人源单克隆抗人免疫缺陷病毒1型抗体Fab段基因的获得

应用噬苏体抗体库技术有效地筛选出了多株抗ＨＩＶ－１人源单克隆抗体。以逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从ＨＩＶ－１感染者外周血淋巴细胞中扩增抗体轻重链可变区基因,插入载体ｐＣＯＭＢ３,建立噬菌体抗体库。分别以ＨＩＶ－１ｇｐ１２０和ｇｐ１６０为固相抗原,经过多轮筛选,从中获得了多株抗ＨＩＶ－１ｇｐ４１、ｇｐ１２０和ｇｐ１６０的单克隆抗体Ｆａｂ段基因。抗ＨＩＶ特异性噬菌体抗体随抗体库的筛选高度富集,抗     

人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白gp41核心结构的药物研究

人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）包膜糖蛋白ｇｐ４１在病毒膜和靶细胞膜的融合过程中发挥重要作用。本文叙述了Ｃ多肽抑制剂研究成果、ＨＩＶｇｐ４１核心结构的特征及作用于ｇｐ４１核心结构的抗ＨＩＶ药物研究的最新发展。可望在不久的将来,研制出针对ＨＩＶｇｐ４１核心结构的新的抗病毒药物用于治疗和预防ＨＩＶ－１感染和ＡＩＤＳ。     

HIV—1 SF2株env基因（120）在大肠杆菌中的表达

运用基因重组技术,将ＨＩＶ－１ ＳＦ２株编码外膜蛋白ｇｐ１２０的ｅｎｖ基因片段与原核载体ｐＢＶ２２０进行重组,构建成质粒ｐＢＶＳＦ２ｅｎｖ,并在大肠杆菌（Ｅ．ＣｏｉｌＤＨ１０ｂ）中获得表达,经Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ反应证实,该重组蛋白与来自ＨＩＶ－１感染者的血清（含多克隆抗体）发生特异性反应。     

我国首次发现的HIV—1和HIV—2双重感染样品中病毒部分基因的序列特 …

上海市卫生检疫局送检了一例ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的ＨＩＶ前病毒的ｇａｇ和ｅｎｖ基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的ＨＩＶ双重感染样品的ＨＩＶ部分基因特征。从ＨＩＶ感染者淋巴细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ,ＰＢＭＣ）中提取前病毒ＤＮＡ,分别使用ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２特异性引特用套式ＰＣＲ扩增ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２     

中国HIV-1流行毒株的DNA疫苗的初步研究

为研制针对我国ＨＩＶ－１流行毒株的艾滋病毒疫苗,构建了具有代表性的ｇａｇ和ｇｐ１２０核酸疫苗,进行了初步的小鼠免疫实验。结果初步显示：（１）免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠可以产生ＨＩＶ－１特异性的体液和细胞免疫;（２）ｇａｇ和ｇｐ１２０基因联合免疫可以同时诱发针对ｇａｇ和ｇｐ１２０的细胞和体液免疫反应,而且效果比各自单独免疫要好;（３）Ｂ亚型ｇｐ１２０基因免疫可以诱发识别Ｃ亚型ｇｐ１２０抗原的ＣＴＬ反应。本     

人类免疫缺陷病毒Ⅱ型跨膜蛋白在大肠杆菌中的表达

人类免疫缺陷病毒Ⅱ型（ＨＩＶ－２）的跨膜蛋白ｇｐ３６,是从外膜蛋白前体中裂解的,它在诱导病毒与细胞膜的融合和合胞体的形成中起着重要的作用〔１〕。感染ＨＩＶ－１或ＨＩＶ－２的患者,可产生针对病毒结构蛋白（包括包膜表面糖蛋白和跨膜蛋白）的体液免疫〔２－４...     

