地衣芽孢杆菌TS-01固态发酵培养基的优化

分离到一株饲用地衣芽孢杆菌TS-01,初步研究了该菌的固态发酵培养基,得到的最优发酵培养基为(g/kg干固体物料)含水量600、红糖7、米糠420、麸皮580.当采用此种配比的培养基,接种量为10%(v/w),发酵2 d后,菌体浓度可达9.15×109CFU/g鲜曲,芽孢浓度可达7.50×109CFU/g鲜曲,芽孢形成率在80%以上.     

蜡质芽孢杆菌DLSL-2发酵条件探讨及培养基优化*

对蜡质芽孢杆菌(Bacilluscereus)DLSL2深层液体发酵的主要影响因子温度、转速、初始pH值等进行了单因素实验探讨,确定了最佳培养条件:温度为30℃、转速为250r/min、初始pH值为7.0。并用均匀设计法对其发酵培养基进行了优化,优化验证实验结果为7.1×10⁹cfu/mL明显高于原发酵培养基结果3.2×10⁹cfu/mL。     

一株维氏气单胞菌发酵培养基优化及其制备疫苗免疫效力比较

采用单因素试验、响应面试验法对维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）发酵培养基的氮源、碳源、无机盐和磷酸盐成分及用量进行优化组合,确定优化培养基组成：胰蛋白胨10.8 g/L,葡萄糖5.0 g/L,牛肉膏3.0 g/L,磷酸二氢钾2.0 g/L,硫酸镁0.4 g/L,NaCl 5.0 g/L。并与基础培养基的发酵活菌数、制备的灭活疫苗免疫效力进行比较,经过验证试验绘制维氏气单胞菌在优化培养基条件下的7 L发酵罐生长曲线。在优化发酵培养基条件下,维氏气单胞菌活菌数为5.94×10⁹ cfu/mL,比基础培养基增幅43.13%;制备的灭活疫苗相对保护率为77.78%,比基础培养基提高了14.81%。7 L发酵罐发酵培养10 h,活菌数达到最大8.85×10⁹ cfu/mL。通过对发酵培养基的优化,可以获得低成本、优质高效的维氏气单胞菌发酵菌液,为今后维氏气单胞菌灭活疫苗规模化发酵培养提供参考。     

红树林植物促生菌SZ7-1 菌株的培养基优化

采用响应面分析法对红树林植物促生菌SZ7-1 菌株发酵培养基进行了优化。首先利用Plackett-Burman (PB)设计对影响SZ7-1 生长的11 个营养因素进行评价, 并筛选出显著影响因子:玉米糖浆、酵母膏和K₂HPO₄; 其次用最陡爬坡实验逼近以上三因素最优水平; 最后采用响应面法对该3 个显著因素的最佳水平范围进行研究, 得到的最佳浓度为: 玉米浆28 g/L、酵母膏14 g/L和K₂HPO₄ 2.2 g/L。在此条件下, 培养20 h 后SZ7-1 菌数达到2.6×10¹⁰ CFU/mL, 与优化前基础培养基、LB 和牛肉膏蛋白胨培养基中生长的菌数相比, 分别提高了12.4、2.4 和5.5 倍。     

