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CD40配体(CD40L)是TNF超家族成员,表达于人活化的CD4^+T细胞表面,与存在于B细胞、抗原递呈细胞表面的相就受体CD40分子相互作用,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用PCR法从CD40L全长cDNA质粒中扩增CD40L胞外段编码cDNA,即可溶性CD40L(sCD40L)编码cDNA,并克隆入pSK质粒;cDNA序列经测序证实后与pPICZαA质粒重组构建成pPICZαA-s 相似文献
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Inrecentyears,theresearchofusingmammaryglandbioreactorstoproducelargeamountsofhumanpharmaceuticalproteinsdrawmoreandmoreattentionwiththedevelopmentoftransgenictechniques.Transgeneexpressioninmilkoffersseveralpotentialadvantages:proteinssecretedinmilk,w… 相似文献
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水稻氨基酰化酶的分离纯化与性质分析 总被引:2,自引:0,他引:2
氨基酰化酶是专一水解N-酰基化L-氨基酸的蛋白酶,从水稻黄化苗得到的抽提液,经过硫酸铵分级沉淀,丙酮分级沉淀和阴离子交换层析三个步骤,纯化得到了该酶,比活达到100U/mg蛋白,在无还原剂在的SDS-聚丙炮酰胺凝胶电泳下显单一条带,分子量为40kD。而交层分析分析表明活性分子的分子量约90kD,因此可推测它的活性分子由两个亚基通过非共份键作用组合而成。 相似文献
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Flt3配体的同源二聚体构建及其生物学特性 总被引:1,自引:0,他引:1
Flt3配体 (FL)是一种早期造血生长因子 ,与相应受体结合后 ,驱动受体二聚化 ,从而启动细胞内信号转导。体内 ,可溶性的FL主要以单体形式存在。将 2个相同的编码可溶性FL的基因片段 ,通过连接序列以首尾相连的方式构建成FL FL基因 ,并在毕氏酵母 (Pichiapastoris)中表达。SDS PAGE试验表明 ,FL FL融合蛋白 (rFL FL)分子量约为 4 3kD ,与预期相符 ,并为Western印迹试验所证实。骨髓祖细胞体外集落形成试验提示 ,rFL FL具有更强的生物学活性 ,约是单体FL(rhFL)的 10倍之多。另外 ,FL FL融合蛋白还能促进和延长饥饿的Raji细胞存活 ,与rhFL相比 ,也表现出较强的生物学功能。 相似文献
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一个新的Br蛋白基因部分序列测定及分析 总被引:4,自引:1,他引:4
从新疆北部艾比湖分离纯化到极端嗜盐古生菌AB1,采用PCR方法扩增了其165 rRNA基因(16S rDNA)和编码螺旋C至螺旋G的细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,Br)蛋白基因片段,并测定了基因的核苷酸序列。基于16S rDNA序列的同源性比较及系统发育学研究表明,AB1是Natronococcus属中新成员。通过对菌株AB1的Br蛋白亲水性分析表明,AB1的Br蛋白与已报道Br蛋白有类似的超二级结构,进一步的蛋白质序列聚合比对结果表明,AB1中Br蛋白螺旋C至螺旋G的氨基酸序列与其他菌株差异明显。研究结果表明菌株AB1的Br蛋白是一种新的Br蛋白。 相似文献
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青岛海葵强心活性多肽在毕氏酵母中的分泌表达 总被引:5,自引:0,他引:5
青岛海葵中存在两种具有增强心肌收缩功能的多肽类毒素(分别命名为Ap-QD1和Ap-QD2).通过分析已经得到Ap-QD2的氨基酸序列,按照毕氏酵母的偏爱密码子设计并合成了Ap-QD2的cDNA.将合成cDNA序列通过PCR扩增及一系列分子克隆操作导入毕氏酵母表达载体pPICZαA中,以电穿孔方法转化毕氏酵母GS115和KM71,并进行转化子的表型及高拷贝化筛选.其中的KM71(Muts)的转化子经摇瓶发酵,每升发酵液可表达约20 mg的重组Ap-QD2产物,通过纯化可得到7 mg纯的有天然生物学活性的Ap-QD2基因工程产物. 相似文献
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人重组磷脂酶D_2变构体cDNA和蛋白质序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
采用VectorNTI、DNATools等计算机分析软件及信息库,研究人重组磷脂酶D2(rhPLD2)变构体的生物学特征。rhPLD2具有多种基因结构和功能调控元件,其编码的蛋白质具有发挥功能所必需的活性保守基序和一定的空间结构,表明rhPLD2应是一种具有一定生物学功能的异质性蛋白质。 相似文献
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牛β-酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中的表达调控 总被引:1,自引:0,他引:1
构建牛β 酪蛋白基因控制的人凝血Ⅸ因子 (hFⅨ )乳腺组织特异性表达载体pCⅨm,pCiⅨ ,pCⅨ和报告基因 (LacZ)乳腺表达载体 pCiLacZ ,pCLacZ ,利用Stearylamine(SA)阳离子脂质体包埋 5种载体 ,通过尾静脉注射的方法直接转染哺乳期母鼠的活体组织 .在DNA ,mRNA以及蛋白质水平对实验小鼠的检测结果表明 :转染处理后hFⅨ基因和LacZ基因在小鼠乳腺获得表达 ,hFⅨ蛋白在乳汁中的最高分泌表达量为 80 .2 8ng/mL ,其中 85 %以上已经羧基化并具有生物学活性 ;对 5种载体表达调控的研究证实牛β_酪蛋白基因 5′端 2 .0kb的片段能够驱动人凝血Ⅸ因子基因在小鼠乳腺组织中分泌表达 ,β_酪蛋白基因内含子 1能够提高Ⅸ因子基因在乳腺组织中的表达水平 ,并能影响该基因表达的组织特异性 ;和hFⅨcDNA相比 ,hFⅨ基因自身的内含子 1能够提高该基因在活体乳腺组织中的表达水平 3倍以上 相似文献