构建多顺反子表达载体的有效工具——FMDV 2A

近年来肿瘤多基因治疗倍受关注,然而目前缺少一种有效的构建多顺子的工具。传统的构建多顺反子的工具,如IRES等,由于存在结构大,上下游基因表达差异显著等缺陷,严重限制了其应用。FMDV2A,因其具有结构小、剪切效率高等优点为多基因治疗带来了新的希望。主要介绍了FMDV2A的特性、"剪切"活力及其在构建多顺反子载体中的应用。     

人淋巴细胞中发现2′—5′—三腺苷酸受体

通过合成的^3H-PPPA2′P5′A2′P5′A（2′－5′P3A3）与人淋巴细胞进行结合反应,结果表明：人淋巴细胞质膜存在着2′－5′P3A3受体。又通过用ATP、UTP与^3H-2′-5′P3A3竞争抑制实验表明,^3H－2′－5′P3A3与淋巴细胞膜受体的结合为特异性结构,结合率受^3H－2′－5′P3A3浓度、pH等因素影响。     

白细胞介素－2的PEG化

用自制的氨基ＰＥＧ化试剂ｒＩＬ－２进行化学修饰,研究了试剂浓度,溶液ｐＨ,反应时间等与ＰＥｃａ－ｒＩＬ－２产率及ＩＬ－２活性保持之间的关系,建立了一套获得稳定修饰度的ＰＥＧ－ｒＩＬ－２的方法。研究发现,反应时间跟修饰度关系不大;溶液ｐＨ对修饰度有一定的影响,中性ｐＨ以上反应都可进行;而试剂浓度直接决定修饰度的高低,过量越多,修饰度越高,而生物活性保留也越低;但低度修饰,对活性几乎没有影响,可保留活性在９５％左右。     

白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素融合基因的克隆及高效表达

利用聚合酶链式反应和寡核苷酸介导的定向诱变技术构建了白细胞介素2-绿脓杆菌外毒素IL2-PE40、IL2-PE40KDEL、IL2-PE66~(4Glu)和IL2-PE66~(4Glu)KDEL融合基因的原核表达重组质粒,并实现了高效表达,表达产物占菌体总可溶蛋白的20％～30％。此外,由于这一表达质粒在IL-2cDNA与PE基因连接处引入了唯一的SmaⅠ位点,其5＇、3＇端分别含有唯一的EcoRⅠ、PstⅠ位点,因此可方便地用其它基因替换IL-2或PE基因而获得相应融合蛋白的表达质粒。     

两种新型白细胞介素-2的热稳定优越性

研制成两种新型白细胞介素-2(新型Il,-2),其一为125Ser-IL-2,另一为125Ala—Ⅱ2(即原型IL-2中125位cys分别被Ser或Ala取代)。两种新型IL-2均已被高度纯化,并已完成了中试,获准临床应用。发现新型IL-2的热稳定优越性。在65℃加热,新型IL-2的稳定性高于原型,失活比原型慢,被保留的活性也较原型多。在0．1％SDS中能使失活的IL-2逐渐恢复一定的活性,也是新型IL-2恢复活性高。同时,比较了其它条件下这三种重组rIL-2的稳定性及SDS对其复性的影响,发现三者之间差异很大。上述结果均证明：125A1a—IL-2的热稳定性最好,125sER-IL-2次之,原型较新型差。     

白细胞介素－2中某些残基替换对活性的影响

用基因定点突变法研究了白细胞介素－２（ＩＬ－２）中某些氨基酸对生物活性的影响。将ＩＬ－２中３９Ｍｅｔ和４３Ｌｙｓ分别改为Ｐｒｏ,企图破坏此处α螺旋,突变体的ＣＤ图谱和生物活性均,不变,说明此处可能原来就不存在α螺旋．而将５２Ｇｌｕ．５３Ｌｅｕ,５４Ｌｙｓ分别改为Ｐｒｏ后,ＣＤ谱发生了变化,生物活性也显著下降。表明这些氨基酸处在α螺旋中,将它们改为Ｐｒｏ后,影响了ＩＬ－２的结构,并导致活性下降     

白细胞介素－2中枢镇痛作用途径的探讨

抗ＩＬ－２受体α亚基的单克隆抗体不能阻断ＩＬ－２的中枢镇痛作用,以及丧失与ＩＬ－２受体β亚基结合能力的ＩＬ－２突变体仍具有提高大鼠痛阈的能力,这表明ＩＬ－２的中枢镇痛作用并不是通过ＩＬ－２受体所介导,亦表示ＩＬ－２的免疫和镇痛作用是通过不同的受体途径实现的。加之内源性阿片肽与ＩＬ－２分子有着共同的抗原决定基和结构相似性,提示ＩＬ－２可以与阿片受体直接结合产生中枢镇痛效应。从放射免疫法测定的ＩＬ－２侧脑室注射后不同时间大鼠脑内不同核团的内源性阿片肽含量,推测ＩＬ－２的中枢镇痛作用可能还与弓状核、室旁核、蓝斑等核团的β－ＥＰ和ＬＥＫ有关。     

白细胞介素2的中枢作用

白细胞介素２（ＩＬ－２）不仅是重要的免疫调节因子,而且具有重要的中枢调节作用。业已证实,脑内存在着ＩＬ－２和ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）,ＩＬ－２能明显地影响神经元和神经胶质细胞的生长,并能作用于下丘脑－垂体－肾上腺轴而影响内分泌,还能对电生理、行为等产生影响。本文简述了ＩＬ－２的中枢作用。     

人白细胞介素－2的两个部分拮抗剂

通过定点诱变技术得到６个生物活性剧烈下降的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）突变体,其中两个突变体即１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２可以在一定浓度范围内使ＩＬ－２的生物效应降低。在对高亲和力ＩＬ－２受体（ＩＬ－２Ｒ）的竞争抑制实验中,１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－Ｉｌ－２又表现了一定的竞争能力。这些结果表明１５Ｖａｌ－ＩＬ－２和１２６Ａｓｐ－ＩＬ－２可部分拮抗天然ＩＬ－２的作用。结合Ｉ     

pppA2′p5′A2′p5′A保护病毒感染细胞的普遍性

pppA2′p5′A2′p5′A(简称2′-5′P_3A_3)是干扰素作用于细胞后诱导产生的物质。干扰素的作用机理很复杂,其中之一是2′-5′寡聚腺苷酸合成酶的活力增加,此酶以ATP为底物合成2′-5′P_3A_3及其同系物2′-5′P_3An。但2′-5′P_3A_3或2′-5′P_3A_n本身是否具有抗病毒作用,干扰素的抗病毒作用是否通过2′-5′P_3A_3或2′-5′P_3A_n而进行,这是一个很