人类免疫缺陷病毒1／2型抗体检测酶联免疫试剂盒的研制

采用二聚体合成肽（ＨＩＶ－１ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ｐ２４和ＨＩＶ－２ｇｐ３６）包被酶标板条制备成固相抗原,与鼠抗人ＩｇＧ单克隆抗体酶标记物、底物ＴＭＢ及阴阳性参考血清配套制备成ＨＩＶ抗体ＥＩＡ试剂盒,专供检测人血清或血浆ＨＩＶ１／２抗体之用。以荷兰、韩国及万泰试剂作为对照,用该试剂盒对检定所的Ｐａｎｅｌ标准及献血员１５５５０例（其中ＨＣＶ抗体阳性１２８例,ＨＢｓＡｇ阳性４６例）进行检测,四种试剂对检定所Ｐａｎｅｌ标准的１３份阳性血清均呈阳性反应,２８份阴性血清均为阴性;献血员１５５５０例,四种试剂对其中１份血清均呈阳性反应,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验证实为阴性,四种试剂的阴性检出率均为９９．９９％。连续制备三批试剂经中国药品生物制品检定所检定,所检项目全部合格;同时委托检定所进行临床考核,４７份阳性血清全部呈阳性反应,１５０份阴性血清全部为阴性。说明该试剂盒具有很好的敏感性和特异性。     

抗HIV-1 gp160独特型阳性抗体的序列分析及表达

为了确定从噬菌体抗体文库中筛选出的抗体的属性和方便目的基因的表达及其产物的纯化,对两株具有“１Ｆ７”独特型的抗ＨＩＶ－１ｇｐ１６０抗体基因进行了序列分析并构建了可溶性表达载体．发现３Ｂ株含有完整的Ｆａｂ段,１Ｄ株只有重链Ｆｄ段．序列测定表明两株克隆的Ｆｄ段基因完全相同,其可变区ＶＨ属于ＶＨⅠ亚群,而３Ｂ株的“轻链”序列与已知的人的κ和λ轻链无同源性．用从另外的Ｆａｂ抗体文库中筛选出来的３株抗乙肝表面抗原抗体的轻链与３Ｂ的重链重组,并选择一个ＨＩＶ－１ｇｐ１６０特异性较好的重组抗体株,命名为３Ｂｓ．构建了１Ｄ株与３Ｂｓ株的可溶性表达载体,免疫印迹实验证实了具有“１Ｆ７”独特型的抗ｇｐ１６０独特型阳性抗体的表达．     

人工合成多肽检测抗HIV－1和HIV－2抗体的研究

采用固相法合成ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２两个多肽,建立了用混合多肽为包被抗原检测ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２感染的间接酶联免疫吸附法。检测４６份抗ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２抗体阳性血清标本以及９４份对照血清标本,与ＵＢＩ试剂比较,其阳性符合率为９７．８％,阴性符合率为１００％,总符合率为９９．３％。实验结果表明,此法可用于ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２感染的检测。     

HIV－1感染初始阶段的分子机制

ＨＩＶ－１感染初始阶段的分子机制项秉懿（第四军医大学分子生物学研究所,西安７１００３２）关键词艾滋病,人类免疫缺陷病毒－Ｉ型,包膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＣＤ４受体,感染ＴｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＨＩＶ－１ＩｎｆｅｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅＩ...     

BIV—1—gp120在重组杆状病毒系统中的表达

将中国株ＨＩＶ－１Ｂ亚型ｇｐ１２０全基因序列克隆到杆状病毒转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ中多角体启动子下游,构建成重组转座载体ｐＦａｓｔＢａｃＩ－ｇｐ１２０,利用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ）表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Ｓｆ９中高效表达了ＨＩＶ－１的外膜糖蛋白ｇｐ１２０,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果一致,证明表达了２种糖基化程度不同的ｇｐ１２０。     

