青霉胞外菊粉酶的纯化和性质研究

青霉菌（ＰｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍＳＰ．９１－４）产生的胞外菊粉酶（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｎｕｌｉｎａｓｅ）粗酶液,经硫酸铵沉淀,超滤浓缩,Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－１００凝胶过滤,ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ离子交换柱层析等步骤,得到提纯３０倍的酶Ｅ。酶Ｅ反应时最适ｐＨ４．５,最适温度为５０℃,在ｐＨ４．７～７．６范围内,温度５０℃以下酶Ｅ活性稳定;其活性受Ａｇ＾＋,Ｃｕ＾２＋ＰＣＭＢ强烈抑制。采用     

麻蝇幼虫肠道蛋白酶BGP的分离纯化及性质

棕尾别麻蝇幼虫肠液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后,Ｘ光片显影,呈现两条蛋白酶活性带．ＩＥＦ后,两条蛋白酶活性带的等电点分别为ｐＨ７．７和６．８．麻蝇幼虫肠液经５５％～７５％硫酸铵沉淀,以及连续两次制备等电聚焦,分离纯化出等电点约为ｐＨ７．７,分子量约为３５ｋＤ的蛋白酶ＢＧＰ．该酶能分解酪蛋白和类胰蛋白酶专一底物Ｂｚ－Ｐｈｅ－Ｖａｌ－ＡｒｇＮＡ,不能分解弹性蛋白酶专一底物ｅｌａｓｔｉｎ－ＣｏｎｇｏＲｅｄ和类胰凝乳蛋白酶专一底物Ｓｕｃ（Ａｌａ）２Ｐｒｏ－ＰｈｅＮＡ．ＳＢＢＩ,Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ和ＰＭＳＦ能强烈抑制其活性．专一底物和抑制剂的结果表明,ＢＧＰ是一种类胰蛋白酶．其最适反应温度为５０℃,最适作用ｐＨ为８．５．不耐高温,５０℃保温３０ｍｉｎ活性急剧下降．Ｈｇ２＋,Ｚｎ２＋和Ｃｕ２＋能抑制酶活性．Ｃａ２＋,Ｍｇ２＋对酶无激活作用,ＥＤＴＡ无抑制作用．     

番茄果实ACC合成酶的纯化

以伤诱导的番茄囊果皮为材料,改进了ＡＣＣ合成酶（ＥＣ４．４．１．１４）纯化方法。经改进的５步纯化后,ＡＣＣ合成酶被纯化７３００倍,比活性达到１１６８７０Ｕ／ｍｇ蛋白,回收率为７％．以较少的步骤得到了较高的纯化倍数。纯化的ＡＣＣ合成酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染检验为一条带,分子量为５０ｋＤ,等电点为ｐＨ６．５。     

番茄果实ACC合成酶的纯化

以伤诱导的番茄囊果皮为材料,改进了ＡＣＣ合成酶（ＥＣ４．４．１．１４）纯化方法,经改进的５步纯化后,ＡＣＣ合成酶被纯化７３００倍,比活性达到１１６８７０Ｕ／ｍｇ蛋白,回收率为７％,以较少的步骤得到了较高的纯化倍数,纯化的ＡＣＣ合成酶经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染检验为一条带,分子量为５０ｋＤ,等电点为ｐＨ６．５。     

人血红细胞酷氨酸蛋白磷酸酶（PTPP）的研究：Ⅱ.胞浆PTPP的分离纯…

人血红细胞胞浆部分经（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素（ＤＥ２）柱层析,磷酸纤维素柱层析（Ｐ１１）得到部分纯化的ＰＴＰＰ,产率;５．７％,提纯１０７５倍。以＾３２Ｐ－Ｔｙｒ－Ｐｏｌｙ（Ｇ４：Ｔ）作底物,测得其表征Ｋｍ约为０．５－０．８μｍｏｌ／Ｌ。该酶的最适ｐＨ和最适温度分别为７．０－７．８及３７－４０℃。Ｚｎ＾２＋等二价金属离子及Ｎａ３ＶＯ４等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;ＥＤＴＡ、甘     

柑叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质的研究

柑（Ｃｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｂｌａｎｃｏ）幼叶中存在高活性的酸性蔗糖酶。经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－琼脂糖离子交换层析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析纯化,活性回收率６．４％ ,纯化倍数１７９．２ 倍。纯化的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示１ 条蛋白带,其亚基分子量４０ ｋＤ。用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００ 凝胶层析法测得分子量为８０ ｋＤ。推测该酶由两个相同亚基构成。以蔗糖为底物测定该酶的表观Ｋｍ 为１．６×１０－ ２ ｍ ｏｌ·Ｌ－ １,Ｖｍ ａｘ为１００ ｍ ｇ 还原糖·ｍ ｇ－ １蛋白质·ｈ－ １。最适ｐＨ ５．０,酸碱稳定区在ｐＨ ４．５—５．５ 之间。最适温度５５℃     

