磷酸化构型的发迹至关重要。定位突变这氨基酸残基,得到突变体Ａｒｇ６９→Ｇｌｕ,酶动力学分析显示磷酸化酶的活性,突变型酶比野生型酶大大降低,这与Ｘ－射线衍射结构的推测完全一致,也说明了Ａｒｇ６９在糖原磷酸化酶别构开关的分子构型上的重要作用。     

人白细胞介素—2第20位残基局部空间结构稳定性对活性的影响

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法,将人白细胞介素－２（ＩＬ－２）第２０位Ａｓｐ分别突变为Ａｒｇ,Ｌｙｓ和Ａｓｎ,比较第２０位残基碱性基团对ＩＬ－２活力的影响,结果＾２０Ａｓｐ突变为碱性残基时,ＩＬ－２活性急剧下降,但突变为Ａｒｇ时所导致的活性下降较突变为Ｌｙｓ时所导致的活性下降较突变为Ｌｙｓ严重３０００倍以上。从空间结构变化上对这２个碱性残基造成的如此大的活性差异进行了分析,发现＾２０Ａｒｇ突变后对     

人白细胞介素－2第20位残基局部空间结构稳定位对活性的影响

用寡核苷酸诱导的基因定位突变法,将人白细胞介素－２（ＩＬ－２）第２０位Ａｓｐ分别突变为Ａｒｇ、Ｌｙｓ．和Ａｓｎ,比较第２０位残基碱性基因对ＩＬ－２活力的影响,结果２０Ａｓｐ突变为碱性残基时,ＩＬ－２活性急剧下降,但突变为Ａｒｇ时所导致的活性下降较突变为Ｌｙｓ严重３０００倍以上,从空间结构变化上对这２个碱性残基造成的如此大的活性差异进行了分析,发现２０Ａｒｇ突变后对。１２１Ｔｒｐ的微环境有极为显著的影响。结果提示２０Ａｓｐ在与β亚基作用的同时,其局部空间结构的稳定对维持ＩＬ－２的生物学活性也有重要作用。     

3个六肽的胰岛素受体结合和体内生物活性

为了研究胰岛素受体结合部位的结构和功能,设计并用固相方法合成了３个六肽．在浓度大于１×１０３ｎｍｏｌ／Ｌ时,ｃｙｃｌｏ（Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ）具有明显的胰岛素受体结合活力;Ｈ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｇｌｙ－ＯＨ的这一活力则不明显;而Ｈ－Ｇｌｙ－Ｇｌｕ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｐｈｅ－ＯＨ则增强胰岛素和其受体的亲和性．然而,它们都没有体内生物活性．这表明：环六肽部分模拟了胰岛素受体结合部位的空间构象;胰岛素受体结合部位的疏水性和其中的Ｂ２３Ｇｌｙ－Ｂ２４Ｐｈｅ－Ｂ２５Ｐｈｅ对胰岛素和其受体的结合起重要作用．     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究──Ⅰ结构中氢键相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具有Ｎ－糖苷酶活性,２．０Ａ分辨率的三维结构已经测定。α－苦瓜子蛋白中总共有３５３个氢键,其中主链原子间氢键１６５个,主链原子与侧链原子间氢键５４个,侧链原子间氢键２１个,蛋白分子中原子与溶水剂的氢键１１３个,主链Ｃ＝Ｏ,主链ＮＨ及侧链分子结构中有９５％的残基能生成氢键,Ａｓｐ．Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ具有较强的生成多个氢键的能力,并对１３个没有任何氢键的残基作了分析。Ａｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＧｌＵ、Ｇｌｎ在α螺旋中出现税率较大,Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ在β结构中占了一半以上,Ａｒｇ容易形成远程的氢键,而Ｓｅｒ、Ｔｈｒ则容易形成近程氢键。某些氢键,特别是保守残基间的氢键,对形成蛋白分子局部特征构象和活性部位的特征构象有影响,α－苦瓜子蛋白的特定折叠方式对其与溶剂水分子成氢键有影响。     

