抗HBcAg人源性单链抗体细胞内表达及其抗病毒复制的实验研究

应用人源性抗HBcAg单链抗体细胞内表达技术,探讨抗HBV复制基因治疗的应用价值.应用噬菌体展示和基因重组技术,从HBV感染的外周血淋巴细胞克隆了人源性抗HBcAg单链抗体,并重组至逆转录病毒载体.以人肝癌细胞smmc-7721和PLC/PRF/5为靶细胞进行基因共转染,分别测定实验组细胞上清中的HBsAg和HBeAg,与对照组做比较,观察抗HBcAg单链抗体细胞内表达的抗病毒治疗作用.结果显示,在急性HBV感染的细胞株中,抑制病毒复制效率为49%～61%,在慢性病毒感染细胞,抑制率为41%～54%.实验结果表明,应用单链抗体细胞内表达技术,在抗病毒治疗研究中具有潜在的应用价值.应对HBV的4个开放阅读框架编码产物进行全面的对比研究,以发现抑制效率高、实用价值大的靶基因.     

人免疫缺陷病毒1型Rev单链抗体细胞内免疫抗病毒基因治疗研究

应用抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗体细胞内免疫方法,研究在人Ｔ细胞和周围血淋巴单核细胞内抗病毒复制的效果,探讨细胞内免疫抗ＨＩＶ－１基因治疗的可行性。克隆抗ＨＩＶ－１Ｒｅｖ单链抗抗体（ｓＦｖ）基因,以逆转录病毒为基因载体,将名装后的含靶基因的逆转录病毒转导至人ＣＤ４阳性Ｔ－细胞株ＣＥＭ和ＳｕｐＴ１,以及ＨＩＶ－１阴性自愿者的周围血淋巴单核细胞（ＰＢＭＣ）,再分别用不同剂量（ＭＯＩ）的ＨＩＶ－１病毒株ＰＮ     

以GST融合蛋白为靶从噬菌体肽库中筛选结合肽

以重组的谷胱甘肽S-转移酶（GST）和目标蛋白的融合蛋白为靶,通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上,可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽.用此方法筛选到含WWXF结构的HIV-1病毒蛋白R（Vpr）的结合肽,与经典的将Vpr包被于培养板上的筛选方法相比,此方法具有简便、快速的优点.