芳香黄杆菌弹性蛋白酶的纯化及性质研究

报道了弹性蛋白亲和层析分离弛化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶,经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,收率可达５０％,并制备了酶的结晶。该酶在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测得分子量为２１３８０,ＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点８．９最适作用温度为５０℃,最适作用,ＰＨ为７．４在４０℃以下热稳定性良好,ＰＨ４．５－９．５范围内稳定,重金属离子Ｆｅ＾３＋,Ｚｎ＾２＋,Ｃｏ＾２＋,Ｈｇ＾２＋,Ｎｉ＾２＋Ａｇ＾＋,Ｃｕ     

人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究

用硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶。酶纯化１９３２４倍,比活力为５７９７Ｕ／ｍｇ蛋白。提取酶液经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为４１．２ｋＤ,等电点为ｐＨ４．８,氨基酸组成分析表明该酶由３８８个氨基酸残基组成,Ｎ端氨基酸为精氨酸。酶的最适ｐＨ为６．５,ｐＨ小于５．０或大     

假菠萝麻蛋白酶分离纯化及特性研究

从假菠萝麻叶汁中用乙醇分部沉淀法得到一种蛋白酶,对酪蛋白有强烈的水解活性,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析和ＳＰ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换柱层析等步骤纯化,可得到六角形结晶。结晶酶液经ＰＡＧＥ圆盘电泳,每条胶柱上只显示一条蛋白带,其活性在ｐＨ４。５－１０、５５℃范围内较稳定,最适ｐＨ８．５最适温度５０℃,Ｋｍ（酪蛋白）值为０．１８５％（Ｗ／Ｖ）。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ     

粘质赛氏菌胞外蛋白酶的提取,纯化及部分性质研究

经过硫酸铵３０％￣５０％分级沉淀、二步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的粘质赛氏菌胞外蛋白酶制品,收集可达５３％,并制备了酶的结晶。该酶以Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量约为８１０００,该酶的最适ｐＨ为７．０,最适温度为４５℃,Ｚｎ＾＋、Ｍｎ＾＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｕ＾２＋、Ｃｏ＾２＋等重金属离子不同程度地抑制酶活性。     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２ １４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最     

海枣曲霉β—木糖苷酶的提纯和性质

从海枣曲霉麦麸培养物抽提液中,通过聚乙二醇６０００－磷酸钾缓冲液双水相分离,相继用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００凝胶过滤、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换柱层析、羟基磷石吸附层析、ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０离子交换层析、ＳＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换层析以及最适温度为６５℃,在ｐＨ３．５－６．５之间稳定,酶保温３０分钟时的半失活温度（ｔ１／２）为６８℃。酶的分子量为９     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

胞外青霉素酰化酶的纯化及部分理化性质

巨大芽孢杆菌产胞外青霉素酰化酶发酵液经硫酸铵分级抽提及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００、羟基磷灰石、ＤＥＡＥ－纤维素ＤＥ５２等层析步,提纯了青霉素酰化酶,得到电泳均一的酶制剂,纯酶比活力约为２５Ｕ／ｍｇ蛋白,纯化４９倍,活力回收５８％,经ＰＡＧＥ及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测知该酶不含亚基,其分子量约为１４０ｋＤ。该酶最适ｐＨ为９．０,最适温度４７℃,用底物ＮＩＰＡＢ测活,其Ｋｍ值为６．２×１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ     

中温碱性脂肪酶的研究：Ⅲ.扩展青霉PF868变株碱性脂肪酶的纯化及其…

扩展青霉ＰＦ８６８变株发酵液经硫酸铵盐析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ－２００及Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱层析纯化,获得纯化倍数为３２．４的酶粉。该酶分子量为２３４４２Ｄａｌ,酶学特性表明：该酶的最适作用温度为３２℃,５０℃保温３０ｍｉｎ仍保留５０％酶活性,最适ｐＨ为９．０,作用ｐＨ稳定范围在７．０－１０．０之间,Ｃａ＾２＋和Ｍｇ＾２＋对酶有激活作用,Ｆｅ＾２＋,Ｃｕ＾２＋和Ｍｎ＾２＋酶活力有抑制作用。     

人胃腺苷脱氨酶的分离纯化及性质研究

用硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换层析、免疫亲和层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶柱层析从人胃组织中提取出腺苷脱氨酶,酶纯化１９３２４倍,比活力为５７９７Ｕ／ｍｇ蛋白．提取酶液经ＰＡＧＥ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦只呈现一条区带。测得该酶的分子量为４１．２ｋＤ,等电点为ｐＨ４．８．氨基酸组成分析表明该酶由３８８个氨基酸残基组成,Ｎ端氨基酸为精氨酸。酶的最适ｐＨ为６．５,ｐＨ小于５．０或大于９．０时不稳定;最适温度为３７℃,对热不太稳定,以腺苷及２－脱氧腺苷作为底物,其Ｋｍ分别为８７μｍｏｌ／Ｌ和４１μｍｏｌ／Ｌ。     

圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化和特性

圆弧青霉突变株ＰＧ３７ 发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质５ ２００ ｕ 的碱性脂肪酶, 纯化倍数１６ ．５ , 得率３３．２％ , 在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）上均呈现单一蛋白质条带。ＳＤＳＰＡＧＥ 和凝胶过滤分别测得酶的分子量为２７．５ ｋＤ和２９ ｋＤ, 表明该酶以单体形式存在。Ｎ末端１０ 个氨基酸的序列测定结果为ＡＴＡＤＡＡＡＦＰＤ, 与已知的碱性脂肪酶的Ｎ 末端序列没有同源性。酶学特性研究结果表明, 该酶的最适作用温度为２５ ℃, 在３０ ℃以下稳定,４０ ℃处理２０ ｍｉｎ 仅残留３０ ％ 酶活性;ｐＨ 稳定范围在６．５～１０．５ , 最适ｐＨ 为１０ ．０ 。低浓度的碱性蛋白酶对ＰＧ３７ 碱性脂肪酶活性的影响较小, 可同时添加在洗涤剂中。     

盐生杜氏藻甘油-3-磷酸脱氢酶的分离纯化及其特性的研究

利用ＰＥＧ分级,ＤＥＡＥ离子交换层析,ＢｌｕｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ拟亲和层析,ＭｏｎｏＱ离子交换层析等手段,分离纯化盐生杜氏藻（Ｄｕｎａｌｉｅｌａｓａｌｉｎａ（Ｄｕｎａｌ）Ｔｅｏｄ．）甘油三磷酸（Ｇ３Ｐ）脱氢酶（ＥＣ１．１．１．８）,得到比活为１２．６Ｕ／ｍｇ的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。４％～２０％非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为２７０ｋＤ,ＳＤＳＰＡＧＥ表明该酶只有一种分子量约为６５ｋＤ的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶催化磷酸二羟丙酮（ＤＨＡＰ）还原的最适ｐＨ值为７．５,催化Ｇ３Ｐ脱氢的最适ｐＨ值为１０。该酶对４个底物还原型辅酶Ⅰ（ＮＡＤＨ）,二磷酸吡啶核苷酸（ＤＨＡＰ）,辅酶Ⅰ（ＮＡＤ）,Ｇ３Ｐ的表观Ｋｍ值分别为６３μｍｏｌ／Ｌ,２７２μｍｏｌ／Ｌ,１．５３ｍｍｏｌ／Ｌ,６．５２ｍｍｏｌ／Ｌ。该酶在保存过程中易失活。ＮＡＤＨ能降低酶失活的速度,而ＮＡＤ则不然。低浓度ＮａＣｌ对酶略有保护作用,但高浓度ＮａＣｌ加快酶的失活,且浓度越高效应越明显。     

南方鲇碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质的研究

用正丁醇抽提,硫酸铵分级沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析,从南方鲇（Ｓｉｌｕｒｕｓ　ｍｅｒｉｄｉｏｎａｌｉｓ　Ｃｈｅｎ）肠粘膜中提取出碱性磷酸酶（ＡＫＰ）。提纯倍数为３９．５０倍,比活为６８．３５μ／ｍｇ蛋白,提取酶液经ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ只呈现一条区带。该酶的分子量为１３２１４０,Ｎ末端氨基酸为门冬氨酸,最适ｐＨ为１０．１０,７．５＞ｐＨ＞１１．５时不稳定,最适温度为４０℃左右,对热不很稳定,以磷酸苯二钠为底物其Ｋ_ｍ值为１．７２×１０~（－３）ｍｏｌ／Ｌ。Ｍｇ~（２＋）、Ｍｎ~（２＋）为该酶的激活剂,ＫＨ_２ＰＯ_４、Ｌ－ＣｙＳ、ＭＥ、ＤＦＰ、ＥＤＴＡ－Ｎａ_２为抑制剂。选用ＫＨ_２ＰＯ_４和ＤＦＰ作抑制类型的判断,结果表明,ＫＨ_２ＰＯ_４属竞争性掏剂,其抑制常数为２．３ｍｍｏｌ／Ｌ;ＤＦＰ为非竞争性抑制剂,抑制常数为１．０５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

芳香黄杆菌弹性蛋白酶的纯化及性质研究

报道了弹性蛋白亲和层析分离纯化芳香黄杆菌产胞外弹性蛋白酶。经一步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,收率可达５０％,并制备了酶的结晶。该酶在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上测得分子量为２１３８０,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点８．９,最适作用温度为５０℃,最适作用ｐＨ为７．４,在４０℃以下热稳定性良好,ｐＨ４．５－９．５范围内稳定,重金属离子Ｆｅ３＋、Ｚｎ２＋、Ｃｒ３＋、Ｃｏ２＋、Ｈｇ２＋、Ｎｉ２＋、Ａｇ＋、Ｃｕ２＋等严重抑制酶活性,黄杆菌弹性蛋白酶除了特异水解弹性蛋白外,对干酪素、血纤维蛋白、白蛋白、明胶、血红蛋白等多种蛋白质均能水解。