α－苦瓜子蛋白晶体结构中的次级相互作用的研究──Ⅰ结构中氢键相互作用的分析

α－苦瓜子蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具有Ｎ－糖苷酶活性,２．０Ａ分辨率的三维结构已经测定。α－苦瓜子蛋白中总共有３５３个氢键,其中主链原子间氢键１６５个,主链原子与侧链原子间氢键５４个,侧链原子间氢键２１个,蛋白分子中原子与溶水剂的氢键１１３个,主链Ｃ＝Ｏ,主链ＮＨ及侧链分子结构中有９５％的残基能生成氢键,Ａｓｐ．Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ具有较强的生成多个氢键的能力,并对１３个没有任何氢键的残基作了分析。Ａｎ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＧｌＵ、Ｇｌｎ在α螺旋中出现税率较大,Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｔｙｒ、Ｉｌｅ、Ｔｈｒ在β结构中占了一半以上,Ａｒｇ容易形成远程的氢键,而Ｓｅｒ、Ｔｈｒ则容易形成近程氢键。某些氢键,特别是保守残基间的氢键,对形成蛋白分子局部特征构象和活性部位的特征构象有影响,α－苦瓜子蛋白的特定折叠方式对其与溶剂水分子成氢键有影响。     

白细胞介素－2第17和20位残基在结构功能中的重要性研究

用基因定位突变法,将白细胞介素－２（ＩＬ－２）分子中１７Ｌｅｕ和２０Ａｓｐ进行一系列突变,并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ时,ＩＬ－２的空间结构无明显变化。生物活性却显著下降;２０Ａｓｐ突变为Ｌｅｕ,以及１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ对调后,均导致ＩＬ－２的空间结构发生变化,并严重影响其生物活性。上述结果说明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ后对活性的影响并非由空间结构变化所引起,而与残基本身性质有关：１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ这两个重要的残基,必须位于各自特定的空间位置,才能发挥其生物作用。     

白细胞介素－2镇痛功能位点的研究

白细胞介－２（ＩＬ－２）是重要的免疫调节因子,近来发现还有中枢镇痛作用,用不同ＩＬ－２突变体测定其对大鼠痛阈的影响,发现完全丧失免疫刺激作用的２０Ｌｅｕ－ＩＬ－２（２０Ａｓｐ→Ｌｅｕ）仍能显著提高大鼠的痛阈,其作用强度与天然ＩＬ－２无显著差异,而另一突变体４５Ｖａｌ－ＩＬ－２（４５Ｔｙｒ→Ｖａｌ）虽保留免疫学活性却不能提高大鼠的痛阈;这些结果证明ＩＬ－２分子中具有镇痛作用与具有免疫作用与具有免疫作     

从织锦芋螺中克隆α芋螺毒素序列

为了从我国南海产织锦芋螺（Ｃｏｎｕｓｔｅｘｔｉｌｅ）中分离新的毒素序列并研究其应用价值,进行了织锦芋螺毒素基因的分离工作．从织锦芋螺毒管中提取ｍＲＮＡ,以Ａ族芋螺毒素的信号肽编码部分和３′端非翻译部分的保守序列为引物,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增和序列分析方法获得新的芋螺毒素序列．结果得到两种不同的α芋螺毒素序列,两者都属于α４／７亚型芋螺毒素,预测其成熟肽序列分别为Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｓｅｒ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｌｅｕ－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ（Ｃ端Ｇｌｙ可能被酰胺化）和Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｃｙｓ－Ｃｙｓ－Ｓｅｒ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ａｌａ－Ｃｙｓ－Ａｓｎ－Ｖａｌ－Ａｓｐ－Ｈｉｓ－Ｐｒｏ－Ｇｌｕ－Ｉｌｅ－Ｃｙｓ－Ａｒｇ．采用传统的生化分离手段尚未从织锦芋螺中获得过α芋螺毒素序列,这两种α芋螺毒素作用的种属特异性、受体类型特异性和在小细胞肺癌的诊断和治疗中的应用价值有待进一步研究     