噬菌体抗体文库的构建及人源抗HIV-1 gp 160抗体的筛选

构建人源噬菌体抗体文库如下：ＨＩＶ感染者脾细胞中提取ｍＲＮＡ,经反转录再以人ＩｇＧ重链Ｆｄ两端及轻链“通用”引物分别扩增Ｆａｂ基因片段,依次插入到噬菌粒载体ｐＣｏｍｂ３中,电转化大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ,经辅助噬菌体救助,重组噬菌体得以溶源裂解,Ｆａｂ表达于噬菌体包膜蛋白Ⅲ的Ｎ端．此噬菌体抗体库的容量为５×１０５．筛选抗ＨＩＶ－１同时又具有能被抗独特型抗体“ＩＦ７”所识别的独特型的阳性抗体：以重组包膜糖蛋白ｇｐ１６０及ｇｐ４１多肽对噬菌体抗体文库进行三次淘选,使抗ｇｐ１６０的特异性抗体得到１００倍的富集．然后通过直接ＥＬＩＳＡ和竞争性ＥＬＩＳＡ实验筛选出两株结合性较好的特异性抗ｇｐ１６０抗体－３Ｂ株与１Ｄ株．直接ＥＬＩＳＡ实验表明这两株克隆均能被“１Ｆ７”所识别,为抗独特型多肽的筛选奠定了基础．     

人免疫缺陷病毒Ⅰ型膜糖蛋白gp160人单链抗体

人获得性免疫缺陷综合症（ＡｃｑｕｉｒｅｄＩｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙＳｙｎｄｒｏｍｅ,简称ＡＩＤＳ）主要是由人免疫缺陷病毒Ⅰ型（ＨＩＶ１）引起的严重危害人类健康的传染病。ＨＩＶ研究的最新进展揭示了膜糖蛋白ｇｐ１２０与其受体和中和抗体复合物晶体结...     

树Ju免疫细胞体外感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒的实验研究

至今可以感染Ⅰ型人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）的动物只有黑猩猩和长臂猿,这严重阻碍了ＨＩＶ－１的疫苗研究和治疗研究。因此,寻找新的可以感染ＨＩＶ－１的动物模型成为十分迫切的课题。已知树Ｊu对许多重要的医学病毒易感,为了探讨树Ｊu是否可以感染ＨＩＶ－１,利用不同辅助受体的５种ＨＩＶ－１病毒株。体外感染云南野生成年树Ju的淋巴细胞和单核／巨噬细胞;同时还用这些病毒感染人外周血淋巴细胞或单核细胞。然后用ＲＴ－ＰＣＲ、ＰＣＲ和流式细胞术分别进行了检测,用ＲＴ－ＰＣＲ方法未检测到感染上清中有病毒粒子的存在,用ＰＣＲ法未能发现树Ｊu的这些免疫细胞中有前病毒ＤＮＡ,用流式细胞术也未能在这些感染ＨＩＶ－１的树Ｊu细胞的表面检测到特异抗原;而感染ＨＩＶ－１的人免疫细胞均为阳性结果。实验结果表明树Ju的这些免疫细胞在体外未能感染上ＨＩＶ－１,可能的原因是树Ｊu的这些免疫细胞的ＨＩＶ－１受体（ＣＤ４）和辅助受体（ＣＣＲ５或ＣＸＣＲ４）与人的免疫细胞胞差别较大。     

人免疫缺陷病毒1型Rev单链抗体细胞内免疫抗病毒基因治疗研究

应用抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗体细胞内免疫方法,研究在人Ｔ细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果,探讨细胞内免疫抗ＨＩＶ－１基因治疗的可行性。克隆抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗抗体（ｓＦｖ）基因,以逆转录病毒为基因载体,将名装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人ＣＤ４阳性Ｔ－细胞株ＣＥＭ和ＳｕｐＴ１,以及ＨＩＶ－１阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞（ＰＢＭＣ）,再分别用不同剂量（ＭＯＩ）的ＨＩＶ－１病毒株ＰＮ     

细胞内抗体在HIV-1感染及爱滋病治疗中的应用

ＨＩＶ1是慢病毒亚家族的成员,是ＡＩＤＳ的病因。像其它逆转录病毒一样,ＨＩＶ1基因组包含ｐｏｌ(聚合酶)、ｅｎｖ(包膜)结构基因,也编码Ｒｅｖ(毒粒蛋白调节子)、Ｔａｔ(反式激活蛋白)等调节蛋白。抗ＨＩＶ1细胞内抗体由细胞合成并导向其结合靶ＨＩＶ1蛋白和发挥抑制功能的细胞隔室。这些内抗体主要瞄准病毒生命周期中必需的蛋白质。1.包膜糖蛋白(ｅｎｖｅｌｏｐｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ)ＨＩＶ1包膜糖蛋白是作为ｇｐ160前体合成的,并在高尔基复合体上分裂为成熟的ｇｐ120/41蛋白。ｇｐ120与ＣＤ4在细胞表面和细胞内的相互作用不仅对病…     