Cd2+对角突臂尾轮虫和曲腿龟甲轮虫的急性毒性和生命表统计学参数的影响

采用急性毒性试验研究了(25±1)℃下Cd²⁺对角突臂尾轮虫(Brachionus angularis)和曲腿龟甲轮虫(Keratella valga)的24 h LC₅₀值, 采用生命表实验方法研究了(25±1)℃下、以密度为1.0×10⁶ 个细胞/mL的斜生栅藻为轮虫食物时不同浓度(7.0、12.0、20.4、34.6、58.8,100.0 μg/L)的Cd²⁺对角突臂尾轮虫和曲腿龟甲轮虫生命表统计学参数的影响。结果表明, Cd²⁺对角突臂尾轮虫和曲腿龟甲轮虫幼体的24 h LC₅₀值分别为95.5 μg/L和231.9 μg/L。Cd²⁺浓度对角突臂尾轮虫的种群内禀增长率具有显著的影响(P<0.05), 对曲腿龟甲轮虫的世代时间、生命期望和净生殖率具有显著的影响(P<0.05)。与对照组相比, 100.0 μg/L的Cd²⁺显著降低了角突臂尾轮虫的种群内禀增长率; 34.6 μg/L和58.8 μg/L的Cd²⁺显著降低了曲腿龟甲轮虫的世代时间, 34.6和100.0 μg/L的Cd²⁺显著降低了曲腿龟甲轮虫的生命期望, 34.6 μg/L的Cd²⁺显著降低了曲腿龟甲轮虫的净生殖率。角突臂尾轮虫对Cd²⁺污染的敏感性较曲腿龟甲轮虫强, 各生命表统计学参数对污染物的敏感性因轮虫种类的不同而异。     

沙打旺胚性原生质体培养优化及高频再生植株

外植体类型和光照条件决定沙打旺胚性愈伤组织的形成。用生长10d的胚性愈伤组织可分离到1.2×10⁶个/g(原生质体/细胞),活力超过80%。当原生质体以1.0×10⁵/mL的植板密度培养在含0.6%琼脂糖附加1.5mg/L 2,4-D、0.5mg/L BA和0.5mol/L葡萄糖的培养基(无机盐降为1/4)中,植板率为16.8%。条件培养基显著促进原生质体的生长发育。长大的细胞克隆经2周4℃低温处理后转到含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA分化培养基上,体细胞胚胎发生频率高达70%,每克细胞产生的体细胞胚数在200个以上。成熟的体细胞胚转到无激素的1/2MS培养基中即分化成苗,再生植株为正常的二倍体。     

自絮凝酵母SPSC01在组合反应器系统中酒精连续发酵的研究

建立了一套由四级磁力搅拌发酵罐串联组成、总有效容积4000mL的小型组合生物反应器系统 ,其中一级罐作为种子培养罐。以脱胚脱皮玉米粉双酶法制备的糖化液为种子培养基和发酵底物 ,进行了自絮凝颗粒酵母酒精连续发酵的研究。种子罐培养基还原糖浓度为100g L ,添加 (NH₄)₂HPO₄ 和KH₂PO₄ 各 20g L ,以0.017h^-1 的恒定稀释速率流加 ,并溢流至后续酒精发酵系统。发酵底物初始还原糖浓度 220g/L ,添加 (NH₄)₂HPO₄ 15g/L和KH₂PO₄2 5g/L ,流加至第一级发酵罐 ,稀释速率分别为 0.017、0.025、0.033、0.040和0.05 0h^-1。实验数据表明 ,自絮凝颗粒酵母在各发酵罐中呈部分固定化状态 ,在稀释速率0.040h^-1 条件下 ,发酵系统呈一定的振荡行为 ,其他四个稀释速率实验组均能够达拟稳态。当稀释速率不超过 0 0 33h^-1 ,流出末级发酵罐的发酵液中酒精浓度可以达到 12 % (V/V)以上 ,残还原糖和残总糖分别在 0 11%和 0 35 % h^-1,流出末级发酵罐的发酵液中酒精浓度可以达到12%（V/V）以上,残还原糖和残总糖分别在0.11%和0.35%（W/V）以下。在稀释速率为0.033h^-1时,计算发酵系统酒精的设备生产强度指标为3.32（g·L^-1·h^-1）,与游离酵母细胞传统酒精发酵工艺相比,增加约1倍。     

再生丝素固定的酶标免疫传感器的研究

所研究的酶标免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (兔IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG HRP)与其识别结合。利用H₂O₂ 将抗原抗体结合的电位响应信号放大采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低浓度可达 1.2×10^-10 mol/L ,标准曲线的线形范围在4.1×10^-7～1.2×10^-10 mol/L ,回归方程为: E=-1049+721g[IgG],响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 3 0min。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶标免疫传感器 ,在临床检测、环境监测、HLA个人身份鉴定等领域都有着广阔的应用前景。     