B8Gly在胰岛素结构模体中的可能作用

在胰岛素结构模体ｎ１－Ｃｙｓ－Ｇｌｙ－Ｘ１０－Ｃｙｓ－ｎ２－Ｃｙｓ－Ｃｙｓ－Ｘ３－Ｃｙｓ－Ｘ８－Ｃｙｓ－ｎ３中,有７个绝对保守的氨基酸残基,只有位于Ｂ８位的是Ｇｌｙ。通过定点突变将其改变为Ａｌａ,得到「Ｂ８Ａｌａ」人胰岛素,其受体结合能力和体内生物活力分别为天然猪胰岛素的２．５％和１０％。「Ｂ８Ａｌａ」人胰岛素和重组人胰岛素的远紫外圆二色谱比较表明,「Ｂ８Ａｌａ」人胰岛素的α－螺旋的相对含量有一家     

信号肽C—端和成熟蛋白N—端氨基酸序列的变化对α—淀粉酶分泌作用…

本文利用ｐＡｍｙ４１３质粒通过定点诱变技术,在α－淀粉酶基因的２８７和２９１位分别引入１个Ｇ和Ｃ,代替原来的Ｔ和Ｇ,构建成质粒ｐＡＭＹ４１３Ｂ使成熟的α－淀粉酶Ｎ－端＾７Ｌｅｕ＾８Ｍｅｔ变为＾７Ａｒｇ＾８Ｉｌｅ,ｐＡｍｙ４１３Ｌα－淀粉酶信号序列因引入１个多酶切点接头而比ｐＡｍｙ４１３的２９个氨基酸增加了１３个氨基酸,创造了１个新的信号肽酶Ｉ识别窗口Ａｌａ－Ｇｌｎ－ＡｌａＳｅｒ,利用计算机对该信号     

凤眼莲根分泌物氨基酸组分对根际肠杆菌属F_2细菌的趋化作用

凤眼莲（Ｅｉｃｈｈｏｒｎｉａｃｒａｓｓｉｐｅｓ）的根分泌物中含有Ｍｅｔ等多种氨基酸,其中Ｍｅｔ、ＧＡＢＡ、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ和Ｌｅｕ（１０－７～１０－２ｍｏｌ·Ｌ－１）均对凤眼莲的根际肠杆菌属Ｆ２（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｓｐ．Ｆ２）细菌有强烈的正趋化作用;Ｇｌｕ、Ｔｈｒ和Ｈｉｓ（１０－７～１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１）也对该菌有一定的正趋化作用;而Ｌｙｓ、Ｃｙｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ｐｒｏ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ和Ｔｙｐ则对该菌表现出一定的负趋化作用．对细菌的正趋化作用存在一个趋化物的最适浓度范围．具有正趋化作用的氨基酸在凤眼莲根际的浓度都较高,而具有负趋化作用的浓度则较低,这正是凤眼莲与该根际细菌结合为根际微生态系统的原因之一．     

信号肽C—端和成熟蛋白N—端氨基酸序列的变化时α—淀粉酶分泌作用的影响

本文利用ｐＡｍｙ４１３质粒通过定点诱变技术,在α－淀粉酶基因的２８７和２９１位分别引入１个Ｇ和Ｃ,代替原来的Ｔ和Ｇ,构建成质粒ｐＡｍｙ４１３Ｂ,使成熟的α－淀粉酶Ｎ－端（７）Ｌｅｕ（８）Ｍｅｔ变为（７）Ａｒｇ（８）Ｉｌｅ。ｐＡｍｙ４１３Ｌα－淀粉酶信号序列因引入１个多酶切点接头而比ｐＡｍｙ４１３的２９个氨基酸增加了１３个氨基酸,创造了１个新的信号肽酶Ｉ识别窗口Ａｌａ－Ｇｌｎ－Ａｌａ↓Ｓｅｒ,利用计算机对该信号肽进行了二级结构分析。这两株突变株产酶能力分别为野生株（ｐＡｍｙ４１３）的３％和３６％;胞外α－淀粉酶的分子量同于野生株;末端分析显示,成熟酶第一个氨基酸为Ａｌａ,表明信号肽酶Ｉ在野生型识别窗口Ａｌａ－Ａｌａ－Ａｌａ↓Ａｌａ处切割。结果还表明,Ｂ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓα－淀粉酶在Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ中分泌作用属共翻译转移模型     

