利用B细胞培养和RT-PCR技术从我国HIV-1感染者中筛选膜蛋白特异性单克隆抗体的初步研究

本研究通过采集1型人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)感染者抗凝全血,分离出外周血单个核细胞,然后用磁珠分选纯化记忆性B细胞和体外活化记忆性B细胞,促使其分泌抗体,用ELISA法识别阳性B细胞克隆,并提取阳性B细胞的RNA,从中扩增抗体重链和轻链基因并克隆到表达载体中,再用携带重链基因的质粒和携带轻链基因的质粒共转染293T细胞,获得HIV-1特异性人单克隆抗体,进行抗体特性的鉴定。结果从1例HIV-1感染者的记忆性B细胞中筛选出了4株HIV-1包膜糖蛋白(Envelope glycoprotein,Env)特异性人单克隆抗体,其中2株具有较好的抗体依赖细胞介导的细胞毒作用活性,另有1株对HIV-1假病毒有较弱的中和活性。说明我们成功地引进了利用B细胞培养和RT-PCR技术从人体淋巴细胞中筛选特异性抗体基因的人单克隆抗体技术平台。用该技术可以成功获得HIV-1Env特异性单克隆抗体,为将来从能产生高滴度广谱中和抗体的感染者体内筛选广谱中和抗体打下了基础。     

中国HIV-1流行毒株的DNA疫苗的初步研究

为研制针对我国ＨＩＶ－１流行毒株的艾滋病毒疫苗,构建了具有代表性的ｇａｇ和ｇｐ１２０核酸疫苗,进行了初步的小鼠免疫实验。结果初步显示：（１）免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠可以产生ＨＩＶ－１特异性的体液和细胞免疫;（２）ｇａｇ和ｇｐ１２０基因联合免疫可以同时诱发针对ｇａｇ和ｇｐ１２０的细胞和体液免疫反应,而且效果比各自单独免疫要好;（３）Ｂ亚型ｇｐ１２０基因免疫可以诱发识别Ｃ亚型ｇｐ１２０抗原的ＣＴＬ反应。本