甘草内生细菌的分离及拮抗菌株鉴定

从乌拉尔甘草健康植株的根茎叶中共分离到内生细菌98株,经初步鉴定芽孢杆菌属（Bacillus sp.）为优势种群,约占30%;从不同生长年份甘草的根、茎、叶组织中分离内生细菌种群密度从5.0×10⁴ cfu/g～2.9×10⁷ cfu/g鲜重不等。采用平板对峙方法筛选出6株对植物病原菌有明显体外拮抗活性的菌株,通过菌落、菌体形态观察、生理生化反应及16S rDNA序列分析,同时结合Biolog细菌自动鉴定系统验证,鉴定这6株拮抗菌分属萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)、多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、Paenibacillus ehimensis。     

响应面法优化赤红球菌HDRR2Y发酵培养参数

通过响应面法对硝化菌——赤红球菌（Rhodococcus ruber）HDRR2Y的发酵培养参数进行优化,以提高其活菌数。首先通过单因素实验筛选出赤红球菌HDRR2Y的最优碳、氮源,并采用Plackett-Burman实验得到影响活菌数的显著因素,然后进行响应面实验,经最陡爬坡及回归分析得出最佳培养参数,最后以摇瓶实验检验其合理性。结果显示,赤红球菌HDRR2Y的最优碳、氮源分别为乙酸钠和酵母膏+蛋白胨+氯化铵（1：1：1,质量比）,显著影响活菌数的因素有碳、氮源及温度,经回归分析得到的最优培养参数为乙酸钠5.48 g/L、酵母膏+蛋白胨+氯化铵4.96 g/L、温度29.24 ℃、pH 7.0、转速200 r/min、MgSO₄ 0.2 g/L, KH₂PO₄ 0.5 g/L, NaCl 9 g/L, CaCl₂ 0.5 g/L, MnSO₄ 0.025 g/L, FeSO₄ 0.05 g/L, C₅H₉NO₄ 0.002 g/L、接种活菌数1×10⁴ cfu/mL、装液量40%(体积分数)、培养时间36 h。优化后的实际活菌数为1.54×10⁹ cfu/mL,远高于优化前的活菌数（1.8×10⁸ cfu/mL）(P<0.01)。因此,采用响应面法优化赤红球菌HDRR2Y的发酵培养参数能大幅提高其发酵活菌数,为硝化菌剂的工业化生产提供数据参考。     

昆虫细胞(Sf21)悬浮培养过程中生长限制性基质间歇补加技术的应用

基于Sf21昆虫细胞在悬浮培养过程中所表现出的生长代谢特征,提出以培养液中残糖浓度作为控制参数,并利用限制性基质(葡萄糖和蛋白水解物)的间歇补加技术调控细胞生长的方案。实际控制表明：与批培养相比,Sf21细胞在两种具代表性的昆虫细胞培养基(IPL-41和TC-100)中的生长期和稳定期都得到了有效的延长。TC-100培养液中最高细胞培养密度由3.0×10⁶ cells/mL提高到6.5×10⁶ cells/mL;IPL41培养液中最高细胞培养密度则由7.05×10⁶ cells/mL提高到9.0×10⁶cells/mL。由于限制性基质的间歇补加技术是利用较确定的营养成分来代替复杂昂贵的补料培养基,因此更适合于昆虫细胞的大规模高密度培养。     

