人白细胞介素－2的两个部分拮抗剂

通过定点诱变技术得到６个生物活性剧烈下降的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）突变体,其中两个突变体即１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２可以在一定浓度范围内使ＩＬ－２的生物效应降低。在对高亲和力ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）的竞争抑制实验中,１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－Ｉｌ－２又表现了一定的竞争能力。这些结果表明１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２可部分拮抗天然ＩＬ－２的作用。结合Ｉ     

镉离子诱导BA/F3β细胞发生奇特的细胞凋亡

细胞凋亡一般都伴随有ＤＮＡ 片段化, 活性氧含量增加, 并能被过量的Ｂｃｌ２ 所抑制。以ＢＡ／Ｆ３β细胞为模型, 利用ＭＴＴ 检测、Ｈｏｃｈｅｓｔ 染色以及透射电镜检测等技术却发现, 镉离子虽然可以诱导该细胞凋亡, 但是这种凋亡没有ＤＮＡ 片段化, 也没有活性氧含量增加。此外, 过量Ｂｃｌ２ 对这种凋亡也没有保护作用。因此, 可以确认镉离子诱导ＢＡ／Ｆ３β细胞发生了奇特的细胞凋亡。     

自杀基因的作用及其机制

自杀基因的作用及其机制郑仲承（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词基因治疗,自杀基因,作用机制基因治疗是一种高技术含量很多的新兴医疗技术,它一出现,就在实验研究和临床试验方面取得令人瞩目的成果。但是,这个技术面临一些亟需解决的问题,...     

白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合基因的克隆及高效表达

利用聚合酶链式反应和寡核苷酸介导的定向诱变技术构建了白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素IL2-PE40、IL2-PE40KDEL、IL2-PE66~(4Glu)和IL2-PE66~(4Glu)KDEL融合基因的原核表达重组质粒,并实现了高效表达,表达产物占菌体总可溶蛋白的20％～30％。此外,由于这一表达质粒在IL-2cDNA与PE基因连接处引入了唯一的SmaⅠ位点,其5＇、3＇端分别含有唯一的EcoRⅠ、PstⅠ位点,因此可方便地用其它基因替换IL-2或PE基因而获得相应融合蛋白的表达质粒。     

白细胞介素－2的PEG化

用自制的氨基ＰＥＧ化试剂ｒＩＬ－２进行化学修饰,研究了试剂浓度,溶液ｐＨ,反应时间等与ＰＥｃａ－ｒＩＬ－２产率及ＩＬ－２活性保持之间的关系,建立了一套获得稳定修饰度的ＰＥＧ－ｒＩＬ－２的方法。研究发现,反应时间跟修饰度关系不大;溶液ｐＨ对修饰度有一定的影响,中性ｐＨ以上反应都可进行;而试剂浓度直接决定修饰度的高低,过量越多,修饰度越高,而生物活性保留也越低;但低度修饰,对活性几乎没有影响,可保留活性在９５％左右。     

白细胞介素－2中某些残基替换对活性的影响

用基因定点突变法研究了白细胞介素－２（ＩＬ－２）中某些氨基酸对生物活性的影响。将ＩＬ－２中３９Ｍｅｔ和４３Ｌｙｓ分别改为Ｐｒｏ,企图破坏此处α螺旋,突变体的ＣＤ图谱和生物活性均,不变,说明此处可能原来就不存在α螺旋．而将５２Ｇｌｕ．５３Ｌｅｕ,５４Ｌｙｓ分别改为Ｐｒｏ后,ＣＤ谱发生了变化,生物活性也显著下降。表明这些氨基酸处在α螺旋中,将它们改为Ｐｒｏ后,影响了ＩＬ－２的结构,并导致活性下降     

126Gln是人白细胞介素-2与其受体γ亚基结合的残基

人白细胞介素-2(IL-2)的126Gln是一个保守氨基酸,将126Gln突变为Asp后,测定了这一突变体与白细胞介素-2受体(IL-2R)不同亚基组合的结合能力,结果表明,突变体 126Asp-IL-2与 IL-2Rα βγ复合体可表现出较高的亲和力,与 IL-2 α,β复合体亲和力正常,而与 IL-2Rβγ复合体不具备亲和力.由此证实126Gln是人 IL-2与 IL-2Rγ亚基结合的残基.     

氨基PEG化试剂的合成及其修饰能力的测定

分别用氰脲酰氯法及Ｎ－羟基丁二酰亚胺活性酯法合成了蛋白质的氨基ＰＥＧ化试剂ｍＰＥＧｃｃ和ｍＰＥＧ－ＧＳ,并研究了它们对蛋白质的修饰作用。在合成过程中,通过分析反应体系中微量水分的存在对ｍＰＥＧｃｃ合成效率的影响,及溶剂中小分子可活化杂质成分对ｍＰＥＧ－ＧＳ合成产物质量的影响,发现去水剂的存在,可使ｍＰＥＧｃｅ产率提高７倍;二氧六环优于ＤＭＦ,且二氧六环的预处理也很重要。同时,为了测定活化ＰＥＧ修饰蛋白质的效能,首次以ＢＳＡ为模型蛋白,建立起一种测定活化ＰＥＧ修饰能力的方法,应用此方法能直观而又准确地比较各种方法活化的ＰＥＧ对蛋白质的修饰能力,具有普遍的意义。     

蛋白质定点PEG化研究：97Cys－IFH－γ的巯基专—PEG修饰

蛋白质定点ＰＥＧ化研究：９７Ｃｙｓ－ＩＦＨ－γ的巯基专—ＰＥＧ修饰唐微,常远,徐　飞,郑仲承,刘新垣（中国科学院上海生物化学研究所,２０００３１）关键词人干扰素－γ;定点修饰;半胱氨酸目前进行的ＰＥＧ化反应,多是针对蛋白质肽链上自由末端氨基进行的,由...