鲫鱼视网膜谷氨酸受体和GABA受体在爪蟾卵母细胞中的表达

我们以两栖类卵母细胞为功能表达系统,通过注射鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓｃａｒａｓｓｉｕｓ）视网膜ｍＲＮＡ,利用电压箝及药物灌流手段,系统地研究了鲫鱼视网膜内氨基酸受体的类型和特征,结果如下：（１）Ｇｌｕ受体：ＫＡ可以诱发明显的去极化电流,而且Ｄｉａｚｏｘｉｄｅ能增强ＫＡ诱导的反应,这提示鲫鱼视网膜内某些Ｃｌｕ受体是ＡＭＰＡ选择性亚型（ＡＭＰＡ－ｐｒｅｆｅｒｒｉｎｇｓｕｂｔｙｐｅ）。（２）ＣＡＢＡ受体：ＧＡＢＡ能诱发一个快速、光滑的内向电流,绝大部分对ＧＡＢＡ的反应可被ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ所压抑,而ＧＡＢＡ＿Ｂ受体的激动剂ｂａｃｌｏｆｅｎ则无任何作用,这提示,鲫鱼视网膜内大部分是ＧＡＢＡ＿Ａ受体。     

蛇毒锯鳞蝰素基因Leul4－Lys15－Glu16的定点突变

本研究的目的是利用蛋白质工程定点突变的方法,在蛇毒锯鳞蝰素基因分子上增加另一个保守序列ＲＧＤ（１４位精氨酸残基,１５位甘氨酸残基,１６位天冬氨酸残基）,以其增加该分子的生物活性,并探讨蛋白质一级结构,空间结构和功能的关系。在质粒ｐＪＣ２６４的基础上,利用ＰＣＲ定点突变方法,对蛇毒锯鳞蝰素基因Ｌｅｕ１４－Ｌｙｓ１５－Ｇｌｕ１６进行定点突变,使相应的ＤＮＡ片段变成表达Ａｒｇ１４－Ｇｌｙ１５－Ａｓｐ１６的核苷酸顺序,经酶切和ＤＮＡ测序鉴定正确。ＣＮＢｒ裂解后,用反相ＨＰＬＣ分析,分离制备突变体蛇毒锯鳞蝰素,制备的突变体蛇毒锯鳞蝰素的Ｎ－末端１０个氨基酸残基与天然蛇毒锯鳞蝰素的相同。在人的富含血小板血浆测活体系中,经１０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＤＰ诱导,突变体蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为３．０×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ;重组野生型蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ５０为４．０×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ;天然蛇毒锯鳞蝰素的ＩＣ_（５０）为２．８×１０~（－７）ｍｏｌ／Ｌ。此外,就蛇毒锯鳞蝰素中保守序列Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ以及其空间构象对蛇毒锯鳞蝰素抑制血小板凝集之间的关系进行了讨论。     

白细胞介素-2对大鼠海马谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的影响———免疫组织化学和狭线杂交研究

本研究应用免疫组织化学（ＰＡＰ法）的方法,观察到侧脑室内注射白细胞介素２（ＩＬ２）后,大鼠海马回和齿状回内谷氨酸（Ｇｌｕ）免疫反应阳性神经元的数量明显减少、胞体皱缩、突起及其分支减少;γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应阳性神经元的数量、突起及其分支皆减少。用３２Ｐ标记的ＧＡＢＡＴｃＤＮＡ探针对大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ进行狭线杂交结果显示：实验组大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ的含量明显增多。由于ＧＡＢＡ在ＧＡＢＡＴ的作用下,可转变为Ｇｌｕ,因此,以上结果表明ＩＬ２不仅可影响海马神经元合成和释放Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ,而且还使Ｇｌｕ的释放量大于其合成量。这些变化可能与癫痫的发病机理有关     

白细胞介素—2第17和20位残基在结构功能中的重要性研究

用基因定位突变法,将白细胞介素－２分子中１７Ｌｅｕ和２０Ａｓｐ进行一系列突变,并测定各突变体生物活性与空间结构的变化。分析结果表明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ时,ＩＬ－２的空间结构无明显变化,生物活性却显著下降;２０Ａｓｐ突变的为Ｌｅｕ,以及１７Ｌｅｕ与２０Ａｓｐ对调后,均导致ＩＬ－２的空间结构发生变化,并严重影响其生物活性,上述结果说明１７Ｌｅｕ突变为Ａｓｐ后对活性的影响并非由空间结构变化所引起,而与