球孢白僵菌对壳聚糖降解作用的研究

在含有1%壳聚糖的培养基中,接种球孢白僵菌017菌株,25℃,200r/min振荡培养3天后,壳聚糖发生剧烈的降解作用,培养至第7天时,培养基的增比粘度(ηa.s)由7.07下降至0.76。粘度稀释法测定壳聚糖的粘均分子量(Mv)由3.5×10⁵下降至8.8×10⁴,剩余的可溶性氨基糖含量为345μg/ml。Sephadex G-200凝胶层析证明,壳聚糖被球孢自僵菌降解后存在着主要的均一组分。培养基中添加KNO₃,牛肉膏、N-乙酰氨基葡萄     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备

获得了抗促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体杂交瘤细胞20株,其中T₇₄A₁₀小鼠腹水滴度为1:50 000,亲和常数为7.15×10⁹L/mol,T₇₁B₁₁小鼠腹水滴度为1:150000,亲和常数为8.75×10⁹L/mol.两个抗体与人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)的交叉反应分别小于1.1×10^-6%、0.01%和0.016%.将T₇₄A₁₀和T₇₁B₁₁应用于TSH免疫放射分析中,得到了满意的结果.     

淡紫紫孢菌PLF-1对感染尖刀镰孢菌百合种球的促生作用及其相关防御酶活性变化

为了探究淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)PLF-1对百合种球的促生作用及对百合尖刀镰孢菌的防治效果,采用平板对峙法评估淡紫紫孢菌对尖孢镰刀菌的拮抗效果,以及淡紫紫孢菌对百合抗尖孢镰刀菌的抗性作用。同时监测百合种球中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）的活性变化情况。研究结果表明：浓度为4.34×10⁴ CFU/mL和4.34×10⁵ CFU/mL的淡紫紫孢菌孢子悬浮液对百合种球表现为促进作用,浓度为4.34×10⁴ CFU/mL时最高茎长达11 cm。平板拮抗实验中该淡紫紫孢菌菌株能有效抑制尖孢镰刀菌生长,抑制率高达72%。接种淡紫紫孢菌和病原菌的百合种球茎长会增长37.6%,根长会增长33%。该菌株能提高感染尖刀镰孢菌百合种球中的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性,有效抑制尖刀镰孢菌的毒害作用,促进植株健康生长。     

用基因克隆大肠杆菌发光体系测定长链脂肪醛

利用基因克隆大肠杆菌发光体系分别测试了五种长链脂肪醛和脂肪酸。结果表明:可在几分钟内测出癸醛,正辛醛和十二烷醛的极限浓度分别为1×10^-14mol/L、1×10^-12mol/L和1×10^-9mol/L,是一种灵敏、快速的测试方法。     

补肾益气活血方及其单味药对人牙周膜干细胞增殖分化的影响

摘要 目的：探讨自拟补肾益气活血方及其单味药当归、补骨脂对体外培养的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）增殖和相关成骨基因表达的影响。方法：分离培养得到hPDLSCs,选取第3代hPDLSCs,细胞增殖试剂盒（CCK-8）检测不同浓度（0 g/mL、1×10^-7 g/mL、1×10^-5 g/mL、1×10^-3 g/mL）补肾益气活血方和当归、补骨脂对hPDLSCs增殖的影响,并确定最佳作用浓度和最佳作用时间;通过定量聚合酶链式反应（qPCR）检测Runt相关转录因子2（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）、骨钙蛋白（OCN）相关成骨基因的表达水平,通过茜素红染色观察细胞成骨分化情况。结果：与0 g/mL相比,补肾益气活血方各浓度在第一天和第三天时均能显著促进细胞增殖（P<0.05）,且浓度为1×10^-5 g/mL在第三天、第五天时效果均最为显著（P<0.05）;当归同样在浓度为1×10^-5 g/mL、第三天及第五天时效果均最为显著（P<0.05）;补骨脂则仅在第一天时能显著促进细胞增殖（P<0.05）。与空白对照组比较,1×10^-5 g/mL的补肾益气活血方、当归、补骨脂均能显著提升成骨相关Runx2、OCN、OPN、ALP的表达（P<0.05）,且补肾益气活血方的上调效果最为显著。茜素红染色检测显示,补肾益气活血方可增加矿化结节,促进作用最为显著。结论：补肾益气活血方可促进hPDLSCs的增殖和骨向分化,在治疗慢性牙周炎中有望发挥更大作用。     