家蚕核型多角体病毒gp64基因的克隆和全序列测定

：Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因在杆状病毒分子生物学和杆状病毒表达系统研究中具有重要的作用,以ＡｃＭＮＰＶ ｇｐ６４ 基因为探针,杂交显示Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因定位于其基因组Ｂａｍ ＨＩ酶切的４ ．２ｋｂ 和７－４ｋｂ 片段上,克隆阳性片段,重组质粒分别命名为ｐＺＤＢＭ４２ 和ｐＺＤＢＭ７４ 。对重组质粒进一步杂交,将片断更精确定位于０－４５ｋｂ 片段、０－７５ｋｂ 片断上和１－１５ｋｂ 片断上,将三个片断ＤＮＡ 进行序列分析,结果表明：Ｂｍ ＮＰＶ 的ｇｐ６４ 基因的开放阅读框（ＯＲＦ） 有１５３０ 核苷酸,编码５０９ 个氨基酸。序列同源性比较显示,Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因和ＡｃＭＮＰＶｇｐ６４ 基因的核苷酸序列同源性达８４－３ ％ ,氨基酸序列同源性达９４－７ ％ 。Ｂｍ ＮＰＶ ｇｐ６４ 基因Ｃ 端的信号肽序列和Ｎ 端的锚定序列对于Ｂｍ ＮＰＶ 表达系统的改进具有重要的意义。     

HIV-1 SH01分离株在MT4细胞的超微结构特征和形态发生学研究

用外周血单个核细胞混合培养法分离到ＨＩＶ－１ ＳＨ０１株,具有典型的ＨＩＶ颗粒的形态学特征,核心颗粒呈锥形,可见芽生释放的全过程。偶尔可在胞装空泡内见到ＨＩＶ颗粒,同时还有细胞碎片和溶酶体结构,故此类空泡实际为ＨＩＶ吞噬泡。另一少见的现象是溶酶体摄取并消化ＨＩＶ颗粒,在ＨＩＶ－１ ＳＨ０１株感染７天或持续感染的ＭＴ４细胞中均可见到,后者尤为普遍。在ＨＩＶ－１ ＳＨ０１株持续感染的ＭＴ４转化细胞中,     

HIV—1抗体阳性血浆中HIV—1病毒基因分型研究

为了解ＨＩＶ抗体阳性血浆中的ＨＩＶ１病毒基因亚型的情况,应用逆转录ＰＣＲ和ＤＮＡ序列测定技术,对６份获自高危人群的抗ＨＩＶ１阳性血浆进行序列分析和基因亚型分型的研究,结果表明均属ＨＩＶ１Ｂ亚型。Ｖ３环氨基酸序列分析指出这些ＨＩＶ１Ｂ亚型病毒株与泰国ＨＩＶ１Ｂ亚型病毒株核苷酸和氨基酸序列相似;同时发现ＨＩＶ１ｃＤＮＡ和氨基酸序列均相同,推测这６份标本可能来自同时感染同一株ＨＩＶ病毒的感染者。本研究对了解高危人群中ＨＩＶ１流行的遗传变异和ＨＩＶ１亚型病毒株的分子流行病分析具有一定的意义。     

化学趋化因子受体在HIV感染中的作用及其在AIDS治疗中的应用价值

化学趋化因子受体作为协同受体,为人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１）进入细胞所必需。其中ＣＸＣＲ４被亲Ｔ细胞的病毒株利用,而ＣＣＲ５被亲巨噬细胞的病毒株利用,它们是大多数病毒株利用的协同受体。协同受体和ＣＤ４一起形成复合受体,ｇｐ１２０与之结合后发生构象改变,使ｇｐ４１暴露出来,引起膜的融合。ＨＩＶ协同受体发现为治疗艾滋病开辟了新的途径。利用趋化因子拮抗剂、单克隆抗体和天然配体封闭趋化因子受体可阻止ＨＩＶ