初始接种量对Bt33菌株孢子含量的影响

在温度 30± 0 5℃、转速 180r/min的条件下 ,用Bt发酵培养液对Bt33菌株进行振荡培养 ,考察不同接种量和液培时间对孢子含量的影响。结果表明 ,将孢子含量为 2 5× 10 9CFU ml的母液按 1%～ 15 % (V V)的比例接种后培养 33～ 5 0h ,9%和 12 %接种量处理能产生 8 5× 10 9CFU ml以上的孢子浓度。通过拟合逻辑斯蒂生长模型 ,发现该菌在上述液培条件下的最大孢子含量为 1 0 3× 10 1 0 CFU ml。     

利用盘基网柄菌表达可溶性人Fas配体

用PCR扩增从激活的人中性粒细胞中得到的编码可溶性Fas配体胞外区中第141个到第281个氨基酸的cDNA ,将其与hCG-β信号肽片段融合到质粒MB12neo中,随后导入到盘基网柄菌AX3细胞中,得到分泌性表达hFasL的重组菌AX3-H3。为提高shFasL的表达量,对质粒pMB12neo作了改造,得到衍生质粒pMB74。利用质粒pMB74克隆表达shFasL ,得到高通量表达shFasL的重组菌AX3_pLu8。在复杂培养基HL_5C中,重组菌的细胞密度可达(1.5～2 )×10⁷ mL ,AX3-H3及AX3_pLu8分泌的shFasL浓度分别为23.5 μg/L及206μg/L。利用合成培养基SIH培养重组菌AX3-H3及AX3-pLu8,细胞密度均达到(4～5)×10⁷m/L ,shFasL浓度则分别达到111μg/L和420μg/L。     

葡萄糖氧化酶产生菌Z—l—C的分批发酵与恒化培养

本文对葡萄糖氧化酶产生菌z—I—c的分批发酵与恒化培养进行了研究。实验发现,在以葡萄糖为生长限制性基质的恒化培养中,该产生菌的维持系数为O．04 g葡萄糖／g菌体．H,生长得率系数Y^max_G=O．714 g菌体／g葡萄糖,最大比生长速率μmax=O．385h^-1,饱和常数Ks=4．76g/L,理论最适稀释度Dm=0．260h^-1,最大酶比活(E／x)max为2．16×10³μ／mg,其值较分批发酵的最大酶比活(1．5l×10³μ／mg)提高43％。当向恒化培养的补料培养基中添加0．02％的α-甲基-D-葡萄糖时,由于该葡萄糖结构类似物的诱导作用,可使(E／x)max达3．11×10³μ／mg,较分批发酵之值提高106％。     

含短C肽人胰岛素原类似物DesB30在毕赤酵母中的表达及纯化

合成含短C肽AAK,并去掉B链第30位苏氨酸(T)的人胰岛素原类似物：HMPIDesB³⁰ (human mini-proinsulin des B³⁰)的cDNA,将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒pPIC9K．用电转移的方法将重组质粒HMPIDesB³⁰/pPIC9K转入甲醇酵母GS115．用含不同G418浓度的YPD平板筛选高拷贝重组子．经优化条件下的高密度发酵,发酵液用SIPI-40大孔树脂吸附,大孔吸附树脂洗脱液经SP柱进一步纯化后,再用10～20 mmol/L Zn²⁺沉淀,能得到纯度为95%的HMPIDesB³⁰．通过16.5% Tricine SDS-PAGE、HPLC和质谱分析,表达产物分子质量与理论分子质量相符,经高密度发酵,表达量可达1.0 g/L．纯化回收率可达60%．说明人胰岛素原类似物HMPIDesB³⁰能在甲醇酵母中高效分泌表达,并能通过经济有效的方法纯化．